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用ＰＣＲ技术,从马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＣＶ１９８８／Ｃ株感染的鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）基因组ＤＮＡ中扩增出含起始密码子的ＭＤＶｐｐ３８基因同源物编码序列,在以Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的ｐｐ３８基因作为探针,在Ｓｏｕｌｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ中,该探针能识别该ＰＣＲ扩增片段。将该ＰＣＲ扩增片段在ＢａｍＨ Ｉ和ＰｓｔＩ位点克隆进ｐＵ１８质粒载体,酶切分析筛选到含ｐｐ３８基因同源物的重组质粒并进行了全序 相似文献
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番鸭细小病毒M91G27株VP3基因的克隆与序列测定 总被引：1，自引：0，他引：1
利用ＰＣＲ技术,从纯化番鸭细小病毒Ｍ９１Ｇ２７毒株鹅胚尿囊液中扩增出病毒结构多肽ＶＰ３基因。将该ＰＣＲ扩增片段克隆入ｐＵＣ１８质粒载体的ＨｉｎｃⅡ和ＳａｃⅠ位点之间,酶切分析筛选到含１．６ｋｂ基因片段的重组质粒ＭＰ１３。结果表明：该片段与国外已报道毒株核苷酸序列有９８．８％的同源性,氨基酸序列有９８．１％的同源性,证明该重组质粒是ＶＰ２基因的克隆。 相似文献
3.
将ＭＤＶＧＡ株ＢａｍＨＩ基因文库中含Ｉ３片段的质粒ｐＡＣＹＣ１８４和Ｋ３片段的质粒ｐＨＣ７９扩增，用碱裂解法抽提质粒后，利用相应的限制性内切酶切出目的基因片段，连接到合适的载体上，构建了完整的ＭＤＶＢ抗原基因克隆载体。通过内切酶分析，地高辛（ＤＩＧ）－探针原位杂交，ＤＮＡ序列预测，确认克隆的Ｂ抗原基因正确。 相似文献
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马立克氏病病毒gB基因的重组痘苗质粒构建 总被引：1，自引：0，他引：1
根据马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ｇＢ基因序列设计ＰＣＲ引物,以ｇＢ质粒为模板,扩增出ＭＤＶｇＢ基因５’端到３’端３８８ｂｐ的ＤＮＡ片段。用ＥｃｏＲⅠ和ＸｂａⅠ双酶消化ＰＣＲ产物,将其克隆入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ质粒,构建中间质粒Ⅰ;用ＸｂａⅠ消化ｇＢ质粒,切出ＭＤＶｇＢ基因ＸｂａⅠ片段,并正向克隆入中间质粒Ⅰ的ＸｂａⅠ位点,将ＭＤＶｇＢ基因１３７ｂｐ的ＰＣＲ产物与其ＸｂａⅠ片段正向连接,构建中间质粒Ⅱ用ＥｃｏＲⅠ调出中间质粒Ⅱ中的ＭＤＶｇＢ基因,正向克隆入痘苗病毒表达载体ｐ１６启动子下游,构建ＭＤＶｇＢ基因表达质粒ｐ１６－ＭＤＶｇＢＭＤＶｇＢ基因重组痘苗表达质粒的成功构建,为下一步进行重组病毒的构建及ＣＴＬ应答的深入研究奠定了基础 相似文献
5.
选用ＦＰＶ２８２Ｅ４株ＢａｍＨＩ７．３ｋｂ含非必需区片段，经ＸｂａⅠ酶切，将Ａ、Ｂ、Ｃ３个片段亚克隆于ＫＳ（—）质粒中，同时使Ｄ片段自身环化，获得ＫＳＦａ、ＫＳＦｂ、ＫＳＦｃ、ｐＵＣＦｄ４个重组克隆，经酶切鉴定证明亚克隆正确。为以ＦＰＶ基团组非必需区的ＢａｍＨＩ７．３ｋｂ片段中ＢｇｌⅡ片段所在区域构建重组载体质粒和体内重组表达外源基因的研究以及非必需区的核苷酸序列分析奠定基础 相似文献
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本文报道采用反转录酶—聚合酶链式反应，体外扩增芜菁花叶病毒（ＴｕＭＶ）外壳蛋白基因及其克隆，并在大肠杆菌中获得表达的结果；从抗州市郊区感病的油菜上分离到一株致病力极强的芜菁花叶病毒分离物，提纯后，经５０ｎｇ／ｍＬ蛋白酶Ｋ和０．５％ＳＤＳ处理，苯酚／氯仿和氯仿抽提两次，酒精沉淀，获得了纯化的病毒ＲＮＡ，该ＲＮＡ与ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）＿（１５）退火后，在ＡＭＶ反转录酶的作用下合成了单链ｃＤＮＡ，然后加入用以扩增ＴｕＭＶ－ＣＰ基因的上下游引物，３５个循环后，得到了一条长约０．８５ｋｂ的片段，将该片段克隆到ｐＵＣ１８质粒的ＳａｌⅠ限制性酶切位点，分析了限制性酶切图谱，分析表明该片段含有ＥｃｏＲⅠ和ＸｂａⅠ以及引物设计时带人的ＭｃｏⅠ三个酶切位点，该片段克隆到大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）原核表达载体ｐＫＫ２３３－２质粒的ＮｃｏⅠ和ＨｉｎｄⅡ位点后，经ＩＰＴＧ诱导，以该病毒的抗血清为第一抗体，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测该基因的表达产物，结果表明该基因的表达产物为ＴｕＭＶ－ＣＰ蛋白，因而认为所获得的扩增片段确为芜菁花叶病毒外壳蛋白基因。 相似文献
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用ＥｃｏＲＩ，ＰｓｔＩ内切酶将已分离和克隆的马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｄ（ｇＤ）基因从重组ｐＭｇＤ１８质粒中切出，克隆进反转录病毒质粒载体（ＲＣＡＳ）的连接质粒载体ｐＵＣＣｌａ１１２Ｎ的相同位点。用Ｃｌａｌ再将ｇＤ重组ｐＵＣＣｌａ１１２Ｎ中的ｇＤ基因切出，用ＣｌａＩ将ＲＣＡＳ载体切开，将ｇＤ基因构建于ＲＣＡＳ的ＣｌａＩ位点。通过原位杂交筛选重组ＲＣＡＳ，并结合酶切分析鉴定出ｇＤ插入方向正确的重组ＲＣＡＳ。用磷酸钙沉淀法将ｇＤ重组ＲＣＡＳ转染鸡胚成纤维细胞。收集转染后第９天的细胞上清，并用其感染原代ＣＥＦ，在感染后第４天和第６天收集ＣＥＦ。提取ＣＥＦ基因组ＤＮＡ，用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ（ｄｉｇ）标记ｇＤ基因片段作为探针，通过ｄｏｔｂｌｏｔ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测基因转移情况。结果表明，转染的重组ＲＣＡＳ不仅在细胞内变成有传染性的完整病毒，而且成功地将ｇＤ基因与病毒前ＤＮＡ一起整合在ＣＥＦＤＮＡ中 相似文献
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油菜PEP基因的克隆及PEP反义基因的构建 总被引：17，自引：0，他引：17
丙酮酸羧化酶（ Ｐ Ｅ Ｐ）是控制油菜蛋白质／油脂含量比例的一个关键酶⒚本研究用 Ｐ Ｃ Ｒ 法扩增出了 Ｐ Ｅ Ｐ 基因片段,并将其 克隆到 ｐ Ｂ Ｓ Ｓ Ｋ＋ 的 Ｓｍ ａ Ⅰ位点⒚ Ｄ Ｎ Ａ 序列分析表 明克隆片段 的长度为 ５３０ｂｐ,其序列与报道序列相同⒚将该 Ｐ Ｅ Ｐ基因 片段反向插入 ｐ Ｉ Ｇ１２１ 质粒,构建了带 Ｐ Ｅ Ｐ 反义基因的超级双元载体并进行油菜的转化,目前已获得转基因植株⒚ 相似文献
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IBDV超强毒HZ株VP2基因的克隆和真核表达质粒的构建 总被引：3，自引：0，他引：3
利用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），扩增克隆传染性法低囊病病毒超强毒（ｖｖＩＢＤＶ）ＨＺ株ＶＰ２基因，并ＶＰ２基因进行全序列测定、序列分析和聚类分析，同时将ＶＰ２基因与真核表达载体ｐｃＮＤＡ３相连接。结果克隆到ＶＰ２基因全序列长１３５６ｂｐ，分析表明ＨＺ株与欧洲超强毒株ＵＫ６６１高度相似，同时将ＶＰ２基因正向插入ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子下游，得到了ＶＰ２基因的真核表达质粒。为ＩＢＤＶ分子流行病学和基因工程疫苗的研究奠定了物质基础。 相似文献
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本文以鸡外周血单个核细胞总 Ｒ Ｎ Ａ 为模板,据已报道的８ 种哺乳动物 Ｉ Ｌ—１β核酸序列保守区设计合成１ 对引物,反转录合成ｃ Ｄ Ｎ Ａ 链,经 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增,回收扩增后的 Ｄ Ｎ Ａ 片段,用ｋｌｅｎｏｗ 酶处理,与 Ｐｕ ｃ１ ９ ／ Ｓｍ ａ Ｉ 连接构成重组质粒,转化宿主菌大肠杆菌 Ｊ Ｍ１ ０ ９ ,筛选出含有插入片段的重组质粒,用 Ｐ Ｃ Ｒ 及酶切分析鉴定,结果表明获得了带有鸡 Ｉ Ｌ－ １β片段的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 克隆;再经序列分析测定,得知此片段长为２７０ｂｐ ,与人及小鼠 Ｉ Ｌ—１β基因核苷酸序列同源性分别为４５ ％ 和３０ ％ 。 相似文献
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土壤电导率的快速测量(EM38)与数据的研究应用 总被引：1，自引：0，他引：1
土壤是构成生态系统的一个基本要素之一,是人类赖以生存的物质基础。对土壤环境监测分析至关重要,在土壤分析中含盐量是一个重要的综合指标。而土壤电导率是以数字形式表示土壤溶液的导电能力,反映了土壤的水盐状况。利用大地电导率仪在野外原位测定土壤电磁感应电导率,是一种快速简便测定土壤含盐量的新方法。介绍了EM38大地电导仪的原理及使用,并根据国内外研究进展,对EM38大地电导仪测得土壤电导率数据的研究应用进行了概括,并对其在未来研究中的应用进行了展望。 相似文献
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建立健康鸵鸟（Ｓｔｒｕｔｈｉｏｃａｍｅｌｕｓ）的血清全套生化参数,采用日本岛津ＣＬ ７２００型全自动生化分析仪,对３０只１～６月龄健康鸵鸟３８项血清生化参数进行测定．结果如下：（１）血清蛋白参数／ｇ·Ｌ－１：ＴＰ３１．８２,ＡＬＢ１５．４１,ＧＬＯ１６．１８（ＡＬＢ／ＧＬＯ０．９５）,Ａｐｏ Ａ１０．１２,Ａｐｏ Ｂ０．１４（Ａｐｏ Ａ１／Ａｐｏ Ｂ０．８０）;（２）血清酶参数／ｕ·Ｌ－１：ＡＬＴ１４．３,ＡＳＴ４５６．８（ＡＬＴ／ＡＳＴ０．３８）,ＧＧＴ３．４,ＬＤＨ１６０３．１,ＣＫ３９３６．８,ＣＫ ＭＢ１４３０．８,ＡＭＹ３４１５．１,ＡＫＰ５７１．７,ＨＢＤＨ３７３．３;（３）血清糖、蛋白质、脂类及其代谢产物参数／ｍｍｏｌ·Ｌ－１：ＧＬＵ９．４１,ＴＲＩ１．９７,ＢＵＮ０．９４,ＬＤＬ２．１９,ＨＤＬ１．５４,ＣＨＯ３．５８（ＨＤＬ／ＣＨＯ０．４１）;ＣＲＥ１２．６５μｍｏｌ·Ｌ－１（ＢＵＮ／ＣＲＥ０．０６３）,ＵＡ５０５．２４μｍｏｌ·Ｌ－１,ＴＢＡ３７．１μｍｏｌ·Ｌ－１,ＴＢＩＬ５．３２μｍｏｌ·Ｌ－１,ＤＢＩＬ３．２１μｍｏｌ·Ｌ－１,ＩＢＩＬ２．０８μｍｏｌ·Ｌ－１,ＴＴＴ４．１２ｕ;（? 相似文献
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《河北农业大学学报》2015,(5)
小麦抗叶锈基因Lr38在我国高抗叶锈病,直到目前该基因的分子标记开发较少,开发其分子标记对于该基因的研究与利用具有重要意义。利用594对SRAP-SSR(eSSR)引物组合对以Thatcher为背景小麦抗叶锈近等基因系材料TcLr38和Thatcher进行PCR扩增。引物组合ARBI8-Xcwem8R和ARBI2-Xgwm497F在TcLr38中分别扩增出300和400bp多态性条带。利用47个小麦抗叶锈近等基因系进一步检测,引物ARBI8-Xcwem8R仅在TcLr38中扩增出特异条带。经TcLr38×Thatcher F2代分离群体验证,该标记与Lr38遗传距离较远。对该片段克隆测序,片段长度为277bp,BLAST比对与GenBank中所收录序列无相似性,该片段为与Lr38相关的新的序列。 相似文献
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应用EM38电磁感应电导仪测量法调查了罗布泊“耳纹”地区盐壳电导值，对干盐湖沉积物采取不同尺度和不同空间分辨率的取样与测量。研究结果表明，盐壳土壤EM38电导的各特征参数值均表现出明显的空间变异性，“耳纹”的形成和电磁感应电导所表征的物理量存在较好相关性：“耳纹”黑色区域电导值较高，白色区域电导值较低。 相似文献
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Ge B Gram H Di Padova F Huang B New L Ulevitch RJ Luo Y Han J 《Science (New York, N.Y.)》2002,295(5558):1291-1294
Phosphorylation of mitogen-activated protein kinases (MAPKs) on specific tyrosine and threonine sites by MAP kinase kinases (MAPKKs) is thought to be the sole activation mechanism. Here, we report an unexpected activation mechanism for p38alpha MAPK that does not involve the prototypic kinase cascade. Rather it depends on interaction of p38alpha with TAB1 [transforming growth factor-beta-activated protein kinase 1 (TAK1)-binding protein 1] leading to autophosphorylation and activation of p38alpha. We detected formation of a TRAF6-TAB1-p38alpha complex and showed stimulus-specific TAB1-dependent and TAB1-independent p38alpha activation. These findings suggest that alternative activation pathways contribute to the biological responses of p38alpha to various stimuli. 相似文献
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