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1.
《中国畜牧兽医》2020,(8)
为进一步完善中国大肠杆菌菌体微量凝集试验定型血清库,改良微量凝集试验用大肠杆菌O抗原定型血清的制备工艺,本试验选取大肠杆菌O50、O60、O117、O131血清型进行定型血清制备方法的探究。首先用大肠杆菌不同血清型的参考菌株制备灭活抗原,而后多次免疫家兔以采血获得粗血清,用微量凝集试验的方法确定不同粗血清的交叉凝集素及凝集效价,再通过交叉凝集素吸收法结合血清稀释法消除非特异性凝集,最终研制出特异性良好的微量凝集试验用大肠杆菌O抗原定型血清。本研究确定了大肠杆菌O50、O60、O117、O131定型粗血清的主要交叉凝集素,最终成功研制出特异性良好的微量凝集试验用大肠杆菌O50、O60、O117、O131定型血清共4种,凝集效价在1∶256至1∶2 048之间,其中微量凝集试验用大肠杆菌O50、O60定型血清无交叉凝集素,为单因子定型血清,微量凝集试验用大肠杆菌O117、O131定型血清存在1～2种非特异性的交叉凝集素O14和O107。本研究作为大肠杆菌O抗原定型血清制备工艺摸索过程中的重要部分,为完善中国大肠杆菌菌体微量凝集试验定型血清库,进一步改良微量凝集试验用大肠杆菌O抗原定型血清的制备方法提供了重要理论依据。 相似文献
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大肠杆菌菌体O抗原单因子定型血清的制备 总被引：1，自引：0，他引：1
为研制大肠杆菌菌体O抗原单因子定型血清,以大肠杆菌参考菌株CVCC1345(O2)、CVCC1350(O7)、CVCC1414(O74)为菌种制备抗原免疫家兔,获得了定型原血清,并通过比较不同免疫程序及剂量优化了定型原血清的制备工艺。进而按照优化后的定型原血清制备工艺,以大肠杆菌参考菌株CVCC1343(O1)、CVCC1345(O2)、CVCC1350(O7)、CVCC1405(O64)、CVCC1414(O74)、CVCC1439(O100)、CVCC1442(O103)、CVCC1455(O116)、CVCC1466(O128)、CVCC3801(O154)为菌种制备抗原免疫家兔,获得了10种O抗原型定型原血清。将定型原血清分别与180种微量凝集试验抗原逐一反应,明确各原血清与非特异性抗原的交叉凝集价,通过用吸收抗原对原血清进行吸收及稀释的方法消除非特异性凝集,最终制备成大肠杆菌菌体O抗原单因子定型血清。血清质量评价结果表明,新制备的单因子定型血清性状为无色、淡黄色或黄色澄明液体,个别有少量絮状物;无菌生长;特异性良好;凝集效价为1︰2。研究结果显示,制备的大肠杆菌O抗原单因子定型血清具有较好的特异性,可以用于对临床分离大肠杆菌进行O抗原血清型鉴定。 相似文献
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5种大肠杆菌O抗原定型血清的制备 总被引：1，自引：0，他引：1
《中国兽医杂志》2019,(5)
本研究以大肠杆菌参考菌株CVCC1369(O26)、CVCC3800(O153)、CVCC1489(O157)、CVCC3739(O159)、CVCC3807(O163)为菌种制备免疫抗原并免疫家兔,获得5种大肠杆菌O抗原定型原血清,而后制备多种吸收抗原以消除5种原血清的非特异性凝集素。通过微量凝集试验的方法,确定各血清的凝集价。最终确定了5种大肠杆菌O抗原定型血清的制备方法,为进一步改进大肠杆菌O抗原定型血清的制备工艺提供了思路和依据。 相似文献
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大肠杆菌O抗原定型血清标定用抗原的制备 总被引：1，自引：0，他引：1
为研制用于标定大肠杆菌菌体抗原(O抗原)单因子定型血清效价的抗原,以大肠杆菌参考菌株CVCC1345(O2)、CVCC1350(O7)、CVCC1414(O74)为菌种,经条件优化确定了抗原制备的工艺。检测结果表明,当菌液调整至OD_(600 nm)值为0.147±0.026时,各型抗原的浓度为1×10~9CFU/m L,将其热处理后制备成反应抗原。按此吸光值各自制备3批抗原,3批抗原与血清的凝集价均分别一致,分别达到2~(11)(O2)、2~(12)(O7)及2~9(O74)。用180种大肠杆菌O抗原单因子定型血清对制备的抗原进行检测,制备的抗原仅与其对应型的血清发生特异性反应,与其余179种血清均不发生反应。研究结果显示,制备的抗原具有较好的稳定性及特异性,可以用于大肠杆菌菌体单因子定型血清效价的标定。 相似文献
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为研制用于标定大肠杆菌菌体抗原(O抗原)单因子定型血清效价的抗原,以大肠杆菌参考菌株CVCC1345(O2)、CVCC1350(O7)、CVCC1414(O74)为菌种,经条件优化确定了抗原制备的工艺。检测结果表明,当菌液调整至OD600 nm值为0.147±0.026时,各型抗原的浓度为1×109CFU/m L,将其热处理后制备成反应抗原。按此吸光值各自制备3批抗原,3批抗原与血清的凝集价均分别一致,分别达到211(O2)、212(O7)及29(O74)。用180种大肠杆菌O抗原单因子定型血清对制备的抗原进行检测,制备的抗原仅与其对应型的血清发生特异性反应,与其余179种血清均不发生反应。研究结果显示,制备的抗原具有较好的稳定性及特异性,可以用于大肠杆菌菌体单因子定型血清效价的标定。 相似文献
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研制牛种布鲁氏菌A因子血清和羊种布鲁氏菌M因子血清,用于光滑型布鲁氏菌特异性种属鉴定。将灭活牛种布鲁氏菌2308株及羊种布鲁氏菌16M株免疫1.5~2 kg家兔各5只制备高免血清。对高免血清采用抗原交叉吸附的方法,制得A、M因子血清,分装冻干后置-20℃保存。微量试管凝集试验结果显示:研制的A因子血清对16M抗原在1∶2.5时无凝集现象,对2308抗原凝集价为1∶320;研制的M因子血清对2308抗原在1∶2.5时无凝集现象,对16M抗原凝集价为1∶160。玻片凝集试验结果显示:研制的A、M因子血清对异种抗原无凝集现象。试验表明,研制的A、M因子血清具有特异性强、效价高的特点,可辅助光滑型布鲁氏菌特异性种属鉴定。 相似文献
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用3种分型方法研究鸭疫里默氏菌的血清型 总被引：6，自引：0，他引：6
用玻片凝集试验、试管凝集试验和琼脂扩散沉淀试验3种方法，检测了鸭疫里默氏菌的19个参考菌株和部分分离株与同型和异型抗血清的反应。结果表明，3种分型方法具有很好的相关性，但在检测异型菌株之间的交叉反应时表现出不同。玻片凝集试验适于对大量分离株的快速筛选，但不能作出准确定型。以各型参考菌株为参照，根据试管凝集试验可将被检菌株分型，但当分离株与一个以上血清型的抗血清产生差异较小的凝集效价时，则难以定型。琼扩试验也适合于对分离株进行进一步检测，但要求制备较高效价的抗血清。对血清进行吸收可消除3种分型试验中的所有交叉反应，并制备出单因子血清。但这些单因子血清只是相对于已知血清型具有特异性，某些分离株虽然只与某型单因子血清发生凝集反应，仍可能属于新的血清型或某个已知型的亚型。 相似文献
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为建立一种快速鉴定O8、O9和O89血清型大肠杆菌的三重PCR方法，根据GenBank登录的3种血清型大肠杆菌O抗原合成基因簇序列，设计3对检测引物，通过优化反应条件建立三重PCR方法。结果：经条件优化后的三重PCR方法可有效鉴别O8、O9和O89血清型的大肠杆菌，具有良好的特异性，对其他肉羊养殖场常见血清型的大肠杆菌和致病菌无特异扩增条带；敏感性检测显示，三重PCR方法对O8和O89血清型的最小检出量为10 pg/μL,对O9血清型的最小检出量为100 pg/μL;采用该方法对临床分离的大肠杆菌进行检测，结果与传统血清凝集方法一致。综上，本研究建立的三重PCR方法可快速、准确、特异地对O8、O9和O89血清型大肠杆菌进行检测，为养殖及肉品加工环节大肠杆菌的流行病学研究提供了更加快捷的检测手段。 相似文献
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微量凝集试验对鸡大肠杆菌O抗原血清型鉴定的研究及初步应用 总被引：2，自引：0，他引：2
为改进大肠杆菌血清型鉴定方法,用５株标准菌株在９６孔Ｕ型板上进行微量凝集试验,优选了反应及观察条件：每孔中加５０μＬ菌体抗原（浓度为１．５×１０９－２．０×１０９个菌／ｍＬ）和５０μＬＯ抗原单因子血清（稀释度从１／１０－１／８０）混合,于３７℃反应１．５－２ｈ,阳性结果可在黑色背景上清晰观察到片状凝集。试验各株均与原血清型一致。用此法对１７株来自山东某地的鸡大肠杆菌进行了血清型鉴定,结果Ｏ７８为５株,Ｏ３６５株,Ｏ１３１４株,Ｏ７０３株,与以前用常规方法对该地区菌型鉴定结果相符。 相似文献
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为建立牛源大肠杆菌-秀丽隐杆线虫致病模型，本研究从广西南宁、桂林、柳州等地区收集的牛病料中分离出13株大肠杆菌，继而对这些大肠杆菌进行血清学鉴定及小鼠、秀丽隐杆线虫的致病性试验。采用玻片凝集法鉴定大肠杆菌的O血清型，并将13株大肠杆菌培养液以3.0×109 CFU/mL、0.2 mL/10 g体重给小鼠腹腔注射，同时分别喂食N2野生型秀丽隐杆线虫。结果显示，大肠杆菌的O血清型为O127、O126和O44，其中O126为优势血清型（4/13）。致病性结果显示，有11株大肠杆菌能使小鼠致死（致死率为40%~100%），2株大肠杆菌对小鼠没有致死性（致死率为0）。对小鼠有强致病性的大肠杆菌，对线虫的致死率也较高，死亡率在第3~6天最为显著，半数致死时间为3~4.5 d，最长存活时间为9 d；对小鼠不致死的两株大肠杆菌对线虫的致死率也较低，线虫死亡率下降趋势缓慢，半数致死时间为5~6 d，最长存活时间为10~11 d。肠道细菌计数结果显示，大肠杆菌在线虫体内的数量与时间呈线性关系，大肠杆菌不断破坏线虫的免疫系统，从而导致了线虫的死亡。本研究结果表明，大肠杆菌对线虫和小鼠的致病力试验结果一致，说明成功建立了牛源大肠杆菌-秀丽隐杆线虫致病模型，为牛病防治与临床用药提供了依据。 相似文献
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为研究鸭大肠杆菌的致病性及相关生物特性,本试验从西昌市某规模化鸭场采集病料,通过传统分离培养及理化性质鉴定,分离得到27株鸭致病性大肠杆菌。对27株鸭致病性大肠杆菌进行血清型鉴定、药敏试验、相关毒力基因检测。血清型鉴定结果显示,优势血清型为O119、O86、O126、O142和O44,占分离株55.56%。血清型O119占27株鸭致病性大肠杆菌的40.74%,为该鸭场流行的致病血清型。对20种兽医临床常用药物的药敏试验结果显示,27株鸭致病性大肠杆菌均对阿米卡星、庆大霉素和多黏菌素B敏感,对头孢曲松等10种药物较敏感,对利福平等5种药物耐受。大肠杆菌相关毒力基因检测结果显示, iutA、hlyF、Iss、IroN、ompT、fyuA、irp 2、Tsh及papA基因携带率均为100.00%, fimC基因携带率59.26%, K 99基因携带率7.40%。各项研究结果为有效防控鸭大肠杆菌病提供了重要科学依据,并为大肠杆菌深入研究奠定了基础。 相似文献
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【目的】探究荣昌、大足和隆昌三地鸭大肠杆菌分离株的O抗原、毒力基因及耐药性。【方法】将2014年—2021年鸭病料中分离得到的107株细菌在无菌条件下接种于麦康凯培养基中划线进行培养纯化,通过16S rDNA基因扩增测序和生化试验进行细菌鉴定,采用PCR技术对O抗原和16种毒力基因进行检测,采用Kirby-Bauer纸片扩散法进行药敏试验。【结果】107株分离株鉴定为大肠杆菌;O抗原鉴定试验鉴定出9种O抗原,其中优势抗原为O78(37.00%)、O7(25.00%),O121和O145(均为15.00%),并检测到5株O78+O145和O7+O145融合株;共检测出11种毒力因子,其中强致病性毒力基因有Tsh基因(检出率为25.23%)、fyuA基因(检出率为31.78%)、estB基因(检出率为31.78%)、Vat基因(检出率为2.80%)、iucA基因(检出率为44.56%)。3种毒力基因ompA、yijP和ibeB的携带率最高,分别为100.00%、96.26%和85.98%;药敏试验结果表明分离株对氨基糖苷类药物、米诺环素和多黏菌素最为敏感,对大环内酯类药物和克林霉素耐药,分... 相似文献
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DENG Bo-xiong LIU Qing DENG An-yuan LI Wen-wen SONG Zhi-gang YU Qiong CHEN Guang-fen LIU Shu-huang LIU Ya-gang 《中国畜牧兽医》2016,43(1):235-241
To analyze the pathogenicity and biological characteristics of duck E.coli, 27 strains of duck pathogenic E.coli were isolated from dead ducks with the typical characterize of colibacillosis by isolation and culture, physical and chemical properties identification in Xichang city.O serotype identification, drug sensitivity test and virulence associated genes were detected in 27 strains of duck pathogenic E.coli.The result showed that the predominant serotypes were O119, O86, O126, O142 and O44, which accounted for 55.56%.O119 was the epidemic and pathogenic serotype in this farm, which accounted for 40.74% in 27 strains of duck pathogenic E.coli.Through the drug sensitivity test of 20 kinds of clinical commonly used drugs, we found that all strains were sensitive to amikacin, gentamicin and polymyxin B.Besides, 10 drugs(ceftriaxone, etc) were lightly sensitive.However, these strains were resistant to 5 kinds of drugs(rifampicin, etc).The detection result of PCR about virulence associated genes indicated that the positive of iutA, hlyF, Iss, IroN, ompT, fyuA, irp 2, Tsh and papA genes were 100.00%, fimC and K 99 genes were 59.26% and 7.40%, respectively.The results provided an important reference for effective prevention and control of duck colibacillosis, and laid the foundation for further study of E.coli. 相似文献
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D Ciosek M Truszczy&#x;ski M Jagodzi&#x;ski 《Comparative immunology, microbiology and infectious diseases》1983,6(4):313-319
Different vaccines against Escherichia coli diarrhea of piglets were applied parenterally in pregnant sows at an industrial fattening farm. The following vaccines were used: vaccine No. 1 with non-complete Freund's adjuvant. Tween 80 and Arlacel A, comprising O149:K91,K88; O139:K82; O8:K87,K88; O141:K85,K88; and O64:K? E. coli serotypes; vaccine No. 2 with paraffin oil instead of Freund's adjuvant, comprising the same E. coli serotypes as the vaccine No. 1; stable specific vaccine with 10% aluminium hydroxide, based on E. coli serotypes most frequently isolated from piglets which died at the farm (O149:K91,K88; O8:K87,K88; O20:K17; O64:K?); Gletvax K88 (Wellcome) and NOBI-VAC LT-K88 (Intervet International). The number of piglets which died up to the moment of weaning in comparison to the number of born ones was considered as an indicator of acquired protection. It was found that the most effective in conferring protection against E. coli diarrhea were: vaccine No. 1 and NOBI-VAC. The differences in the mortality rate between piglets originating from sows vaccinated with these vaccines and those from unvaccinated ones were statistically significant (P < 0.05). No significant differences were noted between controls and animals vaccinated with the remaining vaccines. 相似文献
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Our objective was to generate hypotheses about associations between management, climate, and the presence of Escherichia coli O157 in feedlot–cattle water tanks and in feedlot–cattle feed. Water samples from 710 tanks on 73 feedlots, and feed-samples from a subset of 504 pens on 54 feedlots, in four US states were tested for E. coli O157. Management and climate factors were ascertained by survey and observation. Escherichia coli O157 were isolated from 13% of the water tanks and at least one water tank was positive on 60% of the feedlots. The factors significantly associated with E. coli O157 in water were greater percentage of cattle shedding E. coli O157 in faeces within the same pen, higher concentration of total E. coli in the water, lack of the clarity of the water, the use of fly traps, the reported frequency of rodent sightings in the pen or alley area, and the weather at the time of sampling. Escherichia coli O157 were isolated from 14.9% of the feed samples obtained from the feedbunks. Factors positively associated with E. coli O157 in feed were higher heat index at the time of sampling, the presence of cottonseed meal in the ration, and the feedlot location (state). Coliform counts in feed, presence of E. coli O157 in water tanks and faecal prevalence of E. coli O157 were not associated with the presence of E. coli O157 in feed. 相似文献
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为初步研究猪源大肠杆菌O157:H7 (E.coli O157:H7)对氟苯尼考耐药性的产生和消除机制,本研究采用亚抑菌浓度体外耐药诱导的方法将两株猪源大肠杆菌O157:H7诱导成氟苯尼考高度耐药菌株,采用无氟苯尼考压力下连续传代培养的方法将获得的氟苯尼考耐药菌株的氟苯尼考耐药性消除,检测耐药诱导菌和耐药消除菌对抗菌药物的敏感性,并检测菌株质粒携带的耐药基因。结果显示,经氟苯尼考耐药诱导,猪源大肠杆菌O157:H7对氟苯尼考、阿莫西林、头孢唑啉、头孢拉定和头孢噻吩由敏感变为耐药,对头孢噻肟的敏感性由敏感变为中介,对氧氟沙星、环丙沙星和阿奇霉素由中介变为耐药;而经耐药消除后,菌株恢复对上述药物的敏感性;在菌株的质粒中检测到氟苯尼考耐药基因、喹诺酮类耐药基因和β-内酰胺酶基因,与耐药表型相符。结果表明,在氟苯尼考压力的长期存在下,猪源大肠杆菌O157:H7对氟苯尼考产生耐药,且对青霉素类、头孢类和喹诺酮类药物产生交叉耐药,在去除氟苯尼考压力下连续培养,可消除菌株的部分耐药性。 相似文献
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Our objective was to generate hypotheses for potential on-farm control strategies for Escherichia coli O157 by identifying associations between management practices and climate, and the presence of E. coli O157 in feedlot cattle. Faeces were obtained from 10,622 cattle in 711 pens on 73 feedlots between May and August 2001. Management and climate information was obtained by questionnaire and observation at the time of sampling. The prevalence of E. coli O157 was 10.2% at the sample level, 52.0% at the pen-level, and 95.9% at the feedlot-level. The factors associated with the presence of E. coli O157 in cattle faeces were the frequency of observing cats in the pens or alleys (most common when observed daily), the presence of E. coli O157 in the water tanks (positive association), the historical use of injectable mass medication (positive association), the use of antibiotics in the ration or water (negative association), the wetness of the pen, number of cattle in the pen (negative association), wind velocity (positive association), and height of the feed bunk (positive association). 相似文献
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甜叶菊绿原酸增强大肠杆菌感染蛋雏鸡免疫力研究 总被引：1，自引：0，他引：1
旨在评价甜叶菊绿原酸增强人工腹气囊感染大肠杆菌O78蛋雏鸡免疫力的作用效果,为功能性抗生素替代品研发提供基础参数支持。本试验随机将1日龄、体重无显著差异的健康海兰蛋鸡360只分为6组：空白对照组（C）、大肠杆菌O78处理组（EC0）、1.0 g·L-1杜仲素+大肠杆菌O78处理组（ED1）、1.0 g·L-1甜叶菊绿原酸+大肠杆菌O78处理组（EC1）、2.0 g·L-1甜叶菊绿原酸+大肠杆菌O78处理组（EC2）、4.0 g·L-1甜叶菊绿原酸+大肠杆菌O78处理组（EC4）,预饲7 d后开始正式试验。第7天时将大肠杆菌O78通过腹气囊感染蛋雏鸡,饮水投喂药物,每天1次,连用3 d。随后通过ELISA法检测血清IL-1β、IL-2、IL-6、IgM、IgA、TNF-α水平;RT-qPCR检测空肠和回肠IL-1β、IL-2、TNF-α、Claudin-1和ZO-1基因表达;高通量测序分析盲肠内容物微生物种类。结果显示：1）腹气囊感染大肠杆菌O78显著增加了蛋雏鸡死亡率（P<0.05）,而甜叶菊绿原酸处理组（EC2、EC4）蛋雏鸡的死亡率显著降低（P<0.05）。2）甜叶菊绿原酸对大肠杆菌O78感染蛋雏鸡血清IgA和IgM含量有提高趋势,可不同程度降低血清炎性因子含量,其中EC1、EC2、EC4组血清TNF-α含量显著降低（P<0.05）;EC2显著降低大肠杆菌O78感染蛋雏鸡回肠促炎细胞因子IL-1β、IL-2、TNF-α的基因表达（P<0.05）。3）甜叶菊绿原酸可促进蛋雏鸡空肠紧密连接蛋白基因表达,改善腹气囊感染大肠杆菌O78对肠道屏障的损伤。4）腹气囊感染大肠杆菌O78导致鸡肠道特有OTUs增加,增加肠道拟杆菌门、变形菌门和梭杆菌门的相对丰度,降低厚壁菌门的相对丰度;而甜叶菊绿原酸处理组（EC2）蛋雏鸡盲肠厚壁菌门的相对丰度升高,拟杆菌门和变形菌门的相对丰度降低。甜叶菊绿原酸可增强腹气囊感染大肠杆菌O78蛋雏鸡机体的免疫功能,抵御大肠杆菌O78对蛋雏鸡的侵袭,其中应用剂量为2.0 g·L-1甜叶菊绿原酸的效果较好。这预示绿原酸具有抗生素替代品的功效,其对大肠杆菌感染蛋雏鸡机体免疫力的积极作用可能是通过调控免疫相关基因和维持盲肠微生物菌群稳态达到的,但其作用机制仍需深入的研究。 相似文献
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旨在了解新疆地区腹泻仔猪源大肠杆菌的系统进化分群、血清型及耐药性。本研究对154份腹泻仔猪粪便样品进行大肠杆菌的分离鉴定,采用多重PCR方法对分离株进行系统进化分群和O血清型鉴定,通过K-B纸片法对其进行药物敏感性检测并通过PCR方法进行耐药基因检测。结果显示：共分离到154株大肠杆菌,包括ETEC(n=24)、STEC(n=21)、EPEC(n=1)、EPEC/STEC(n=2)、ETEC/STEC(n=1)和ETEC/EPEC(n=1),其他104株。系统进化分群显示,多数菌株属于B1(37%)和A群(31%)。定型菌株44株,分别属于10种血清型,以O154、O12、O8、O141和O175为主要流行血清型。151株(98%)为多重耐药菌,对复方新诺明、四环素、氨苄西林、链霉素和氯霉素的耐药率为81%～100%,对阿莫西林/克拉维酸、头孢噻肟、庆大霉素、头孢曲松、环丙沙星和阿米卡星的耐药率为31%～66%,对左氧氟沙星、多黏菌素B、头孢他啶、头孢吡肟、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦和亚胺培南的耐药率为1%～19%。耐药基因tetA(88%)、tetG(60%)和cmlA(4... 相似文献