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用双抗体夹心ELISA法检测鸡病毒性关节炎病毒的研究 总被引：3，自引：0，他引：3
应用鸡病毒性关节炎病毒Ｕ．Ｃｏｍ Ｓｕｎ株，建立了检测鸡病毒性关节炎病毒抗原的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法。用该法检测三组接毒鸡的关节液，接毒后３天即可检出阳性，阳性率为５８．３％；发病严重的４￣１１天阳性检出率达９５．７％；１４天阳性率为５０％；１７天阳性率为３１．３％；２０天以后则全部为阴性。用该法对大肠杆菌、葡萄球菌、败血支原体、滑膜支原体、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、传染性脑脊髓炎病毒进行检 相似文献
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应用单克隆抗体夹心酶联免疫吸附试验检测兔出血症病毒 总被引：3，自引：0，他引：3
应用建立的单克隆抗体夹心酶联兔疫吸附试验（ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ）,检测了人工感染兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）ＤＪＲＫ细胞毒、肝毒的兔以及自然感染ＲＨＤＶ的兔的组织样品。结果表明,感染死亡兔的肝、脾、肾、骨髓样品病毒抗原的检出率为１００％,淋巴结和肌肉的检出率分别为９７．５％和７９．５％。ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ能检出肌肉中血凝试验不能检出的ＲＨＤＶ抗原。此外,还用ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ检测了肝毒人工感染兔血中ＲＨＤＶ的动态,并对１０份兔出血症脏器灭活苗的效价作了滴定。 相似文献
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鸡白血病病毒抗原ELISA试剂盒的研制和应用 总被引：5，自引：2，他引：3
以双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ）为基本原理，成功地研制出鸡白血病病毒抗原ＥＬＩＳＡ试剂盒，该试剂盒与国外同类试剂盒相比，具备相同的特异性和敏感性，对ＲＡＶ－１纯化样品的最小检出量可达０．７８ｕｇ／ｍｌ，且敏感性高于直接补体结合试验。经初步应用发现，我国商品种鸡群ＡＬＶ阳性率为０．７－１４％，在部分ＳＰＦ鸡群中未检出阳性鸡。 相似文献
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禽流感病毒重组核蛋白ELISA诊断技术的研究 总被引：48，自引：1，他引：47
用表达禽流感病毒（ＡＩＶ）核蛋白基因的杆状病毒感染Ｓｆ９昆虫细胞。以其表达产物制备抗原,建立了以杆状病毒系统表达的ＡＩＶ核蛋白为抗原的禽流感间接酶联免疫吸附试验诊断技术（ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ）。其抗原最适包被量为０．６μｇ／孔,等检血清最适稀释度为１：２００,酶标抗体使用浓度为１：１０００。根据对１４０份ＳＰＦ鸡血清检测结果的统计分析,确定其判定标准为ＯＤ均为阴性;检测Ａ型ＡＩＶ１５个不同亚型（Ｈ１￣Ｈ１５）毒株的特异性血清均为阳性;对人工接种ＡＩＶ的ＳＰＦ鸡第３天即能检出抗体,到第１６２天试验结束时检测仍为阳性。其批内和批间重复试验的变异系数分别在２．９％￣７．２％和３．４％￣９．８％之间。对３１３８份鸡血清进行监测,ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ（ＡＩＶ－ＥＬＩＳＡ）、琼脂扩散 相似文献
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利用常规法建立分泌抗鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）的单抗细胞株，选其中特异性强、稳定性好、分泌抗体效价高的两株单抗２（１）和２（４），用于建立单抗夹心ＥＬＩＳＡ法检测ＩＢＶ，该方法仅与ＩＢＶ，呈阳性反应，而与鸡新城疫病毒、鸡传染性法氏囊炎病毒、禽腺病毒、鸡传染性喉气管炎、鸡支原体等病原体均呈阴性反应。１４日龄ＳＰＦ鸡接种ＩＢＶ后，用本方法对其两周内的口腔棉拭样品进行跟踪检测，结果检出率为８０％。将 相似文献
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鸡传染性喉气管炎王岗株病毒（ＩＬＴＶ）经ＳＰＦ鸡肾细胞增殖，差速离心及蔗糖密度梯度离心纯化，电镜观察。以纯化的病毒４次免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，按常规方法进行细胞融合，采用有限稀释法克隆，经ＥＬＩＳＡ筛选出３株（８Ｅ２、１３Ｇ６、９Ｃ４）分泌抗ＩＬＴＶ特异ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞。特异性试验表明它们与鸡的传染性支气管炎、痘病毒、新城疫病毒、马立克氏病病毒、白血病病毒及鸡肾细胞均无交叉反应。在获得的三株单抗建立单抗夹心－ＥＬＩＳＡ法基础上，首次建立了快速检测喉气管炎感染的ＥＬＩＳＡ试剂盒，对ＩＬＴＶ纯病毒的最小检出量为３１．０ｎｇ／ｍｌ病毒蛋白。以该试剂盒对黑龙江省哈尔滨地区、辽宁省沈阳、大连地区、山东省济南及上海等地６５６５份喉部株拭样品进行检测，共检出阳性１１５４头份。对部分ＥＬＩＳＡ阳性和阴性样品进行平行病毒分离，结果阳性符合率为１００％（１１２／１１２），阴性符合率为９５％（３８／４０）。研究表明，该试剂盒特异性强，重复性好。该方法的建立为鸡群疫病监测，免疫鸡群抗体水平检测提供了新的可靠方法。 相似文献
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单抗介导的斑点ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
用群特异性的单克隆抗体作第一抗体,用酶标兔抗体ＩＢＶＩｇＧ作第二抗体,建立夹心法Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ程序检测鸡传染性支气管炎病毒抗原。试验表明,本程序检测ＩＢＶ抗原高度敏感性和特异性。最低抗原检出量为０．５μｇ,约１００个气管环半数感染量（１００ＴＯＣＩＤ５０）,阳性检出率为９６％。 相似文献
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抗鸡传染性喉气管炎病毒单克隆抗体的研制及在诊断上的应用 总被引：2，自引：1，他引：1
鸡传染性喉气管炎王岗株病毒（ＩＬＴＶ）经ＳＰＦ鸡肾细胞增殖，差速离心及蔗糖密度梯度离心纯化；电镜观察，以纯化的病毒４次免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，按常规方法进行细胞融合，采用有限稀释法克隆，经ＥＬＩＳＡ筛选出３株（８Ｅ２、１３Ｇ６，９Ｃ４）分泌抗ＩＬＴＶ特异ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞，特异性试验表明经闪与鸡的传染性支气管炎，痘病毒，新城疫病毒马立克氏病病毒，白血病病毒及鸡肾细胞均无交叉反应。在获得三株单抗建立单 相似文献
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用抗传染性氏囊病毒单克隆抗体建立夹心阻断ELISA检测鸡血清抗体及 … 总被引：1，自引：0，他引：1
朱红 《动物科学与动物医学》2000,17(5):51-52
用酶标记抗传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体，建立夹心阻断ＥＬＩＳＡ，检测ＩＢＤＶ鸡血清抗体。用Ｄ７８细胞毒免疫２４日龄的雏鸡，每周采血一次，共４次，用夹心阻断ＥＬＩＳＡ、微量细胞中和试验（ＶＮ）、琼脂扩散试验（ＮＧＰ）检测鸡血清抗体，结果表明：夹心阻断ＥＬＩＳＡ同ＶＮ之间具有较高的相关性（ｒ＝０．８１２６），与ＡＧＰ的相关性较低（ｒ＝０Ｘ．７５７５）。 相似文献
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异源抗原在建立ELISA检测传染性法氏囊病毒抗体中的应用 总被引：4，自引：0，他引：4
本文报告采用ｖｅｒｏ细胞增殖的ＩＢＤＶ抗原建立了间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），用于定量检测鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）抗体。该法快速、敏感性高、特异性强、重复性好。同时，通过３０份血清样品ＥＬＩＳＡ效价（ＥＴ）的对数值（ｌｏｇＥＴ）与血清Ｐ／Ｎ值（待检血清ＯＤ值与阴性血清ＯＤ值之比）的线性回归分析，得直线方程ｙ＝３．０５８９＋０．０７３９ｘ（ｒ＝０．９１７４），从而血清样品的ＥＴ可通过血清单一稀释度的Ｐ／Ｎ值来计算。用不同来源抗原作ＥＬＩＳＡ表明，从ｖｅｒｏ细胞增殖的抗原比从鸡胚成纤维（ＣＥＦ）细胞增殖的抗原可提高检测血清ＯＤ值近２０％，表现出异源抗原具有更高的特异性 相似文献
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鸡传染性喉气管炎ＥＬＩＳＡ诊断方法研究──ＳＰＡ─ＥＬＩＳＡ检测ＩＬＴＶ抗原方法的初步建立彭万强，黄承锋，吕敏娜，孔庆飞，朱治远，幸桂香，杨海金（广东省农科院兽医研究所广州．５１０６４０）葡萄球菌Ａ蛋白（ＳａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓＰｒｏｔｅｉｎＡ─Ｓ... 相似文献
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快速检测鸡新城疫病毒的聚乙二醇单抗夹心ELISA试验的建立和应用 总被引：9，自引：2，他引：7
以抗鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）单抗夹心ＥＬＩＳＡ试验为基础，在６０００，建立了ＰＥＧ－ＥＬＩＳＡ法，使用此法检测临诊样品，与单抗夹心ＥＬＩＳＡ相比，时间缩短７０分钟且提高了ＯＤ４９０值，易于识别。结果表明，ＰＥＧ－ＥＬＩＳＡＩ法具有实际应用价值。ＰＥＧ能加强抗原－抗体反应的速率和强度，这种效应在固相夹心ＥＬＩＳＡ第二步表现尤其明显。ＰＥＧ的这种非特异性效应对于检测其它抗原或抗体的ＥＬＩＳＡ试验可能具有 相似文献
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用制备的抗鸡ＩｇＧＭｃＡｂ－ＨＲＰ作为免疫试剂，以ＩＢＤＶ的高免阳性鸡血清作为抗体，用间接ＥＬＩＳＡ法检测经ＩＢＤＶ强毒攻击的各脏器含毒情况，同时与ＡＧＰ法进行比较。结果表明两种方法具有良好的平行关系，间接ＥＬＩＳＡ法比ＡＧＰ法更为敏感；攻毒鸡的法氏囊带毒最多，而在脾、胸腺、肾中均未检出病毒抗原。 相似文献
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应用单克隆抗体建立夹心ELISA检测EDS—76病毒 总被引：3，自引：1，他引：2
利用单克隆抗体建立夹心ＥＬＩＳＡ方法，对人工感染鸡带毒和排毒检测，表明第３天血、脾、输卵管带毒，第８天时各脏器几乎都带毒，第１４天仅输卵管、肾、肝检出病毒。第６天时鸡蛋带毒，泄殖腔排毒；直至１４天时仍带毒和排毒。夹心ＥＬＩＳＡ与ＨＡ、鸭胚接种相比较，在３６份样品中，ＨＡ检出１９份。ＥＬＩＳＡ检出２４份，鸭胚接种检出１２份。病毒在鸭胚和细胞上复制动态表明，２４小时后血凝试验和夹心ＥＬＩＳＡ都能检出病毒，随着时间延长，ＨＡ价和ＥＬＩＳＡ价（ＰＮ）继续上升，８４小时至９６小时到最高峰。在２４小时时，无血凝性，但ＥＬＩＳＡ检测为阳性，因此夹心ＥＬＩＳＡ可用于病毒检测。单抗夹心ＥＬＩＳＡ的建立为生产上提供了一种更简单、快速、灵敏、应用广泛的病毒检测方法。 相似文献
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抗鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的制备及其特性的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
本实验将鸡传染性支气管炎病毒（澳大利亚Ｔ株）进行纯化，制成抗原，应用杂交瘤技术建立了５株分泌抗鸡传染性支气管炎病毒的杂交瘤细胞株，其免疫球蛋白的亚类分别属于ＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＭ。杂交瘤细胞分泌抗体的能力稳定，长期传代对其抗体分泌能力没有影响。５株单克隆抗体与其它１２株鸡传染性支气管炎病毒标准株之间存在不同程度的交叉反应，但对鸡新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、产蛋下降综合征病毒及禽流感病毒均无交叉反应。用此杂交瘤细胞制备腹水的ＥＬＩＳＡ效价为１０－６～１０－７，抗体对热的稳定性有一定的差别。抗体纯化后，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳表明具有单克隆抗体的特征，经快速蛋白分析鉴定其纯度为８９．４９％。竞争ＥＬＩＳＡ法证明其中４株的单抗与抗原结合位点并不完全相同。采用单抗夹心ＥＬＩＳＡ法，对抗原的检测方法进行了初步探索。 相似文献
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利用间接夹心ＥＬＩＳＡ对新城疫Ｖ４免疫鸡、免疫攻毒鸡和对照攻毒鸡口腔和泄殖腔内的病毒抗原进行了检测。 相似文献
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PCR检测鸡减蛋综合征病毒 总被引：3，自引：0，他引：3
根据已报道的鸡减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）病毒ＤＮＡ序列，设计合成了１对引物，建立了ＥＤＳ－７６病毒的双温式聚合酶链反应（ＰＣＲ）诊断方法。该方法对ＥＤＳ－７６病毒长春株、河南株和广东株扩增结果均为阳性；而对致死鸡胚孤儿病毒（ＣＥＬＯＶ）、鸡病毒性关节炎病毒（ＶＡＶ）、鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）和鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）的扩增结果均为阴性。可检测ＥＤＳ－７６病毒ＤＮＡ为０．３×１０－４ｐｇ。结果表明该方法特异且敏感。此外，将常规的三温式ＰＣＲ的操作规程改为双温式，反应体积由常规５０～１００μＬ改为２０μＬ，使其更加快速、简便、经济 相似文献
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采用鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）病毒（ＩＢＤＶ－２５１２）研制了检测ＩＢＯＶ抗体的ＥＬＩＳＡ试剂盒。抗原最佳包被浓度为５．１２μｇ／ｍｌ，被检血清最佳稀释度为１：２００，酶标结合物最佳工作浓度１：１０００．本试剂盒与美国ＫＰＩＩＢＤ－ＥＬＩＳＡ试剂盒比较，结果敏感性、特异性、重复性均达到美国同类产品水平，且易于操作．在４℃可稳定保存６个月、对北京地区４个非免疫鸡群的１０３只鸡测得其阳性率为５４％，对４５只ＳＰＦ鸡的阳性率为０％。 相似文献
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用建立的斑点免疫金银染色（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ）法检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）抗原,确定兔抗ＩＢＶ血清工作浓度为１：４００,ＳＰＡ－胶体金探针的工作浓度为１：８０,该法对纯化ＩＢＶ抗原的最低检出量为０．４３１４ｎｇ／点,用Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ与斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）同时检测１５只人工感染ＩＢＶ鸡的气管,肺,肾病科,ＩＢＶ阳性检出率均为１００％,对３２份疑似ＩＢＶ感染鸡病料检测,Ｉ 相似文献
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作者建立了两种抗原捕捉酶联免疫吸附试验方法（多抗和单抗ＡＣ－ＥＬＩＳＡ），用于滴定用不同宿主系统增殖的传染性氏囊毒病，这些宿主系统包括ＢＧＭ－７０传代细胞系。鸡胚成纤维细胞和鸡法氏囊，两种检测方法都有较高的特异性，但是多克隆ＡＣ－ＥＬＩＳＡ比单克ＡＣ－ＥＬＩＳＡ更加敏感（Ｐ〈０．０５），结果还表明，滴定ＩＢＤＶ抗原的常规方法（细胞培养物和鸡胚）比多抗ＡＣ－ＥＬＩＳＡ更敏感。 相似文献