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1.
【目的】获得鸡α干扰素重组酵母菌诱导表达的最佳诱导时间和甲醇的体积分数,并测定诱导表达产物对鸡马立克氏病毒(MDV)和鸡新城疫病毒(NDV)的抑制能力。【方法】挑取2个鸡α干扰素重组酵母菌单菌落至BMGY培养基中培养,待菌液OD600为4左右时,分别转接至BMMY培养液诱导,1瓶每隔12 h补加1次体积分数0.5%甲醇,另1瓶每隔12 h补加1次体积分数1%甲醇,于24,48,72 h收集样品,备SDS-PAGE检测用。根据不同时间(24,48,72,96 h)诱导上清液表达量的差异,留用表达量最高时段的上清液,经初步纯化后,利用鸡胚成纤维细胞(CEF),分别测定重组酵母鸡α干扰素抑制MDV及NDV的能力。【结果】鸡α干扰素重组酵母菌在每隔12 h补加1次体积分数1%甲醇诱导48 h时,或每隔12 h补加1次体积分数0.5%甲醇诱导72 h时,重组酵母鸡α干扰素表达量均达到最高;且诱导上清液具有较好地抑制MDV、NDV的能力。【结论】获得了鸡α干扰素重组酵母菌小量发酵的最佳条件;获得的重组酵母鸡α干扰素对MDV和NDV有明显的抑制作用。 相似文献
2.
《浙江大学学报(农业与生命科学版)》2019,(5)
为开发虾类来源的溶菌酶,本研究建立了利用巴斯德毕赤酵母表达系统高效分泌表达重组克氏原螯虾无脊椎动物型溶菌酶1(简称"pc-iLys1")的方法。经密码子偏好性优化后的pc-iLys1 cDNA在毕赤酵母菌株SMD1168中成功地实现胞外分泌表达,重组蛋白分子质量约为17.1 kDa。在摇瓶中对诱导表达条件进行优化,获得的相对最佳表达条件为:培养基pH 7.0,培养温度28℃,甲醇体积分数1.5%,诱导表达时间96 h。采用该优化条件,进一步利用分批补料策略在5 L发酵罐中进行高密度培养诱导,120 h后获得重组pc-iLys1,其酶活性达到2 052.6 U/mL,最终,酵母干细胞质量浓度达98.1 g/L。抑菌实验表明,重组pc-iLys1对多种革兰氏阳性和阴性细菌均具有明显的抑制活性。总之,本研究实现了克氏原螯虾i-型溶菌酶在毕赤酵母中的重组表达,为其大规模制备打下了基础。 相似文献
3.
对重组X-33毕赤酵母菌株表达的鸡源Fowlicidin-3抗菌肽的条件进行优化,并研究了表达产物的生物学活性.结果表明:当含有重组酵母菌的BMGY培养基A600值达到5-6时,转接pH 6.0的BMMY培养基,每24 h补加2%甲醇,29℃条件下培养72 h,重组鸡源Fowlicidin-3抗菌肽获得高效表达,含量达到170 mg·L-1.采用琼脂孔扩散法对该抗菌肽的热稳定性、酸碱稳定性等特性进行分析,结果表明:鸡源Fowlicidin-3抗菌肽具有较强的热、酸稳定性;对致病性大肠杆菌K99、鸡白痢沙门氏菌和金黄色葡萄球菌Cowan Ⅰ的最小抑菌浓度分别为3.12、1.56和1.56μg·mL-1.在对大肠杆菌O1感染雏鸡的体内疗效试验中,鸡源Fowlicidin-3显示出了较好的预防和治疗效果. 相似文献
4.
为了确定重组鸭α-干扰素(DuIFN-α)基因工程菌BL21(DE3)/pET32a+-DuIFN-α的最佳表达条件,对影响原核表达的主要因素:IPTG浓度、诱导时期、收获时间、培养诱导温度、葡萄糖浓度及培养基进行了优化;并利用抗性筛选对表达质粒的稳定性进行了研究。结果显示,诱导基因工程菌BL21(DE3)/pET32a+-DuIFN-α表达DuIFN-α的最佳条件为:以TB+5 g/L葡萄糖培养基37℃培养至菌体OD600=0.8~1.1时,加入IPTG至终浓度0.2 mmol/L,30℃诱导培养4~5 h。在最佳表达条件下,DuIFN-α的相对含量为34.1%,总含量(终菌体浓度×相对含量)达79.9;各种优化条件对表达质粒的稳定性未见明显影响。 相似文献
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金属硫蛋白基因MT1A在大肠杆菌中的自诱导表达条件优化及其抗镉性 总被引：1，自引：0，他引：1
为了提高金属硫蛋白基因MT1A的高效表达和对重金属的抗性,以菌体密度、可溶性目的蛋白表达量为评价指标,对工程菌自诱导的培养条件(诱导时间、诱导温度)和培养基组分(蛋白胨、酵母粉、甘油、葡萄糖、乳糖)进行优化,并对其抗镉(Cd)性进行分析。结果表明,最优自诱导培养基组分为2.0%蛋白胨、2.0%酵母粉、0.3%甘油、0.05%葡萄糖、0.3%乳糖;重组菌自诱导表达最优培养条件为37℃培养3 h,然后25℃继续培养13 h,此时菌体密度、可溶性蛋白表达量、可溶性蛋白相对产量均最高,分别比未优化ZYM-5052培养基提高77.7%、94.0%、244.8%。当Cd2+浓度为0.5 mmol/L时,高效表达金属硫蛋白的菌株具有明显的抗Cd活性。 相似文献
6.
采用高密度发酵法在5.5 L发酵罐中对pPIC9-pEGF/GS115重组毕赤酵母Pichia pastoris菌株进行发酵,在培养至酵母菌体密度(D600nm)约150时,以甲醇诱导目的蛋白表达,48 h后菌体密度达315,目的蛋白表达产量约300 mg/L.发酵上清液经0.45μm和截留相对分子质量30 000的超... 相似文献
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硫氧还融合表达系统是Invitrogon公司近年来发展的以E .coli硫氧还蛋白作为融合伴侣的融合表达系统。其重组质粒的诱导表达需在E .coliGI系列菌株中进行。本文对载体质粒pTrxFus及其携带编码hARLBD基因的重组质粒pTrxAR在E .coliG1 72 4株中的质粒孕育量与生长培养条件的关系进行了研究。结果表明 ,菌株在平板RM培养基上的活化生长时间及菌体液体培养时的温度对其质粒孕育量影响极大 ,其次为液体培养基中Ampicillin浓度。菌体在35℃ ,1 0 0ug/mlTrp的诱导条件下 ,其重组质粒在数小时内迅速丢失。通过菌体质粒的提取、测定 ,可为优化使用该表达体系表达hARLBD片段的表达条件提供理论指导。 相似文献
8.
采用PCR方法从pGEM-IL-18重组质粒中亚克隆出IL-18基因并完成了真核融合表达载体pPIC9K-IL-18的构建和IL-18在毕赤酵母中的表达,在此基础上从发酵时间、不同诱导型、pH值、诱导剂量和接种量等方面对重组基因工程菌的摇瓶发酵条件进行了优化,进一步探索了酵母菌表达猪IL-18的发酵工艺.结果表明,摇瓶发酵时,诱导最佳时间为72 h,甲醇最适浓度为20 g/L,最适pH范围为6.0~8.0,最适接种量1∶1.与单纯甲醇诱导相比,甘油/甲醇诱导后的表达量明显提高. 相似文献
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对毕赤酵母表达β-1,3-1,4-葡聚糖酶条件进行优化,在摇瓶水平上研究了温度、pH、甲醇流加量、诱导时间,油酸等因素对重组葡聚糖酶的影响;得优化条件为:最适温度30℃、pH6.0,最佳甲醇诱导浓度为0.5%,最佳诱导时间为84h,酶活力达27.4U/mL,比初始酶活力提高了1.9倍。酶反应的最适pH为6.0,最适温度为50℃。在pH3.5～8.0的范围内和温度55℃以下保存时具有较好的稳定性;其中,CaCl2对重组酶的激活效果显著,使酶活力提高达92%。 相似文献
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通过将人组织激肽释放酶(hKLK1)原编码序列克隆入Pichia pastoris酵母分泌型表达载体pPIC9K中,获得重组表达质粒pPIC9K-KLK1.分别用Sal Ⅰ及Bgl Ⅱ酶切线性化后电转化酵母菌株GS115,经MD平板及含不同抗性浓度G418的YPD平板上培养筛选,获得抗3 mg/ml G418 Mut+型分泌表达hKLK1的重组酵母菌4株,抗1 mg/mlG418 Muts型分泌表达hKLK1的酵母菌3株.酶活性测定数据表明:高拷贝转化子重组蛋白表达量高于低拷贝转化子;Mut+型转化子重组蛋白表达量高于Muts型转化子;且当甲醇诱导体积分数为2%时,重组蛋白的表达量最高.进一步的Western-blotting分析证明,表达的重组hKLK1分子质量正确,能被特异的抗体识别. 相似文献
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从四川二郎山人工云杉林分离得到云杉叶疫病病原菌,采用真菌通用引物ITS1和ITS4扩增得到的序列与NCBI中的根球壳孢菌(Rhizosphaera kalkhoffi)相似度达99%。比较分析了NCBI及四川二郎山分离到的根球壳孢菌ITS区序列,采用软件primer5.0设计20个引物。通过对32株菌株DNA进行PCR扩增及产物测序,筛选得到3个特异性引物对ZYZ6、ZYZ7、ZYZ8。改变DNA模板浓度进行扩增检测,在25μL PCR反应体系中,引物对ZYZ6F/ZYZ6R检测灵敏度最高,可达到0.1 pg/μL。利用ZYZ6F/ZYZ6R对四川二郎山人工云杉针叶DNA进行检测,扩增得到310 bp左右的条带,测序结果与Gen Bank中根球壳孢菌相似度达99%。 相似文献
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并购决策是种子企业实现并购整合的第一步,也是关键的一步。针对种子企业并购决策中所存在的问题,本研究依据影响种子企业并购决策的最核心因素,即协同效应、核心能力、企业家个人因素、外部环境四个基准出发,构建了评价我国种子企业并购决策3级指标体系,利用AHP方法求出优化后的评价指标。结果表明核心能力和协同效应决定着种子企业并购决策的有效实施,企业家个人因素和外部因素也影响着种子企业并购决策。但是种子企业并购决策评价体系是一个有机联系的动态管理过程,只有4个1级指标及各细分2级指标相互协同,才能共同作用并购决策的有效进行。 相似文献
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对上市公司并购的制度背景和盈余管理的制度背景分析发现，上市公司在我国目前特殊的制度背景下在并购中进行盈余管理是一种理性行为。在政府主导下进行的无效率的并购和为了获得配股资格而在并购前期调高利润的盈余管理行为是导致其并购后期经营业绩下降的主要原因。 相似文献
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上市公司并购整合绩效评价研究 总被引：2，自引：0，他引：2
通过运用多元统计方法构造综合评判指数对整合绩效进行了定量化的研究。分析表明，上市公司作为并购公司其整合绩效要优于上市公司作为目标公司的整合绩效。进一步的评价得出结论，无论上市公司作为并购公司还是目标公司，他们的整合绩效作为整体均表现较好，但是仍然存在着诸如并购的动机偏离价值创造等需要解决的问题。 相似文献
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对我国上市公司 2 0 0 0年进行了并购的 2 8家公司进行实证分析 ,结果表明 :我国上市公司开展的并购活动还远未产生其应有的效应 ,相反却限制了并购公司主营业务的发展壮大。导致这种结果的主要原因是有以下两方面 :一是并购企业在进行并购前对自身成长方向与业务发展战略没有周密思考规划 ,缺乏对目标行业的认识与了解 ;二是忽视了并购后的整合管理。 相似文献
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上市公司并购动机是上市公司采取并购方式和选择并购对象的决定性因素。西方学者运用经济学理论和方法 ,对其进行了经济学分析 ,建立了一个比较完整的理论体系。由于文化背景和产权制度的差异等 ,这些理论并不能对中国上市公司并购动机予以合理的解释。因此 ,本研究运用管理学理论与方法 ,对中国上市公司并购动机进行了管理学分析 ,提出了中国上市公司需求层次理论 ,即安全的需要、规范的需要、政治的需要、逐利的需要、避险的需要和成就的需要 ,并在此基础上进一步揭示与解释了隐藏在中国上市公司并购行为背后的真正动机 相似文献
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以2007~2012年上市公司的并购事件为样本,考察银企关系的不同形态对企业并购支付方式选择的影响。研究发现,具有良好银企关系的企业更倾向于采取现金并购支付方式,但是银企关系的不同形态对企业并购支付方式的选择具有不同的影响。与企业持股银行（股权式银企关系）相比,企业高管的银行背景（信任式银企关系）更倾向于采取现金支付方式。加入制度环境（货币政策以及地区金融发展水平）进一步检验后发现,在货币紧缩时期和金融发展水平低的地区,以上结论依然成立。 相似文献
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随着经济全球化深入发展，资本流动的形式日趋多样化，国际并购即是这股资本流动浪潮中最为重要的一种形式。我国应在反垄断法相关规定的基础上，立足我国具体国情，借鉴欧盟、美国关于国际反垄断规制的先进经验，完善我国关于国际并购行为规制的反垄断法律体系，加强《反垄断法》在规制国际并购行为中的可操作性，实现国际并购行为的积极效应，促使我国经济实现可持续发展。 相似文献
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以我国沪、深两市在1999～2005年内发生外资并购的48家上市公司为样本,选取股权结构、董事会、监事会、股东大会、高管层以及信息披露六个维度共13个指标,通过因子分析法定量研究外资并购对我国上市公司治理结构的影响,发现不同并购模式下公司治理结构得到优化的比例呈现较大差异:拍卖收购模式为100%,协议收购非流通股为40.91%,二级市场收购流通股为60%,增资扩股为50%,成立合资公司为22.22%,收购母公司为40%。 相似文献