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补体结合酶联免疫吸附试验方法的建立 总被引：1，自引：1，他引：0
为改进免疫学诊断技术的准确性,研究了一种基于补体结合的免疫学检测新技术———补体结合酶联免疫吸附试验（CF-ELISA）。CF-ELISA技术采用酶标记抗菊糖纯化豚鼠补体C3抗体及其酶显色系统作为补体参与反应的指示系统,用ELISA方法进行补体结合试验。经对布氏菌病抗体检测的初步试验结果显示,CF-ELISA技术可检测到0.01 IU的布氏菌病抗体,灵敏度与间接酶联免疫吸附试验（iELISA）相当,是虎红平板凝集试验（RBPT）试管凝集试验（SAT）的5 000倍、补体结合试验（CFT）的10 000倍。对349份确诊布氏菌病感染群牛、羊血清的检测结果显示,CF-ELISAi、ELISA、CFT、SAT、RBPT的阳性率分别为35.82%3、6.39%、31.81%、30.09%、36.1%,CF-ELISA与iELISA、CFT、SAT、RBPT的阳性符合率分别为：98.4%、88.8%、80.0%、90.6%。CF-ELISAi、ELISA、CFT、SAT、RBPT对490份布氏菌病阴性群牛、羊血清的阴性率分别为100%、99.6%、100%、99.4%、99.8%,CF-ELISA与iELISA、CFT、SAT、RBPT的阴性符合率分别为：99.6%1、00%、99.4%、99.8%。研究表明,CF-ELISA是具有高特异性和高敏感性的布氏菌病免疫学检测技术。 相似文献
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在一个大猪繁殖站,用血清凝集和补体结合试验有2/3的猪检出了布氏流产菌的抗体,然而没有发现布氏菌病的临床症状,并且不能由这些猪分出流产布氏菌,由78个直肠拭子中有31个(41％)分得耶氏肠炎菌。假定布氏菌滴度是由耶尔辛肠炎菌引起,为确定这种假定的标准是:在一个月的彻底研究中没有布氏菌病的临床症状;由大批样品 相似文献
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牛布氏杆菌病是由布氏杆菌引起的人畜共患传染病,是国际贸易检疫中必检的传染病。近几年来,随着养牛业的发展,牛及其制品调运越来越频繁,致使牛布氏杆菌病疫情在一些地方有所抬头。加强牛布氏杆菌病监测,扑杀阳性牛是控制牛布氏杆菌病的关键措施之一。经典的牛布氏杆菌病监测实验室方法有SAT、RBT、BPAT、CF等,这些方法有的特异性和敏感性不高,操作繁琐,在实际应用中不方便。随着生物技术的发展,新的快速方便的检测技术不断出现,酶联免疫试验(ELISA)是近几年研制出来的一种快速检测技术。BBAT、CF、ELISA三种检测方法是世界动物… 相似文献
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荧光偏振试验(FPA)是一种新的试验方法。本文应用荧光偏振检测方法对出口哈萨克斯坦的321份牛进行布氏杆菌病检测,结果有25份牛血清样品检测为抗体阳性。同时对321份血清进行虎红平板凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)、补体结合试验(CFT)、间接ELISA试验(I-ELISA)、竞争ELISA试验(C-ELISA)等比对试验,结果是FPA从敏感性和特异性上都优于或等于目前主要采用的RBPT、SAT、CFT、ELISA检测方法。FPA方法简便、快速、通量大,不需洗板,可在15分钟内完成92份样品的布氏杆菌病检测,极适合于大批量牛布氏杆菌病的检疫、筛查和疫病监控。 相似文献
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为建立一种快速诊断牛布鲁菌病的方法,以原核表达、纯化的外膜蛋白OMP22作为抗原,以带荧光标记的IgG抗体作为标记物制备免疫层析试纸条,建立一种布鲁菌病快速检测方法,并对该方法的敏感性和特异性进行验证。结果显示,制备的试纸条最低可检出1∶100稀释的牛布鲁菌标准阳性血清,且与牛结核、牛蓝舌病、牛病毒性腹泻、牛口蹄疫、牛巴氏杆菌病、牛白血病的血清无交叉反应;试纸条检测结果与商品化ELISA检测试剂盒(IDEXX)的符合率为93.5%。以上结果表明,建立的荧光标记免疫层析试纸条方法能快速检出牛血清中的布鲁菌抗体,具有良好的敏感性和特异性,是一种适合现场初筛的检测方法。 相似文献
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为了解虎红平板凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)和酶联免疫吸附试验(ELISA)三种血清学方法在奶牛布氏杆菌病诊断方面的实际应用情况,本试验采集了10份疑似奶牛布氏杆菌病的血清样本,同时采用上述三种血清学诊断方法进行了对比研究。结果显示,RBPT、SAT和ELISA的阳性检出率分别为70%、80%和90%,以ELISA的阳性检出率为最高。因此,具备特异、灵敏、快速等优点的ELISA血清学诊断方法更适合奶牛布氏杆菌病的抗体检测及其研究。 相似文献
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《畜牧与兽医》2016,(7):113-114
旨在比较奶牛布氏杆菌病3种血清学检测方法,为临床根据实际检测情况选择不同检测方法提供参考。对420头奶牛血清样品用虎红平板凝集试验(RBT)、试管凝集试验(SAT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)3种方法进行布病抗体检测,比较总符合率、假阴性、阳性率及敏感性和特异性。结果:RBT、SAT、ELISA 3种检测方法的总符合率高达到90%以上;以SAT作为判定标准,ELISA检测结果的假阴性率(7.1%)和假阳性率(1.3%)均低于RBT检测结果的假阴性率(14.3%)和假阳性率(3.1%),而ELISA的敏感性(92.3%)和特异性(98.7%)均高于RBT的敏感性(85.7%)和特异性(96.9%)。临床工作中使用RBT或者ELISA进行初步筛选,SAT进行复核确诊,2种或2种以上的检测方法联合运用结果较为理想。 相似文献
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本试验建立了 BA-BLISA 检测牛结核血清抗体的方法.以结核清净场604头牛血清,经 BA-ELISA 检测,阴性平均值 ()=0.18.以平均值 3倍标准差为临界值,检测了结核菌素(OT)变态反应阳性牛115头,BA-ELISA的阳性率为61.73%,比常规 ELISA 的阳性率(54.78%)提高6.95%.BA-ELISA 的敏感性是 ELISA 的4倍.对10头变反阳性、50头变反阴性牛的 BA-ELISA 检测结果,与病变及细菌学检查的阴、阳性符合率均为100%.对5种病牛血清(牛副结核、牛布氏杆菌病、牛腹泻粘膜病,牛白血病、牛传染性鼻气管炎)及3种分枝杆菌(草分枝杆菌、偶发分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌)的免疫血清检测结果证明,BA-ELISA 具有较好的特异性,所建立的 BA-ELISA 是检测牛结核血清抗体的一种敏感性高、特异性强的新方法. 相似文献
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布氏菌病是人、畜共患的一种传染病。六十年代之前布氏菌病在乌兰察布地区流行广,危害也十分严重。我地区以羊、牛间布氏菌病为主,因此把预防羊、牛间布氏菌病 相似文献
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用纯化的猪伪狂犬病病毒gB重组蛋白为抗原,建立了检测猪伪狂犬病血清抗体的gB-ELISA方法。最佳反应条件为：抗原包被浓度为3.15μg/mL,待检血清稀释度为1∶40。该方法对猪圆环病毒病、猪瘟、猪细小病毒病、猪繁殖与呼吸综合征（猪蓝耳病）、猪乙型脑炎、猪布氏杆菌病5种疾病阳性血清和SPF猪阴性血清检测呈阴性反应。批间、批内试验变异系数均不超过8%。用该方法与HerdChek ELISA试剂盒同时对119份血清进行了平行检测,其相对敏感性、特异性和符合率分别为：75%、80.7%和79%。试验结果表明：猪伪狂犬病血清抗体gB-ELISA检测方法具有较高的敏感性和特异性,且重复性好,可用于猪伪狂犬病毒血清抗体检测。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2014,(15)
为了研究牛布氏杆菌血清抗体快速诊断方法,试验采用PCR技术从河北省某牛场流产污物中扩增得到牛布氏杆菌外膜蛋白OMP31基因,将该基因插入原核表达载体pET-28a(+),转化大肠杆菌DE3进行诱导表达,再将表达产物重组外膜蛋白OMP31纯化后作为抗原,建立检测牛布氏杆菌血清抗体的OMP31-ELISA,并对最适反应条件进行确定,然后对从河北省部分牛场采集的150份腹泻奶牛血样进行血清抗体检测。结果表明:牛布氏杆菌OMP31蛋白成功表达,表达产物能与牛布氏杆菌免疫兔血清反应;建立的OMP31-ELISA最佳工作条件为外膜蛋白OMP31抗原的最适包被浓度2.0μg/mL,酶标抗体的工作浓度1∶400,血清稀释度1∶160,以3%明胶-PBS封闭30 min。检测的150份临床血清样本中,特异性、敏感性和符合率分别为90.91%(50/55)、95.79%(91/95)、94.00%(141/150)。说明本方法特异性强、敏感性高,快速,使用方便。 相似文献
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为了解全国布氏菌病活疫苗生产企业活菌计数能力,2015年对该项目进行了能力验证分析,每名参比企业发放布氏菌活疫苗(S2株)样品3份,要求在规定时间内对其进行活菌计数并提交结果报告。结果显示,参比的17家企业中,15家结果"满意",2家企业结果"不满意",表明全国大部分布氏菌病活疫苗生产企业具备可信任的布氏菌病活疫苗活菌计数检测能力。 相似文献
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针对炭疽pX01、布氏菌BM21以及结核菌插入片段IS6110,设计并合成三对特异性引物,并优化三条特异性引物的最适扩增条件,建立了布病、炭疽、结核病三重PCR方法。特异性试验显示,对布氏菌、炭疽以及结核均能扩增出相应预期的特异性片段。敏感性试验表明,该方法对炭疽、布氏菌以及结核杆菌的敏感性分别在345fg/μL、313fg/μL以及322fg/μL以下。该三重PCR方法的研究对临床混合病菌的快速诊断提供了技术支撑。 相似文献
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《畜牧与兽医》2017,(8):62-67
为了鉴别羊种布氏杆菌自然感染和S2疫苗(猪种)免疫羊,选用布氏杆菌S2疫苗株进行了全基因组测序,预测出的编码基因与已公布的布氏杆菌基因组数据库比对分析,找出S2特有基因GL_0002181,对GL_0002181基因进行原核表达及免疫原性验证,同时用BP26蛋白作为对照组。Western blot结果显示:以S2疫苗免疫绵羊血清作为检测抗体,重组菌BL21(pETGL_0002181)、BL21(pETBP26)与BL21(DE3)空菌比较,分别在31 ku、32 ku处出现了特异性条带,说明重组蛋白能够与S2免疫血清中的抗体发生特异性反应,具有较好的免疫原性;而重组表达菌BL21(pETGL_0002181)菌体蛋白与自然感染血清不反应,重组蛋白BP26与自然感染血清反应,说明GL_0002181基因在S2疫苗株中存在,在羊种自然流行株中不存在。结果表明:GL_0002181抗原可用于布氏杆菌S2疫苗免疫与羊种布氏杆菌自然感染鉴别诊断,为布氏杆菌病有效诊断提供理论依据。 相似文献
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弱毒羊种布氏菌M_5,弱毒猪种布氏菌S_2及弱毒牛种布氏菌S_(19)感染两种品系小鼠10天及21天对抗体形成细胞(PFC)的作用表明:三种布氏菌对BALB/C小鼠均有不同程度抑制PFC的作用。而用昆明鼠试验时,布氏菌M_5及S_2对PFC也有抑制作用,但牛种S_(19)则无此作用。资料证明虽用同一菌种同一菌量,但由于动物品系不同,其对PFC的作用也是不同的。 相似文献
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我们应用酶联SPA-ELISA 检测了猪布氏杆菌病抗体,并与试管凝集和补体结合反应进行了比较,现将结果报道如下。材料和方法一、布氏杆菌脂多糖抗原的制备将布氏杆菌S_2菌种(本教研室保存)接种于马铃薯琼脂培养基上,37℃培养2～3 相似文献