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取单层生长状态良好的犊牛脂肪细胞,分别添加0、2.5、5、15、30、50、100 μg/mL外源牛重组脂联素（adiponectin,ADPN）,培养12 h后提取总RNA,采用荧光定量PCR方法检测外源脂联素对脂肪细胞ADPN mRNA和HSL mRNA表达水平的影响。结果显示,随着ADPN添加量的增多,ADPN mRNA相对表达量呈下降趋势;添加ADPN 15 μg/mL时,HSL mRNA的表达量达到峰值,之后呈下降趋势。结果表明体外培养的脂肪细胞中ADPN mRNA表达量受自身的负调节,而添加适量的ADPN可刺激脂肪细胞HSL mRNA的表达。 相似文献
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取单层生长良好的脂肪细胞,采用单因素重复试验,分别添加0、2.5、5、10、50、100μg/L的外源牛重组瘦蛋白(Leptin),培养12h后提取总RNA,每个处理3个重复(孔),应用半定量PCR方法检测外源Leptin对脂肪细胞Leptin mRNA和HSL mRNA水平的影响.结果表明,Leptin对脂肪细胞内Leptin mRNA表达具有抑制作用,但一定浓度的Leptin能提高脂肪细胞内HSL mRNA水平,其中以5μg/L Leptin的作用最为明显;当Leptin的质量浓度超过5μg/L,HSL mRNA表达水平呈下降趋势. 相似文献
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NEFA和BHBA对体外培养的脂肪细胞HSL、ADPN mRNA表达的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
在体外培养的牛脂肪组织和脂肪细胞中,分别添加5个浓度梯度的NEFA和BHBA,均设3个重复,通过荧光定量PCR技术,观测不同浓度的NEFA和BHBA对牛脂肪细胞ADPN mRNA与HSL mRNA丰度的影响。结果表明:NEFA在一定浓度范围内(0.2~0.8 nmol/L)对ADPN mRNA表达有显著促进作用并呈剂量依赖性,而高浓度(>1.6 nmol/L)时又显著下调其表达;0.2~0.8 nmol/L NEFA对HSL mRNA的表达有抑制作用,呈剂量依赖性,但在高浓度时(>0.8 nmol/L)反而促进了其表达(P<0.05)。低浓度的BHBA对HSL mRNA的表达无显著抑制作用,高浓度(1.2 mmol/L)的BHBA显著下调HSL mRNA的表达,并呈剂量依赖性;低浓度(<0.6mmol/L)的BHBA对ADPN mRNA的表达无明显作用,但高浓度的BHBA(>0.6 mmol/L)对ADPN mRNA的表达具有明显的抑制作用(P<0.05)。结论:代谢中间产物可通过促进ADPN mRNA或抑制HSL mRNA的表达来调节脂肪代谢。 相似文献
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为探讨脂联素(ADPN)与激素敏感脂肪酶(HSL)对围产期奶牛脂肪动员的影响及其相互关系,随机选取围产期健康奶牛10头,分别于产前28天、产前14天、产后1天、产后14天和产后28天,应用荧光定量RT-PCR法检测其脂肪组织ADPN mRNA和HSL mRNA丰度。结果表明:在围产期,随着分娩日龄的临近,其脂肪组织的HSL mRNA水平随着ADPN mRNA丰度的降低而下降,产后则随其升高而上升,初步推测脂联素可能是通过调控脂肪HSL mRNA的表达和分泌来调节围产期奶牛脂肪的。 相似文献
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[目的]研究睾酮对新生期大鼠支持细胞和精原细胞中血小板反应蛋白解整合素金属肽酶16(a disintegrin and metalloprotease with thrombospondin motifs 16,Adamts16)基因表达的影响,以及Adamts16基因与大鼠隐睾的关系。[方法]利用RT-qPCR技术检测不同浓度睾酮(10-6、10-7、10-8、10-9mol/L)培养大鼠支持细胞和精原细胞6、12、24 h后Adamts16基因的mRNA相对表达量,确定睾酮诱导支持细胞和精原细胞Adamts16基因mRNA表达的最佳剂量和最佳时间。应用HE染色法观察出生2、4、8 d野生型和Adamts16基因敲除型大鼠的睾丸位置。[结果]用10-6mol/L睾酮诱导大鼠支持细胞6 h时Adamts16基因的mRNA相对表达量最高。用10-7mol/L睾酮诱导大鼠精原细胞24 h时Adamts16基因mRNA相对表达量最高。与野生型大鼠相比,Adamt... 相似文献
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旨在探究民猪脂肪细胞分化过程中产热基因和米色脂肪标记基因的表达变化规律，为进一步研究民猪脂肪细胞向米色脂肪细胞分化的分子机制提供依据。本研究采集1月龄民猪的背部脂肪组织，分离前体脂肪细胞进行培养及成脂诱导，观察分化过程中细胞形态并进行油红O染色鉴定；检测产热基因UCP3、PGC-1α、PPARα和米色脂肪标记基因EBF2、CD81、PDGFRα在诱导分化第0、2、4、6、8天的表达量。结果表明，随着诱导分化的时间增加，细胞中的脂滴逐渐增多，在分化第8天时进行油红O染色，多数细胞达到成熟脂肪细胞阶段。以第0天为对照，PGC-1α、EBF2、PDGFRα在第2天时表达量极显著升高（P<0.01），且达到最高，第4、6、8天呈下降趋势。UCP3在第4、6、8天表达量极显著升高（P<0.01），第8天有所下降。PPARα和CD81在第2天时表达量极显著升高（P<0.01），且在第4和6天表达量与第2天相比变化不大。综上表明，本研究成功进行了民猪前体脂肪细胞的成脂诱导分化，揭示了分化过程中产热和米色脂肪标记基因的表达规律，为进一步研究民猪前体脂肪细胞向米色脂肪细胞分化的分子机制和民猪抗寒能力奠定基础。 相似文献
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H. A. Van Dorland R. M. Bruckmaier 《Journal of animal physiology and animal nutrition》2010,94(4):505-508
Liver tissue was collected from eight random dairy cows at a slaughterhouse to test if gene expression of pyruvate carboxylase (PC), mitochondrial phosphoenolpyruvate carboxykinase (PEPCKm) and cytosolic phosphoenolpyruvate carboxykinase (PEPCKc) is different at different locations in the liver. Obtained liver samples were analysed for mRNA expression levels of PC, PEPCKc and PEPCKm and subjected to the MIXED procedure of SAS to test for the sampled locations with cow liver as repeated subject. Additionally, the general linear model procedure (GLM) for analysis of variance was applied to test for significant differences for mRNA abundance of PEPCKm, PEPCKc and bPC between the livers. In conclusion, this study demonstrated that mRNA abundance of PC, PEPCKc and PEPCKm is not different between locations in the liver but may differ between individual cows. 相似文献
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为研究急性冷应激通过影响热休克蛋白含量的变化对阿勒泰羊抗寒性能、生产性能及抗病性能等的影响,试验设置常温组（15 ℃±2 ℃）与冷应激组（-25 ℃±2 ℃）,每组各5只羊,屠宰后分别采集急性冷应激组（冷应激24 h后）和常温组的心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织。采用实时荧光定量PCR技术对HSP60、HSP70和HSP90 mRNA含量变化进行检测,并对HSP60、HSP70和HSP90基因进行同源性分析。结果显示,HSP70和HSP90基因与已有绵羊序列同源性高于99%,而HSP60基因与已有波斯金牛序列同源性高于99%;冷刺激后HSP60基因在心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织中的表达较常温组均升高,且在肾脏中的表达量差异极显著（P<0.01）;冷刺激后HSP70基因在心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织中的表达较常温组均升高,且在肝脏和肾脏组织中的表达量差异极显著（P<0.01）;冷刺激后HSP90基因在心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织中的表达较常温组均升高,且在肝脏组织中表达量差异显著（P<0.05）,而在脾脏和肾脏组织中的表达量差异极显著（P<0.01）。表明急性冷应激极大程度地刺激了机体的产热机能,通过通路中的产热相关基因的相互调节使其能量代谢发生改变,从而提高细胞生存率,增强机体对环境胁迫的耐受力,能更好地适应环境温度的变化。试验结果为进一步深入研究急性冷应激对阿勒泰羊机体的影响提供一定理论依据。 相似文献
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抑肌素基因mRNA在猪肌肉组织表达差异的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
抑肌素基因(Myostatin，MSTN)是肌肉生长抑制素基因的简称，又称GDF-8(Growth and Differential Factor-8)基因，具有抑制骨骼肌生长的作用，是骨骼肌生长的负调控因子。该基因在动物分子水平定向育种、提高产肉性能上具有极大的应用前景。研究发现，在牛和绵羊的心肌、猪的乳腺及鱼类的多种组织中均发现有其表达。在调节脂肪积累、参与骨折愈合、调节排卵、心脏发育及心肌的组织修复、以及乳腺的发生和泌乳等过程中可能也具有重要作用。 相似文献
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母猪VEGF基因mRNA全序列的克隆与分析 总被引：2，自引：2，他引：0
本研究运用多种分子生物学方法对母猪胎盘VEGF mRNA全序列进行克隆和分析,结果发现:母猪胎盘VEGFmRNA全长约3500 bp,其完整的cDNA编码190个氨基酸,通过同源性比较预测了VEGF基因的DNA序列全长约为16kb。VEGF基因编码的氨基酸序列与人、小鼠和恒河猴的同源性分别为78.82%、79.44%和96.34%。经生物信息学分析,预测VEGF蛋白理论分子量为22.33 kD,其等电点为7.89;大约在1~20,40~45,50~60,65~80,100~105位之间的氨基酸存在疏水性区域,用TMHMM2.0分析猪VEGF的跨膜结构发现此蛋白所有氨基酸都位于膜表面,证实了VEGF是一种表面蛋白。用signalP 3.0分析发现在1~27位氨基酸可能为信号肽(P=0.999),且可能在26和27位氨基酸之间发生切割(P=0.956)。对VEGF核苷酸序列和氨基酸序列、蛋白质结构和功能的分析,进一步证实本研究得到了VEGF基因mRNA的全序列,为VEGF基因与母猪繁殖性能的关联性研究提供依据。 相似文献
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猪ADSL基因克隆及其在部分组织中的mRNA定量表达 总被引：1，自引：1，他引：0
试验以通城猪为研究对象,在对猪ADSL基因全长编码区cDNA片段进行克隆、序列测定、与GenBank中已收录的其他14种动物的ADSL全长编码区序列进行同源性分析,并构建系统发生树的基础上,采用实时(相对)定量PCR方法对刚出生和65日龄两个不同生长发育时期的通城猪心、肝、肾脏、背最长肌4种组织的ADSL基因表达谱进行分析。结果表明,所克隆的ADSL基因片段大小为1 548 bp(GenBank登录号:GU249574),其中包含一长为1 455 bp的完整阅读框,通过核酸序列分析发现,该基因编码484个氨基酸;与GenBank中已收录的猪ADSL基因序列同源性最高,达99.9%;与恒河猴和黑猩猩的序列同源性最低,分别为66.3%和41.3%;15种动物的20条ADSL全长CDS序列聚类分布为两个主支。刚出生时的通城猪ADSL基因在心、肝、肾脏组织的mRNA表达水平均高于65日龄通城猪的心、肝、肾脏组织中的mRNA表达;然而,其背最长肌的ADSL基因mRNA表达水平则低于65日龄的通城猪。本结果为猪ADSL基因的生物学功能研究和遗传进化研究提供了分子依据。 相似文献
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根据GenBank中瘦蛋白（leptin）基因序列设计合成了引物和探针，对荧光定量PCR的方法进行了方法学的评估，建立了TaqmanMGB荧光定量RT-PCR检测方法。结果表明，由pMD-18T瘦蛋白所构建的标准曲线线性关系良好，建立的瘦蛋白基因荧光定量PCR检测方法灵敏度高、特异性强（可检测出低于10个拷贝／μL的样品），准确可靠。 相似文献
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SQ RT-PCR检测不同品种猪脂肪组织SOCS-3基因表达 总被引：1，自引：0，他引：1
取4月龄八眉猪和大白猪背部皮下脂肪组织，提取总RNA，根据大鼠细胞因子信号转导抑制因子-3基因（Suppressor Of Cytokine Signaling-3，SOCS-3）设计并合成引物，以猪β-actin基因作为内参，优化反应条件和体系，半定量（Semi Quantitative，SQ）RT-PCR单管扩增猪SOC93基因，经琼脂糖凝胶电泳分离后，Dolphin-DOC凝胶图像分析软件分析，测定各条带的光密度值，检测八眉猪和大白猪脂肪组织中SOCS-3基因mRNA的表达差异。结果表明：八眉猪脂肪组织SOCS-3 mRNA的表达丰度极显著高于大白猪（P〈0．01）。这种差异可能是2种经济类型猪脂肪沉积能力不同的主要原因之一。 相似文献
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半胱亚磺酸脱羧酶(CSD)基因在大鼠睾丸组织中的表达及其序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
试验根据大鼠肝脏牛磺酸生物合成关键酶——半胱亚磺酸脱羧酶(CSD)基因已知核苷酸序列,设计了1对特异的寡核苷酸引物,对提取的睾丸组织总RNA进行RT-PCR扩增,扩增出468 bp的DNA片段,在国际上首次证明CSD基因在大鼠睾丸组织中存在表达,即牛磺酸可在大鼠睾丸组织中生物合成。测定了扩增的睾丸组织CSD基因核苷酸序列,并与已知肝脏CSD基因核苷酸序列及其对应的氨基酸序列作了同源性分析。结果表明:睾丸组织CSD基因核苷酸序列同已知肝脏CSD基因核苷酸序列的同源性为99.8%,其对应氨基酸序列的同源性为100%。 相似文献