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基因表达系列分析(serialanalysisgeneexpress,SAGE)是近几年发展起来的一种快速分析基因表达信息的技术。它通过快速而详细地分析成千上万个EST(expressedsequencedtags)来寻找出表达丰度不同的SAGE标签序列,从而接近完整地获得基因组表达信息。它不但能快速、详细地同时分析成千上万个基因转录子的丰富信息,还能发现新基因,因此是基因表达定性和定量研究的一种有效工具,为了解正常作用机制、肿瘤发病机制、信号分子调控机制等提供了基础工具。近年来,通过此技术对动植物及人类众多组织、细胞的基因表达情况进行了分析研究。1SAGE技… 相似文献
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mRNA差异显示技术在营养学研究中的应用 总被引：1，自引：0，他引：1
高等生物大约有 10 0 0 0 0个不同的基因 ,然而在任一细胞中表达的基因仅约占总数的 15 % ,即 15 0 0 0个。基因表达的开启、关闭以及表达量的变化 ,决定了每一个生命体的生长发育、分化以及细胞周期调控、衰老、死亡等生命过程。基因表达的变化是调控细胞生命过程的核心 ,因此研究细胞或组织在不同状态下基因表达的差异已成为分子生物学研究领域的热点之一。目前检测基因表达差异常用的方法有减法杂交、差异杂交、ｍＲＮＡ差显技术 (ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｉｓｐｌａｙｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＰＣＲ ,ＤＤＲＴ ＰＣＲ)等… 相似文献
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抑制性消减杂交技术(SSH)是一种高效分离差异表达基因的方法,可以在转录水平研究机体在不同生理时期、环境变化、疾病等条件下的基因表达差异,因其具有灵敏度高,重复性好的特点,已被广泛用于寻找差异基因的研究。为筛选与病原体致病相关基因,了解病原体与感染细胞之间的分子响应机制,从分子水平探讨某病原体的致病机制;为研究不同强弱毒株之间的毒力差异,寻找新的毒力基因。应用SSH技术,可以同时从病原体和宿主细胞两个层面进行基因表达差异研究。通过构建病原体表达的差减文库或宿主细胞的表达差异文库,分别寻找病原体或宿主细胞的差异表达基因,为进一步研究病原体在机体内引起的各种病变的分子机制,以及今后动物疫病的基因治疗及基因疫苗的研制奠定基础。 相似文献
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分析一对细胞或组织在不同状态下基因表达的差异,已成为分子生物学研究领域的热点之一,用于识别差异表达基因的方法有多种,DDRT-PCR是近年来较为广泛应用的一种技术。DDRT-PCR技术有很多优点,但同时也存在不少问题,通过对其进行不断地改进使这项技术在分子生物学中能更好更广地应用。 相似文献
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目前,在灵长类动物不同物种基因表达的差异研究方面,学者大多忽视了特殊基因的表达情况.基于这种认识,本文对灵长类动物大脑与小脑的组织差异进行了分析,然后对横河候、猩猩和人类这三个物种脑中特殊类型细胞基因表达情况展开了探讨,从而为关注这一话题的人们提供参考. 相似文献
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[目的] 通过基因表达特征的分析,揭示在形成牛胚胎角芽组织中起关键作用的基因和通路,从而更深入地了解角芽发育过程中的分子机制。[方法] 基于牛胚胎角芽组织、额部皮肤组织、脑、心脏、肾、肝脏、肺、瘤胃、骨骼肌、脾脏的转录组测序数据,利用主成分分析(PCA)、差异表达基因分析和基因富集分析来解析角芽组织的基因表达特征。 [结果] 多组织基因表达比较鉴定到810个角芽组织特异高表达基因。主成分分析表明牛胚胎角芽组织与额部皮肤组织的基因表达模式最为相似,但存在1695个显著上调基因（校正p<=0.05), 这些基因功能富集到与神经和骨发育相关的通路。[结论] 从多组织比较、角芽组织和额部皮肤的差异比较两个方面分别鉴定了角芽组织的基因表达特征,角芽组织特异高表达基因富集到骨、神经和皮肤发育相关通路,暗示着角芽组织发育涉及多组织协同,具有复杂的调控机制。 相似文献
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为筛选出草地早熟禾实时荧光定量中的最适内参基因,利用实时荧光定量PCR技术,分析检测6个传统内参基因ACT、GAPDH、UBQ、EF-1α、18s rRNA和β-tublin在草地早熟禾不同组织器官、叶片不同发育期、非生物胁迫和不同激素诱导下mRNA的表达差异情况。利用geNorm、NormFinder和BestKeeper软件综合评价6个候选内参基因的表达稳定性。结果表明,在不同组织、叶片不同发育期、激素诱导和非生物胁迫下,候选内参基因的表达稳定性存在差异。GAPDH在草地早熟禾不同组织器官中表达最为稳定;EF-1α在非生物胁迫下表达最为稳定;不同激素下首选β-tublin;在叶片不同发育期ACT表达最为稳定。综上所述,通过筛选出不同条件下适宜的内参基因不仅有助于提高草地早熟禾基因表达分析的准确性,也为早熟禾属植物其他内参基因的开发提供了理论参考。 相似文献
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Wood SH Clements DN McEwan NA Nuttall T Carter SD 《Veterinary immunology and immunopathology》2008,126(3-4):392-395
Quantitative real-time PCR (qPCR) facilitates the quantification of mRNA expression. Accurate qPCR analysis of gene expression requires the normalisation of data using a reference or housekeeping gene which is expressed at a similar level in all tissues tested. GAPDH is the most well known and most widely used reference gene but many papers have demonstrated that it is not stably expressed in different tissues. The aim of this study was to measure reference gene stability in canine skin using real-time qPCR. Skin samples from healthy control dogs (n=7) and dogs with atopic dermatitis (lesional skin n=7 and non-lesional skin n=7) were used to quantify seven reference genes (IMP, CG14980, S7, HIRA, GAPDH, RPL13A and SDHA) in canine whole skin. Three different statistical programs (Bestkeeper, GeNorm and Normfinder) were used to assess the stability of the reference genes. The results confirmed that GAPDH is not a stably expressed reference gene in canine skin; this finding may influence interpretation of previous qPCR studies on canine skin using this as a reference gene. RPL13A and CG14980 were found to be the most stably expressed genes in canine whole skin and would be more suitable as reference genes in future studies. 相似文献
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为分析仔猪腹泻抗性候选基因在大白仔猪抗性和易感个体间的差异表达情况及组织表达特异性,实验利用荧光定量PCR技术检测整合素β5(ITGB5)基因和黏蛋白13(MUC13)基因在仔猪小肠、脾脏、肺脏、胸腺、肝脏和淋巴6种组织中的表达水平以及在产肠毒素大肠杆菌(ETEC F4)抗性和易感仔猪个体间的差异表达情况。结果表明:大白仔猪ITGB5基因在6种组织中均有一定的表达,在抗性个体小肠组织中的表达量低于易感个体(P>0.05);MUC13基因在小肠中高度表达,在其他组织中表达量较低,且抗性个体的表达量显著高于易感个体(P<0.05)。由此可知,小肠组织中ITGB5基因的低表达和MUC13基因的高表达可能有助于降低致病性大肠杆菌黏附到小肠上皮细胞上,进而实现对致病性大肠杆菌的抗性。ITGB5基因和MUC13基因可能与仔猪腹泻抗性存在密切关系,都可以作为抗性候选基因用于标记辅助选择,应用于抗腹泻仔猪的选育。 相似文献
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实验共设计了8对引物,即发育全能性的标志基因(OTC4)引物1对,管家基因(β-actin)引物1对,三胚层分别特异表达的基因引物各2对。每个胚层筛选出1个在4日龄鸡胚上表达的基因,然后用RT-PCR法检测性原细胞皮下移植10d后和精原干细胞翅下移植8d后组织内这3个基因的表达情况。结果表明:在OTC4基因和β-actin基因都表达的情况下,性原细胞皮下移植10d后的组织和精原干细胞翅下移植8d后组织都是中胚层和外胚层基因表达,内胚层基因不表达,即成体鸡精原干细胞和性原细胞可自动分化成中胚层和外胚层2个胚层,这说明成体鸡精原干细胞和性原细胞拥有形成多能细胞的潜能。 相似文献
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酪氨酸酶（tyrosinase,Tyr）基因在调控动物色素合成的过程中发挥关键作用。为了解tyr基因与虹鳟（Oncorhynchus mykiss）体色变异的关系,本研究对虹鳟tyr-1和tyr-2基因进行了蛋白序列分析,并利用实时荧光定量PCR检测两种基因在野生型虹鳟（虹鳟）和黄色突变型虹鳟（金鳟）体色发生的19个不同时期和成鱼13种不同组织中的表达差异。蛋白序列分析结果表明,Tyr-1和Tyr-2都是亲水性蛋白,且蛋白结构主要是无规则卷曲和α-螺旋;实时荧光定量PCR结果显示,tyr-1基因在胚胎各时期均有表达,tyr-1基因表达量在虹鳟受精期最高,桑椹期次之,且显著高于其他时期（P<0.05）;tyr-1基因表达量在金鳟16-细胞期最高,且显著高于其他时期（P<0.05）;tyr-2基因分别从虹鳟囊胚期和金鳟原肠期开始表达,表达量均在心跳期达到最高且显著高于其他时期（P<0.05）。出膜后,tyr-1、tyr-2基因分别在虹鳟5日龄和金鳟3月龄表达量最高。在胚胎各时期中,tyr-1、tyr-2基因在虹鳟中表达量普遍高于金鳟,出膜后普遍低于金鳟。在各组织中,tyr-1基因在皮肤、眼睛、肾脏、肝脏等组织中有较高表达,tyr-2基因主要在皮肤、眼睛中有较高表达,在其他组织中表达量较低。以上结果表明,tyr-1和tyr-2基因与虹鳟体色变异具有一定的相关性,为深入阐明虹鳟体色变异机制和体色遗传改良奠定了理论基础。 相似文献
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The peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) are the members of superfamily of nuclear hormone receptors. A great number of studies in rodent and human have shown that PPARs were involved in the lipids metabolism. The goal of the current study was to investigate the expression pattern of PPAR genes in various tissues of chicken. The tissue samples (heart, liver, spleen, lung, kidney, stomach, intestine, brain, breast muscle and adipose) were collected from six Arber Acres broilers (8 weeks old, male and female birds are half and half). Semi-quantitative RT-PCR and Northern blot were used to characterize the expression of PPAR-alpha and PPAR-gamma genes in the above tissues. By semi-quantitative RT-PCR, the results showed the expression level of PPAR-alpha gene was higher in brain, lung, kidney, heart and intestine, medium in stomach, liver and adipose than in spleen, and it did not express in breast muscle. The expression level of PPAR-gamma gene was higher in adipose, medium in brain and kidney than in spleen, heart, lung, stomach and intestine, but it did not express in liver and breast muscle. Northern blot results showed that PPAR-alpha gene expressed in heart, liver, kidney and stomach, and the intensity of hybridization signal was the stronger in liver and kidney than in other tissues, however, PPAR-gamma gene only expressed in adipose and kidney tissues. The results of this study showed the profile of PPAR gene expression in the chicken was similar to that in rodent, human and pig. However the expression profile of chicken also have its own specific trait, i.e. compared with mammals, PPAR-alpha gene can not be detected in skeletal muscle and PPAR-gamma gene can be stronger expressed in kidney tissues. This work will provide some basic data for the PPAR genes expression and lipids metabolism of birds. 相似文献