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1.
为证实GP5蛋白B表位是否具有诱导抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中和抗体的能力,本实验合成了PRRSV CH-la株和高致病性PRRSV(HP-PRRSV)HuN4株B表位的短肽,分别免疫家兔制备两份特异性多肽抗血清.此外,将12头PRRSV及其抗体均为阴性的健康仔猪以HP-PRRSV HuN4疫苗毒株(HuN4-F112)进行基础免疫,然后用强毒株(HuN4-F5)进行多次接种,制备猪高免血清.间接免疫荧光检测(IFA)结果显示,两份多肽抗血清均能与PRRSV经典株和变异株发生特异性反应,IFA抗体效价无差异,表明两份血清没有显著差异.病毒中和试验结果表明,两份多肽抗血清均不具有中和PRRSV活性.间接ELISA和病毒中和试验结果表明,猪高免血清中针对B表位肽的ELISA抗体水平与血清抗PRRSV中和抗体之间没有正相关关系,而且B表位肽不能抑制中和抗体.以上结果表明HP-PRRSV B表位不能诱导产生中和抗体. 相似文献
2.
《中国畜牧杂志》2015,(19)
国内外研究表明通过对奶牛血液及乳汁中孕酮水平的检测能有效的用于奶牛发情鉴定、妊娠诊断及繁殖障碍性疾病的监测。本研究旨在制备鼠抗孕酮单克隆抗体,为奶牛孕酮免疫学检测技术提供研究基础。实验采用碳化二亚胺方法合成孕酮完全抗原,经SDS-PAGE电泳及紫外分光光度计扫描鉴定,结果表明孕酮免疫抗原(P4-BSA)及检测抗原(P4-OVA)合成制备成功。乳化后的P4-BSA经皮下免疫小鼠,三免后血清效价可达到1∶64000。采用聚乙二醇化学融合方法进行细胞融合,间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞株,最终获得一株能稳定分泌Ig G1型抗孕酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株,诱生的腹水经辛酸硫酸纯化制备,抗体的特异性较好。 相似文献
3.
副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种世界范围内广泛存在的革兰氏阴性食源性致病菌,其vscF基因编码的T3SS1针状蛋白VscF,在侵袭宿主细胞过程中扮演重要角色。为深入研究VscF蛋白在T3SS1针状结构组装过程中的功能,并制备VscF特异性多肽抗体,利用OptimumAntigenTM抗原多肽设计软件,筛选最佳抗原目标肽段,然后将肽段与KLH载体蛋白偶联后免疫新西兰大白兔,收集兔血清制备多克隆抗体,并利用间接ELISA、Western Blot、间接免疫荧光检测方法,鉴定多抗效价和特异性。间接ELISA检测结果显示,该多肽抗体效价达1:512 000,显示出该多肽抗体的高敏感度;Western Blot与间接免疫荧光检测结果显示,该多抗能与原核表达的VscF蛋白发生特异性反应。结果表明,筛选的VscF短肽制备的多克隆抗体敏感度高,可作为VscF验证试验中具有特异性结合作用的抗体,能够为后续生物试剂机理研究奠定基础。 相似文献
4.
利用人工合成的多肽制备HA的特异性多克隆抗体,以期用于HA基因的免疫调控机制研究。根据GenBank中报道的皮蝇素A（HyderminA,HA）一级结构信息以及HA抗原生物学信息,获得三段序列特异性较高的多肽,采用9一氟甲氧羰基固相合成法获得多肽,采用HPLC和LC·MS测定合成多肽的浓度和分子量,试验表明目的多肽纯度达91．2％、目的多肽分子量为28kD。将多肽与KLH进行偶联,并用其免疫新西兰大白兔以获得抗血清和多克隆抗体。采用ELISA和Western blotting测定其效价和特异性,经ELISA检测表明抗血清可与Pep发生特异性免疫反应,经Western blotting试验表明抗血清和多克隆抗体可识别HA特异性条带,其相对分子量为28kD,与预测分子量相符。该抗体的制备为研究HA免疫调控机制提供了有用工具。 相似文献
5.
本研究合成并鉴定了黄曲霉毒素M1人工抗原,通过动物免疫制备出敏感性高、特异性好的鼠源黄曲霉毒素M1多克隆抗血清。采用琥珀酸酐改造黄曲霉毒素M1,并将其改造物按两种方法(DCC和EDC)分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联,合成免疫抗原AFM1-BSA和检测抗原AFM1-OVA,经过薄层色谱、紫外扫描和凝胶电泳鉴定后,免疫BALB/c小鼠,共免疫3次,每次间隔3周,最后1次免疫10d后,断尾采血,制备多抗血清。经过测定,免疫的3只小鼠效价均达到了1:104以上,2号小鼠多抗血清的敏感性最好,半数抑制浓度IC50(50%inhibitive concentration,IC50)为37.61ng/m L,且具有良好的特异性。本研究成功合成了黄曲霉毒素M1人工抗原和多克隆抗体血清,为黄曲霉毒素M1单克隆抗体制备及其免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。 相似文献
6.
《畜牧兽医学报》2015,(12)
拟测定在PCV2ORF2Cap P1多肽抗原中添加从PCV2ORF1、ORF3中筛选的Th细胞表位多肽在促进其免疫原性中的作用,以及合成表达的PCV2ORF2Cap P1多肽抗原作为疫苗抗原的可行性。采用生物信息学及分子生物学方法,筛选获得1条泛宿主新型Th细胞表位多肽和3条PCV2特异的含有Th细胞抗原表位的多肽序列,然后将这4条Th细胞多肽氨基酸序列与筛选自ORF2Cap1上的1条B细胞表位多肽序列进行串联组合,密码子优化,插入酶切位点、终止密码子,然后进行密码子适应指数和分布频率分析,预测可以实现高效表达后再进行化学合成。合成的P1多肽抗原连接到pET-30a表达载体,并转化至BL21(DE3)pLysS感受态细胞中,构建表达工程菌BL21(DE3)pLysS-pET-30a-P1。经IPTG诱导表达后P1可实现高效表达,SDS-PAGE鉴定表达量,Western Blot鉴定其生物活性,然后分别免疫小鼠和猪,测定小鼠免疫后的抗体水平以及猪免疫后P1合成多肽抗原对外周血淋巴细胞的刺激增殖情况。结果表明,设计合成表达的PCV2P1多肽抗原序列,密码子适应性指数为0.89,能够实现高水平表达,目的片段大小约为28.29ku,具有良好的免疫原性;MTT试验结果表明,P1多肽抗原免疫后机体内IFN-γ和IL-4的表达量明显增加,且与对照组差异显著(P0.05)。这说明P1能够诱导机体产生细胞免疫和体液免疫反应,为其作为疫苗用抗原的进一步研究奠定了理论基础。 相似文献
7.
《中国奶牛》2015,(Z1)
本研究合成并鉴定了黄曲霉毒素M1人工抗原,通过动物免疫制备出敏感性高、特异性好的鼠源黄曲霉毒素M1多克隆抗血清。采用琥珀酸酐改造黄曲霉毒素M1,并将其改造物按两种方法(DCC和EDC)分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联,合成免疫抗原AFM1-BSA和检测抗原AFM1-OVA,经过薄层色谱、紫外扫描和凝胶电泳鉴定后,免疫BALB/c小鼠,共免疫3次,每次间隔3周,最后1次免疫10d后,断尾采血,制备多抗血清。经过测定,免疫的3只小鼠效价均达到了1:104以上,2号小鼠多抗血清的敏感性最好,半数抑制浓度IC50(50%inhibitive concentration,IC50)为37.61ng/m L,且具有良好的特异性。本研究成功合成了黄曲霉毒素M1人工抗原和多克隆抗体血清,为黄曲霉毒素M1单克隆抗体制备及其免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。 相似文献
8.
9.
为检测磺胺甲恶唑(SMZ)的残留,用重氮化方法将SMZ偶联于载体蛋白BSA和OVA上,合成了免疫抗原BSA-SMZ和包被抗原OVA-SMZ。经紫外扫描、SDS-PAGE电泳鉴定后,免疫BALB/c小鼠,制备多抗血清;利用间接ELISA法测定多抗血清效价,竞争ELISA测定多抗血清的敏感性和特异性。结果表明,所合成的免疫抗原效果较好,6只免疫小鼠多抗血清的效价均大于1∶1.28×104,5号小鼠的多抗血清敏感性最高,半数抑制浓度为47.1ng/mL,与其他磺胺类药物无交叉反应,具备良好的特异性。试验成功合成了SMZ人工抗原,并制得了敏感性高、特异性好的鼠源多抗血清,为SMZ单克隆抗体制备及其免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。 相似文献
10.
猪流行性腹泻病毒S基因B细胞表位的筛选及其单克隆抗体的制备与鉴定 《畜牧与饲料科学》2022,43(4):14-18
目的 应用生物学软件与单克隆抗体技术相结合的方法鉴定PEDV S2基因B细胞表位肽。方法 利用CLC Sequence viewer 6.8软件及在线数据库IEDB筛选出PEDV S2基因B细胞表位,并人工合成表位肽。将表位肽与钥孔血蓝蛋白（KLH）耦联后作为抗原,免疫雌性BALB/c小鼠,通过ELISA法筛选出抗体效价较高的小鼠进行1次加强免疫,3 d后取脾脏制备脾细胞悬液进行细胞融合。经HAT选择培养基培养筛选有效杂交瘤细胞,采用ELISA法筛选阳性克隆继续进行扩大培养。将部分阳性杂交瘤细胞进行小鼠腹腔注射,并收集腹水。通过ELISA方法分别检测小鼠腹水和单克隆细胞株培养上清液抗体效价,确定最高效价作为后备细胞株。结果 筛选出B细胞表位肽序列为:MQYVYTPTYYML;免疫多肽抗原后融合前血清抗体效价达到1:2 000;BALB/c小鼠腹水及单克隆细胞株培养物上清液ELISA检测结果显示抗体效价达到1:4 000。结论 筛选出了PEDV S2基因B细胞表位,为PEDV表位肽疫苗载体构建研究提供参考。 相似文献
11.
磺胺二甲嘧啶免疫抗原的合成研究 总被引：1，自引：1，他引：0
试验旨在研究磺胺二甲嘧啶（SM2）免疫抗原的合成。用重氮化方法将SM2分别与牛血清蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联,合成了免疫抗原SM2-BSA和包被抗原SM2-OVA。紫外扫描和聚丙烯胺凝胶电泳结果表明, SM2-BSA的紫外吸收光谱与BSA、SM2相比均发生了改变,证明偶联成功,并测得SM2-BSA的结合比为13∶1;用SM2-BSA免疫BALB/c小鼠,获得了高效价和特异的多克隆抗体。结果表明,半抗原SM2和载体蛋白偶联成功,并可获得高价、敏感的多克隆抗体。 相似文献
12.
E.D Williamson R.L.S Patterson E.R Buxton K.G Mitchell I.G Partridge N Walker 《Livestock Production Science》1985,12(3):251-264
The effects of specific immunization against 5α-androstenone have been examined in large, genetically homologous groups of boars reared either to bacon weight (90–95 kg live weight) or to heavy manufacturing weight (115–120 kg live weight). At the lighter weight, immunization significantly (P < 0.05) reduced the concentration of androstenone in the adipose tissue from a mean value of 1.77 (S.E. 0.2) μg g?1 fat in untreated boars (n=39) to 1.10 (S.E. 0.18) μg g?1 for animals (n=19) treated with 5α-androstene-3-BSA. In contrast, boars (n=20) treated with 5α-androstenone-11-BSA as immunogen accumulated androstenone to a level of 1.99 μg g?1 fat (S.E. 0.38). At the heavier weight, immunization reduced the accumulation of androstenone in adipose tissue from a mean value of 1.81 μg g?1 fat (S.E. 0.22) in untreated boars (n=76) to 1.17 μg g?1 (S.E. 0.19) for animals (n=22) treated with androstene-3-BSA as immunogen. In contrast, boars (n=21) treated with androstenone-11-BSA as immunogen accumulated androstenone to a mean level of 1.74 μg g?1 fat (S.E. 0.46). No detrimental side-effects were observed in the immunized animals and the advantages of male-type performance and carcass composition were fully preserved. 相似文献
13.
The 22.6 kDa tegumental membrane-associated antigen of schistosomes is of recognized importance in immunity to schistosomiasis. In China, bovines are known to play an important role in the transmission of Schistosoma japonicum. Ten buffaloes (Bos buffelus) were vaccinated with a recombinant form (reSj-22) of the S. japonicum 22.6 kDa tegumental antigen (Sj-22) and the sera were used to identify and map possible linear B-cell epitopes on this molecule using a series of 18 overlapping synthetic peptides (P1-P18). Sera from all of the ten vaccinated buffaloes reacted strongly with Sj-22 in western blots and in ELISA, while sera from a further ten adjuvant (Quil A) control buffaloes did not. Four peptides (P3, P8, P9 and P10) were predominantly recognized by at least 90% of the buffalo sera. This pattern of recognition is similar to that obtained in a previous study we undertook in mice immunized with the same antigen whereby peptides 3, 8, 9 and 10 were recognized by over 80% of CBA strain mice. The peptide most frequently recognized by mice (peptide 6), and mapping to an EF-hand calcium binding domain, was recognized by six of the ten vaccinated buffaloes. The major difference between buffaloes and mice occurred with peptide 1 which was recognized very frequently by all three strains of mice tested but was only weakly recognized by three of the ten buffaloes. This study provides a valuable reference for further study on the immunity stimulated by the 22.6 kDa tegumental antigen in the murine model and a natural bovine host of Schistosomiasis japonica. 相似文献
14.
应用进口的睾酮-3-羧甲肟和雌酮-3-半琥珀酸酯、采用混合酸酐法与牛血清白蛋白连接,得到睾酮和雌酮主动免疫制剂。用这两种免疫制剂在配种季节前6周和3周连续两次分别处理两群苏联美利奴母羊。结果发现,母羊用睾酮和雌酮主动免疫后产双羔的母羊百分数分别比对照组提高320.1％和103.2％,产羔率分别比对照组提高42.7％和35.4％。核算两种免疫制剂的制备成本和产品收入,表明睾酮和雌酮主动免疫方法分别提高绵羊生产经济效益达20.7％和12.8％。因此认为,睾酮主动免疫方法具有推广应用价值。 相似文献
15.
Kamanga-Sollo E White ME Chung KY Johnson BJ Dayton WR 《Domestic animal endocrinology》2008,35(3):254-262
Androgenic and estrogenic steroids enhance muscle growth in animals and humans. Estradiol-17beta (E2) and trenbolone acetate (TBA) (a synthetic testosterone analog) increased IGF-I mRNA expression in bovine muscle satellite cell (BSC) cultures. The goal of this study was to evaluate the mechanisms responsible for this increase by evaluating the effects of ICI 182 780 (an E2 receptor antagonist), flutamide (an androgen receptor inhibitor), G1 (a GPR30 agonist), and BSA-conjugated E2 on E2 and/or TBA-stimulated IGF-I mRNA expression in BSC cultures. Flutamide completely suppressed TBA-stimulated IGF-I mRNA expression in BSC cultures. ICI 182 780 did not suppress E2-stimulated IGF-I mRNA expression and 100nM ICI 182 780 enhanced (93%, p<0.05) IGF-I mRNA levels in BSC cultures. G1 (100nM) stimulated IGF-I mRNA expression (100%, p<0.05) but had no effect on proliferation in BSC cultures. E2-BSA, which cannot cross the cell membrane, stimulated IGF-I mRNA expression (approximately 100%, p<0.05) in BSC but even at extremely high concentrations had no effect on proliferation. In summary, our data indicate the E2-stimulation of proliferation and E2-stimulation of IGF-I mRNA expression in BSC cultures occur via different mechanisms. Our previous results showing that ICI 182 780 inhibited BSC proliferation and results of the current study showing lack of response to E2-BSA or G1 suggest that E2-stimulated proliferation in BSC cultures is mediated through classical estrogen receptors. Stimulation by ICI 182 780, G1 and E2-BSA suggests the E2-stimulated IGF-I mRNA expression in BSC cultures is mediated through the GPR30 receptor. 相似文献
16.
本试验旨在研究抗菌肽和中草药添加剂对肉鸡生长性能、血清生化指标和肠道形态的影响。选用600只体重相近的10日龄麻黄肉鸡作为试验动物,随机分成4个组,分别为对照组(饲喂基础饲粮)、抗菌肽组(饲喂基础饲粮+200 mg/kg抗菌肽)、中草药组(饲喂基础饲粮+200 mg/kg中草药添加剂)和抗菌肽+中草药组(饲喂基础饲粮+200 mg/kg抗菌肽和200 mg/kg中草药添加剂),每组6个重复,每个重复25只鸡。试验期47 d。结果表明:1)与对照组相比,10~21日龄,抗菌肽组和抗菌肽+中草药组肉鸡10~21日龄平均日采食量显著提高(P<0.05);22~43日龄,抗菌肽组和中草药组肉鸡平均日增重显著提高(P<0.05),试验组平均日采食量和料重比均显著降低(P<0.05),但抗菌肽+中草药组死亡率显著提高(P<0.05);44~56日龄,抗菌肽组和中草药组肉鸡平均日采食量和平均日增重显著提高(P<0.05),料重比显著降低(P <0.05),而抗菌肽+中草药组肉鸡平均日采食量显著降低(P<0.05),死亡率显著提高(P<0.05)。2)与对照组相比,抗菌肽组肉鸡血清球蛋白含量显著提高(P<0.05),试验组血清丙二醛和D-乳酸含量显著降低(P<0.05)。3)与对照组相比,抗菌肽组肉鸡十二指肠绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度值显著提高(P<0.05),中草药组和抗菌肽+中草药组十二指肠绒毛高度显著提高(P<0.05);抗菌肽+中草药组空肠绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度值显著降低(P<0.05),回肠绒毛高度和隐窝深度显著降低(P<0.05),回肠绒毛高度/隐窝深度值显著提高(P<0.05)。综上所述,饲粮添加200 mg/kg抗菌肽或中草药添加剂可以显著提高22~56日龄麻黄肉鸡生长性能,降低血清D-乳酸含量,同时改善小肠形态结构,但两者不宜混合使用。 相似文献
17.
本研究采用间接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)检测黄曲霉毒素B1(aflatoxins B1,AFB1)残留量。将AFB1与蛋白质载体牛血清蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备了AFB1-BSA和AFB1-OVA偶联物,以AFB1-BSA作为免疫原制备特异性抗体,并成功建立了AFB1残留间接竞争ELISA检测方法及检测试剂盒。试剂盒IC50为128.8 ng/L,检测线性范围为50~1800 ng/L,检测限不超过100 ng/kg;食用油、花生和谷物的平均添加回收率大于71.3%,批内、批间变异系数均小于14.2%。因此,本试剂盒具有操作简便、检测快速、灵敏度高等特点,将在植物性食品中AFB1的残留检测中发挥重要作用。 相似文献
18.
To provide basic information for researching the biological function of antimicrobial peptide P3 from bovine hemoglobin and its analogs (JH-0, JH-1, JH-2 and JH-3), tools on line were utilized to analyze some bioinformatic features of these five peptides. The results showed that the isoelectric point of these five peptides were all more than 8.00. All of these five peptides had positive charge, no transmembrane domain, no signal peptide sequence, no glycosylation sites,were hydrophobins and located at extracellular. The secondary structure of peptide P3 and JH-2 had α-helix and β-sheet, JH-3 was all α-helix, while JH-0 and JH-1 were coil. Peptide P3, JH-2 and JH-3 had a glycosylation site at the thirteenth site of amino acid (Thr, T), respectively. Based on these results, we conjectured that antimicrobial peptide P3 and its analogs could kill bacteria through the interaction with cell wall or cell membrane. 相似文献
19.
为研究牛血红蛋白源抗菌肽P3及其类似肽（JH-0、JH-1、JH-2、JH-3）的生物学功能,本研究利用在线软件分析了抗菌肽P3及其类似肽的生物信息学特性,发现这5个抗菌肽均带正电荷,等电点均大于8.00,均为疏水蛋白,定位于细胞外,不含有跨膜区、信号肽序列和糖基化位点,P3和JH-2的二级结构为α-螺旋+β-折叠,JH-3为100%的α-螺旋,JH-0和JH-1为无规则卷曲结构,P3、JH-2和JH-3在第13位氨基酸即苏氨酸（Thr,T）有一个糖基化位点。根据分析结果推测抗菌肽P3及其类似肽可作用于细胞壁或细胞膜,从而使菌体死亡。 相似文献
20.
雌二醇多克隆抗体的制备与鉴定 总被引：4，自引：0，他引：4
制备雌二醇完全抗原,并通过免疫家兔得到多克隆抗体,为下一步制备雌二醇单克隆抗体和雌二醇检测ELISA试剂盒奠定基础。试验以牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)为载体,采用碳化二亚胺法,合成了雌二醇(E2)的2种免疫偶合物:免疫原E2-BSA和包被原E2-OVA;通过紫外光谱定性证明偶合物偶联成功与否,并对偶合物的蛋白含量、结合比进行测定并以免疫原E2-BSA免疫家兔,制备多克隆抗体,用包被原E2-OVA进行ELISA,对多克隆抗体特异性及效价进行检测。结果表明成功合成了雌二醇人工抗原即免疫原E2-BSA和包被原E2-OVA,二者的蛋白浓度分别为5.455和7.533mg/mL,结合比分别为7:1和8:1;制备的多克隆抗体特异性好,血清效价为1:106。 相似文献