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1.
应用杆状病毒表达的重组核蛋白及单抗建立了竞争ＥＬＩＳＡ（Ｃ－ＥＬＩＳＡ），用于抗Ａ型禽流感病毒核蛋白抗体的检测。试验检测了７５６只鸡，１１２３只火鸡，７０７只鸸鹋和１２６１只鸵鸟的共３８４７个血清样品。与琼脂扩散试验（ＡＧＩＤ）对比，Ｃ－ＥＬＩＳＡ方法对上述四种血样的敏感性均为１００％；而与血凝抑制试验（ＨＩ）相比，则其敏感性在鸡、火鸡和鸸鹋为１００％。鸵鸟为９６．２％。经ＡＧＩＤ检测为阴性而Ｃ－ 相似文献
2.
ELISA法与HI法检测鸡新城疫抗体的比较及ELISA阴、阳性临界点对临床检测结果的影响 总被引：4，自引：0，他引：4
应用商品化酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）试剂盒和血球凝集抑制（ＨＩ）试验同时测定１８７份常规鸡新城疫（ＮＤ）抗体血样。结果显示,二种方法的抗体效价呈显著相关,其相关系数为０．８３。在此基础上,以ＨＩ法为标准方法对ＥＬＩＳＡ的临床检测结果进行了分析。ＨＩ法的测定结果表明,该试验群的抗体阳性率为５４．５％。按试剂盒提供的阴、阳性临界点判定结果,ＥＬＩＳＡ的相对灵敏度为９７．１％,相对特异性为６１．２％,反映总体测试能力的指标即检测准确率为８０．７％,Ｙｏｕｄｅｎ指数为０．５８;而具临床指导意义的指标即阴、阳性结果预测值分别为９４．５％和７５％。本试验还根据上述指标应用了一种改进的ＴＧ－ＲＯＣ分析方法（Ｔｗｏ－ＧｒａｐｈＲｅｃｅｉｖｅｒＯｐｅｒａｔｉｎｇＣｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ）,对如何选择合适的ＥＬＩＳＡ临界点进行了分析。结果显示,在不同条件下,ＥＬＩＳＡ试剂盒所提供的临界点并非都是最佳的,使用者可根据检测目的采用ＴＧ－ＲＯＣ法进行调整;同时也证实ＥＬＩＳＡ法是一种敏感、特异、快速、简便的血清学方法,可以大批量样品检测时采用。 相似文献
3.
蓝舌病ＶＰ７抗原包被板在－２０℃保存期为６个月,４℃保存１个月。抗原批内重复性试验ＣＶ＜１０％,批间重复性试验ＣＶ＜１０％。ＶＰ７－ＥＬＩＳＡ与ＡＧＩＤ对４２０份血清平行检测结果：ＶＰ７－ＥＬＩＳＡ较ＡＧＩＤ试验多检出了 １３份阳性样品, ＶＰ,－ＥＬＩＳＡ检出的阳性样品对ＡＧＩＤ阳性样品的覆盖率为９７．４％,对采自陕西等省１８１６份牛、羊血清样品进行检测,检出阳性样品数为２５７份阳性检出率为１４．２％。 相似文献
4.
蓝舌病ＶＰ７抗原包被板在－２０℃保存期为６个月,４℃保存１个月。抗原批内重复性试验ＣＶ＜１０％,批间重复性试验ＣＶ＜１０％。ＶＰ７－ＥＬＩＳＡ与ＡＧＩＤ对４２０份血清平行检测结果：ＶＰ７－ＥＬＩＳＡ较ＡＧＩＤ试验多检出了１３份阳性样品,ＶＰ７－ＥＬＩＳＡ检出的阳性样品对ＡＧＩＤ阳性样品的覆盖率为９７．４％,对采自陕西等省１８１６份牛、羊血清样品进行检测,检出阳性样品数为２５７份,阳性检出率为１４． 相似文献
5.
检测鸡慢性呼吸道病抗体ELISA方法的建立 总被引：12，自引：1，他引：11
用败血支原体（ＭＧ）Ａ５９６９株制备ＥＬＩＳＡ抗原,与抗鸡ＩＧ单抗ＩＢ７酶结合物建立了检测鸡血清抗体水平的间接ＥＬＩＳＡ方法,交叉试验、阻断试验、重复性试验等表明该方法重复性好、特异性强、灵敏度高。确立了将鸡血清６４倍稀释监测ＥＬＩＳＡ效价（ＥＴ）的回收方程ｙ＝１．３８３＋０．２２４ｘ,可用于定量测定,血凝抑制试验（ＨＩ）与ＥＬＩＳＡ比较试验表明,ＥＬＩＳＡ法比ＨＩ试验敏感性高４倍以上。 相似文献
6.
银加强胶体金技术检测猪细小病毒的研究 总被引：18，自引：1，他引：17
本研究首次成功地建立了检测猪细小病毒（ＰＰＶ）抗原的银加强胶体金检测法（ＳＥＣＧＡ），并确定了操作流程中的最佳试验条件。应用该法对纯化ＰＰＶ抗原的最低检出量为０．３１２５ｎｇ／点，其敏感性分别为间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＨＡ的８倍和１０００倍。特异性阻断试验和交叉反应试验证明ＳＥＣＧＡ具有较高的特异性。２０份样本ＳＥＣＧＡ的检测结果与病毒分离和鉴定结果完全相符。ＳＥＣＧＡ和间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ对７７份样本检测的阳性率分别为８３．１％和８０．５％，其阳性符合率为９６．９％。研究结果表明本法具有经济、敏感性、特异性强等优点，可用于ＰＰＶ感染的特异诊断。为胶体金技术应用于畜禽传染病的诊断和研究奠定基础。 相似文献
7.
单抗介导的斑点ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
用群特异性的单克隆抗体作第一抗体,用酶标兔抗体ＩＢＶＩｇＧ作第二抗体,建立夹心法Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ程序检测鸡传染性支气管炎病毒抗原。试验表明,本程序检测ＩＢＶ抗原高度敏感性和特异性。最低抗原检出量为０．５μｇ,约１００个气管环半数感染量（１００ＴＯＣＩＤ５０）,阳性检出率为９６％。 相似文献
8.
禽流感病毒重组核蛋白ELISA诊断技术的研究 总被引：48，自引：1，他引：47
用表达禽流感病毒（ＡＩＶ）核蛋白基因的杆状病毒感染Ｓｆ９昆虫细胞。以其表达产物制备抗原,建立了以杆状病毒系统表达的ＡＩＶ核蛋白为抗原的禽流感间接酶联免疫吸附试验诊断技术（ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ）。其抗原最适包被量为０．６μｇ／孔,等检血清最适稀释度为１：２００,酶标抗体使用浓度为１：１０００。根据对１４０份ＳＰＦ鸡血清检测结果的统计分析,确定其判定标准为ＯＤ均为阴性;检测Ａ型ＡＩＶ１５个不同亚型（Ｈ１￣Ｈ１５）毒株的特异性血清均为阳性;对人工接种ＡＩＶ的ＳＰＦ鸡第３天即能检出抗体,到第１６２天试验结束时检测仍为阳性。其批内和批间重复试验的变异系数分别在２．９％￣７．２％和３．４％￣９．８％之间。对３１３８份鸡血清进行监测,ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ（ＡＩＶ－ＥＬＩＳＡ）、琼脂扩散 相似文献
9.
分别用血清中和（ＳＮ）试验和单克隆抗体（ＴＧＥｍＡｂ和ＴＧＥ／ＰＲＣＶｍＡｂ）阻断酶联免疫吸附试验（Ｂ－ＥＬＩＳＡ）对８１头美国进口猪血清作猪传染性胃肠炎（ＴＧＥ）抗体检测。ＳＮ试验检出７份阳性血清，检出率为８．６４％；Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清，检出率为８．６４％，无ＴＧＥ阳性。ＳＮ试验检出７份ＴＧＥ抗体阳性血清与Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出的７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清完全重合。结果证明，应用单克隆抗体进行的Ｂ－ＥＬＩＳＡ可鉴别诊断ＴＧＥ与ＰＲＣＶ感染，优于ＳＮ试验 相似文献
10.
以醋酸纤维素膜作为固相载体，辣根过氧化物酶标记鸡抗传染性法氏囊病病毒抗体（ＩＢＤ—ＩｇＧ），饱和二氨基联苯胺为底物显色，建立了鸡传染性法氏囊病双抗体夹心Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ诊断法。经方阵实验确定最佳反应条件为：ＩｇＧ的包被液为０．０５ｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ９．６）碳酸盐缓冲液，包被浓度为１：５０；酶标抗体的工作浓度为１：１００；洗涤液为含０．０５％吐温—８０的０．０２ｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ７．４）磷酸盐缓冲液；封闭液为含０．２％明胶的洗涤液；封闭时间、抗原及酶标抗体的作用时间均为３７℃３０ｍｉｎ。应用本方法和琼扩试验同步检测２０份已知阳性病料、１２０份待检病料和胚毒尿囊液、１０份正常鸡样品，结果表明，Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ阳性率为９０％，而琼扩试验为４０％；凡琼扩试验阳性者，Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ均呈强阳性，而在Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ阳性样品中，只有４４％呈琼扩试验阳性，Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ的敏感度为琼扩试验的１００倍。 相似文献
11.
用ELISA检测蛋和雏鸡中的肠炎沙门氏菌 总被引：1，自引：0，他引：1
将以前用的快速检测环境样品中肠炎沙门氏菌（ＳＥ）的ＥＬＩＳＡ法，经改进后用于食物样品的检测。本实验选择夹心ＥＬＩＳＡ法，捕食阶段用亲和提纯的兔多克隆抗体，检测阶段用高特异单克隆抗体。除ＳＥ以外的３９种细菌，其中包括３２株沙门氏菌，均用ＥＬＩＳＡ法做了交叉试验，结果除ＳＥ外无反应性。将ＳＥ加于食物样品匀浆（雏鸡皮肤、肉和蛋）中测试ＥＬＩＳＡ法的敏感性，用ＥＬＩＳＡ法检测ＳＥ，在浓度为１０％（重量／体 相似文献
12.
应用ＳｅｐｈａｄｃｘＧ－２００层析法纯化鸡减蛋综合症病毒，利用ＮＣ膜作为载体，成功建立了检测ＥＤＳ－７６血请抗体的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。抗原包被浓度为２μｇ／ｍｌ，被检血清浓度为１：２０，酶标兔抗鸡１ｇＧ浓度为１：２００．底物溶液最适ｐＨ值为７．２。对Ａ－Ｆ６个养禽场随机抽检血清１６０份，分别用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ、ＨＩ和ＡＧＰ检测，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检出阳性率为５１．９％，ＨＩ检出阳性率为４６．９％，ＡＧＰ检出阳性率为３１．９％。对１４０日龄鸡人工感染试验，测定抗体消长规律。本方法不需特殊仪器。适用于基层兽医部门和养鸡场对ＥＤＳ－７６的血清学诊断和流行病学调查。 相似文献
13.
对加拿大动物疾病研究所（ＡＤＲＩ）现行的检测ＢＴＶ群特异性抗体的竞争酶联免疫吸附试验（下称标准程序）进行改良，建立新的适合国内实验条件易于推广的试验方法（下称改良程序）。对１５份实验感染ＢＴＶ的参照牛血清和３６０份样品牛血清进行比较检测，结果表明改良程序与标准程序特异性和敏感性基本一致。用琼凝胶免疫扩散试验（ＡＧＩＤ）对上述参照血清和样品血清进行检测，表明改良程序与标准程序均较ＡＧＩＤ试验敏感。本研究进一步验证改良后的Ｃ－ＥＬＩＳＡ可取代传统的ＡＧＩＤ方法成为ＢＴＶ群特异性抗体的检测标准方法，且它还具备操作简便，作用时间短等特点 相似文献
14.
酶联免疫吸附试验检测猪生殖与呼吸综合征抗体的研究 总被引：7，自引：1，他引：6
建立的检测猪生殖与呼吸综合征（ＰＲＲＳ）抗体的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），其抗原包被浓度为１．７ｍｇ／Ｌ，血清的最适稀释度为１：１００，酶标兔抗猪ＩｇＧ的家访工为１：２０００。比较试验表明，ＥＬＩＳＡ的敏感性优于间接免疫荧光试验（ＩＦＡ）。用ＥＬＩＳＡ检测１９９１年从美国进口猪的血清７６份，阳性率为零；１９９５年从加拿大进口猪的血清１６３份，阳性率为５．５２％；北京地区甲猪场的血清１２１份，阳 相似文献
15.
史同瑞 《河南畜牧兽医(综合版)》2000,(6)
最近,Ｓｔａｃｋ等用提取的羊布氏菌１６Ｍ菌株的显性抗原决定簇Ｍ的脂多糖作抗原,并将抗Ｍ抗原决定簇单克隆抗体与辣根过氧化物酶结合,建立了一种竞争ＥＬＩＳＡ（ｃＥＬＩＳＡ）,用于牛布病的诊断,该方法克服了补体结合试验（ＣＦＴ）的缺点。试验检测１４７份布氏菌培养阳性、６４０份培养阴性的样品,结果表明ｃＥＬＩＳＡ优于ＣＦＴ,其敏感性为９７．９%,特异性为１００%。检测保存１、２、３和４周的５０份血样,ｃＥＬＩＳＡ的阳性率分别为１４%、１５%、１５%和１５%,而ＣＦＴ却为１０%、２%、０和０。由此可见,ｃＥＬＩＳＡ检测结果… 相似文献
16.
17.
研制出两株能与鸡组织、鸡蛋和环境样品中肠炎沙门氏菌反应的单克隆抗体（以下简称单抗），并以此建立了能特异检测肠炎门沙氏菌的快速酶联免疫吸附试验和凝集试验。ＥＬＩＳＡ和常规微生物学分离定系统能检出１００％鸡蛋和９９．８％不同野外和人工接种样品中的炎沙门氏菌，滴定试验表明ＥＬＩＳＡ可检出１０＾４个细菌。 相似文献
18.
应用商品化酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）试剂盒和血球凝集抑制（ＨＩ）试验同时测定１８７份常规鸡新城疫（ＮＤ）抗体血样。结果显示，二种方法的抗体效价呈显著相关，其相关系数为０．８３。在此基础上，以ＨＩ法为标准方法对ＥＬＩＳＡ的临床检测结果进行了分析。ＨＩ法的测定结果表明，该试验群的抗体阳性率为５４．５％。按试剂盒提供的阴、阳性临界点判定结果，ＥＬＩＳＡ的相对灵敏度为９７．１％，相对特异性为６１．２％ 相似文献
19.
应用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、琼脂扩散沉淀试验（ＡＧＰ）和鸡气管环培养中和试验（ＳＮｉｎＴＯＣｓ）三种常规血清学方法对实验鸡血样的鸡传染性支气管炎病毒抗体进行了检测。从实验鸡血样的检测结果表明，ＥＬＩＳＡ和气管环中和试验的灵敏度较好，而ＡＧＰ的灵敏度相对较差，但三者均有较好的特异性。对田间送检血样的检测结果表明，ＥＬＩＳＡ与气管环中和试验、ＥＬＩＳＡ与ＡＧＰ的一致性均较好，而气管环中和试验与ＡＧＰ的一致性较差。ＥＬＩＳＡ效价与气管环中和试验效价的相关系数为０．８４ 相似文献
20.
用ELISA法检测犬细小病毒抗体 总被引：1，自引：0，他引：1
本文采用吸附豚鼠犬细小病毒（ＣＰＶ）多克隆抗体的微量板，进行间接酶免疫测定（ＥＬＩＳＡ）检测犬血清中的ＣＰＶ抗体。结果，ＥＬＩＳＡ抗体效价比血凝抑制抗体（ＨＩ）效价高，与ＨＩ效价的相关系数ｒ＝０．７８。 相似文献