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1.
新城疫病毒四平株HN蛋白基因的克隆与序列分析 总被引：4，自引：1，他引：3
新城疫病毒（ＨＤＶ）四平株在鸡胚增殖后纯化，提取ＲＮＡ，然后利用特异性引物，经ＲＴ－ＰＣＲ一次性扩增出了ＮＤＶ四平株的全长ＨＮ基因。将该ＨＮ基因插入ｐＫＳ后测序。序列分析表明，该ＨＮ基因核苷酸长度为１７４２ｂｐ，编码５７１个氨基酸，序列中有５个糖基化位点，１２个半胱氨酸残基。同源性分析表明，四平株ＨＮ基因与目前国外发表的其他ＮＤＶＨＮ基因相比，核苷酸序鲁同源性在８３．４￣８９．２％之间，推导的氨基 相似文献
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牛传染性鼻气管炎病毒TK基因缺失株与野毒株PCR鉴别诊断方法的研究 总被引：5，自引：0，他引：5
根据已发表的牛传染性敢管炎病毒（ＩＢＲＶ）ＴＫ基因和ｇＢ基因序列，应用Ｏｌｉｇｏ４．１程序设计两对引物ＰＴＫ１和ＰＴＫ２及ＰＢ１和ＰＢ２，分别对已构建的ＴＫ基因缺失（ＴＫ）ＩＢＲＶ以及ＩＢＲＶＬＡ株、洛精、美精、ＢａｒｔｈａＮｕ／６７株、Ｂ７株、云南－１和云南－２分离株进行了ＰＣＲ扩增，结果显示７株ＩＢＲＶＤＮＡ用引物ＰＴＫ１和ＰＴＫ２扩增产生４５７ｂｐ的特异性片段，而ＴＫＩＢＲＶ只出现１１０ｂｐ 相似文献
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以鸡胚尿囊液繁殖的新城疫病毒（昌黎株）,经差速离心浓缩后,提取ＲＮＡ,参考国外发表新城疫病毒Ｆ基因序列,设计并合成了一对长度皆为２６ｂｐ特异性引物,经ＲＴ－ＰＣＲ扩增出ＮＤＶ昌黎株部分Ｆ基因序列,将其插入本室构建的ＦｐＫＳ（－）,进行序列测定。序列分析表明该部分Ｆ基因长度为８１０ｂｐ,编码２６７个氨基酸,有４个半胱氨酸残基和２个糖基化位点,裂解位点区（１１２－１１７）氨基酸序列为Ｒ－Ｒ－Ｑ－Ｋ－Ｒ－Ｆ,与所有强毒株在这一区域的序列（Ｒ／Ｋ－Ｒ－Ｑ－Ｒ／Ｋ－Ｒ－Ｆ）相符,证明ＮＤＶ昌黎株为强毒株。 相似文献
4.
新城疫病毒F48E9株HN基因的克隆与酶切分析 总被引：9，自引：0，他引：9
为深入探讨新城疫病毒（ＮＤＶ）的结构与功能的关系，扩增和克隆了Ｆ４８Ｅ９株ＮＤＶ的ＨＮ基因。首先以提取的Ｆ４８Ｅ９株ＮＤＶ基因组ＲＮＡ为模板逆转录合成第一链ｃＤＮＡ，然后用ＨＮ基因特异性引物作ＰＣＲ扩增ＨＮｃＤＮＡ，结果得到１条分子量约１．８ｋｂ的ＤＮＡ带，与ＮＤＶＨＮ基因的大小一致。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交进一步证实其为ＨＮ特异性ｃＤＮＡ。随后采用平端连接法将其克隆到ｐＳＶ·Ｓｐｏｒｔｌ质粒中，应用限制性内切酶ＥｃｏＲＩ、ＳｃａⅠ、ＭｌｕⅠ、ＡｐａⅠ、ＰｓｔⅠ、和ＳｍａⅠ对ＮＤＶＦ４８Ｅ９株ＨＮｃＤＮＡ重组质粒作单酶或双酶切，结果表明，ＮＤＶＦ４８Ｅ９株ＨＮ基因较ＨｉｔｃｈｎｅｒＢ１株的ＨＮ基因缺少１个ＭｌｕⅠ位点（７０５ｂｐ左右），多１个ＰｓｔⅠ位点（８０２ｂｐ左右）。 相似文献
5.
将新城疫病毒（ＮＤＶ）的融合蛋白（Ｆ）基因或血凝素－神经氨酸酶（ＨＮ）基因插入到火鸡疱疹病毒（ＦＶＴ）的一个非必需基因中，构建了重组ＨＶＴ株。ＮＤＶ抗原的表达受来自劳斯肉瘤病毒的一种强启动子的调控。１日龄腹腔内（ＩＡ）接种表达ＮＤＶ融合蛋白的重组ＨＶＴ的鸡不仅产生免疫学反应，而且在２８日龄可抵抗嗜神经ＮＤＶ强毒株Ｔｅｘａｓ ＧＢ的致死性肌肉攻毒（保护率＞９０％）。表达ＮＤＶ ＨＮ的重组ＨＶＴ仅能提 相似文献
6.
新城疫病毒昌黎株与国外毒株HN蛋白基因核苷酸及氨基酸差异性 … 总被引：1，自引：0，他引：1
参考国外发表的新城疫病毒（ＮＤＶ）的ＨＮ基因序列设计了１对特异性引物，应用ＲＴ－ＰＣＲ对ＮＤＶ昌黎株（野毒）的ＨＮ基因进行了扩增，扩增产物克隆后测序。扩增出的ＨＮ基因核苷酸长度为１ ７４２ｂｐ，编码５７１个氨基酸，序列中有６个糖基化位点，１３个半胱氨酸残基，与国外发表的强毒株序列相符。核苷酸同源怀在８８．５％～９２．９％，推导的氨基酸序列同源性在９０．０％～９４．２％之间。 相似文献
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犬瘟热病毒野毒株融合蛋白主要功能区基因的变异研究 总被引：12，自引：2，他引：10
根据犬瘟热病毒（ＣＤＶ）融合蛋白（Ｆ）基因的核苷酸序列，设计合成了１０条引物。用１对引物从延吉犬病料中扩增出了含Ｆ２区基因的３１４ｂｐ的片段。除两端引物序列外为２６５ｂｐ，编码８８个氨基酸。它与日本弱毒株（ＣＤＶ－Ｄ，Ｏｏｄｅｒｓｔｅｐｏｏｒｔ弱毒株（ＣＤＶ－ＯＮ）、海豹瘟热病毒２型（ＰＤＶ２）、１型（ＰＤＶ１）在核苷酸和氨基酸水平上的同源性，分别为９８．１％和９５．５％、９６．２％和９３．２％和 相似文献
8.
新城疫病毒（ＮＤＶ）四平株、昌黎株、青岛株、Ｆ４８Ｅ８株分别接种９日龄ＳＰＦ鸡胚增殖，蚀斑纯化（３代），生物学特性鉴定及结合基因序列分析，表明ＮＤＶ四平株、昌黎株、青岛株均为强毒株。经差数、蔗糖密度梯度离心提纯病毒，分别提取ＲＮＡ，利用一对特异性引物及ＲＴ－ＰＣＲ方法，一次性扩增出 ＮＤＶ四平株、昌黎株、青岛株和 Ｆ４８Ｅ８株的全长 ＨＮ基因，分别将该ＨＮ基因克隆入载体ｐＫＳ（－）并进行测序。序列分析表明，这４个毒株ＨＮ基因核苷酸长度均为１７１３ｂｐ，编码５７１个氨基酸，其中四平株和 Ｆ４８Ｅ８株含有５个糖基化位点，青岛株和昌黎株含有 ６个糖基化位点，四平株含有 １２个半胱氨酸残基，而昌黎株、青岛株和Ｆ４８Ｅ８株含有１３个半胱氨酸残基。３个野生毒株与Ｆ４８Ｅ８相比较，核苷酸序列同源性为８５．７％－９９．３％，推导的氨基酸序列同源性为 ８９．５％－９８．８％，其中 ＮＤＶ四平株与标准强毒 Ｆ４８Ｅ８同源关系最近，核苷酸同源性为 ９９．３％，推导的氨基酸同源性为 ９８． ８％。 相似文献
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新城疫病毒弱毒株分子生物学特性的研究 总被引：3，自引：0，他引：3
于１９９６年从长春地区一养鸡场分离到一株新城疫病毒（ＮＤＶ长春株）,经过病毒生物学特性的研究表明该ＮＤＶ毒株为弱毒株。将ＮＤＶ长春株纯化培养后,提取病毒ＲＮＡ,经ＲＴ－ＰＣＲ扩增Ｆ基因,并测定出Ｆ基因的全部核苷酸序列为１７５８ｂｐ,编码有５５３个氨基酸残基。与国内外发表的部分ＮＤＶ病毒的强毒株和弱毒株的相同序列进行比较,其核苷酸同源性在８８．２％￣９６．７％之间,氨基酸同源性在９０．１％￣９８．１％之间,并与所有弱毒株Ｆ蛋白裂解位点区（１１２￣１１７）氨基酸序列Ｇｌｙ－Ａｒｇ／Ｌｙｓ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ／Ｓｅｒ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ相同,从基因和分子水平上进一步证明ＮＤＶ长春株为ＮＤＶ弱毒株。 相似文献
10.
新城疫病毒(长春株)F蛋白基因的克隆和序列分析 总被引：21，自引：6，他引：15
新城疫病毒（ＮＤＶ）长春株在鸡胚增殖后纯化,提取ＲＮＡ,然后利用特异性引物,经ＲＴ－ＰＣＲ一次性扩增出了ＮＤＶ长春株的全长Ｆ基因。将该Ｆ基因插入ｐＫＳ（－）后,进行了序列测定。序列分析表明,该Ｆ基因核苷酸长度为１７５８ｂｐ,编码５５３个氨基酸,序列中有６个糖基化位点,１３个半胱氨酸残基,裂解位点区（１１２～１１７）氨基酸序列为Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ,与所有弱毒株在这一区域的序列（Ｇｌｙ－Ａｒｇ／Ｌｙｓ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ／Ｓｅｒ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ）相符,证明长春株为弱毒株。同源性分析表明,长春株Ｆ基因与目前国外发表的其他ＮＤＶＦ基因相比,核苷酸序列同源性在８８％～９９％之间,推导的氨基酸序列同源性在９０％～９８％之间 相似文献
11.
R W Morgan J Gelb C S Schreurs D Lütticken J K Rosenberger P J Sondermeijer 《Avian diseases》1992,36(4):858-870
Recombinant strains of herpesvirus of turkeys (HVT) were constructed that contain either the fusion protein gene or the hemagglutinin-neuraminidase gene of Newcastle disease virus (NDV) inserted into a nonessential gene of HVT. Expression of the NDV antigens was regulated from a strong promoter element derived from the Rous sarcoma virus long terminal repeat. Recombinant HVT strains were stable and fully infectious in cell culture and in chickens. Chickens receiving a single intra-abdominal inoculation at 1 day of age with recombinant HVT expressing the NDV fusion protein had an immunological response and were protected (> 90%) against lethal intramuscular challenge at 28 days of age with the neurotropic velogenic NDV strain Texas GB. Recombinant HVT expressing the NDV hemagglutinin-neuraminidase provided partial protection (47%) against the same challenge. Chickens vaccinated with recombinant HVT vaccines had low levels of protection against NDV replication in the trachea when challenged ocularly. Recombinant HVT vaccines and the parent HVT strain provided similar levels of protection to chickens challenged with the very virulent RB1B strain of Marek's disease virus, indicating that insertion of foreign sequences into the HVT genome did not compromise the ability of HVT to protect against Marek's disease. 相似文献
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Vaccination of chickens with a recombinant fowlpox virus containing the hemagglutinin-neuraminidase gene of Newcastle disease virus under the control of the fowlpox virus thymidine kinase promoter. 
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下载免费PDF全文 E Nagy P J Krell R A Heckert J B Derbyshire 《Canadian journal of veterinary research》1994,58(4):306-308
When chickens were vaccinated with a recombinant fowlpox virus (FPV) containing the Newcastle disease virus (NDV) hemagglutinin-neuraminidase (HN) cDNA under the control of the thymidine kinase (TK) promoter and inserted into the FPV TK gene, the FPV antibody response to the recombinant virus was similar to the response to vaccination with standard FPV, and the recombinant virus protected chickens against challenge with virulent FPV. While the presence of the NDV HN cDNA was demonstrated in the recombinant virus, which was stable on serial passage, expression of HN was not detected by hemagglutination, Western blot analysis or immunoprecipitation of infected cell lysate. Chickens vaccinated with the recombinant virus failed to mount an NDV hemagglutination-inhibition antibody response, and they did not resist challenge with velogenic NDV. It was concluded that the TK promoter was too weak to drive the HN gene, but that the insertion into the FPV TK gene did not reduce the immunogenicity of the virus. 相似文献
14.
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从山东济南某非典型新城疫发病鸡群中分离到一株新城疫病毒株（ShD-5—06）,研究其生物学特性表明,该病毒具有新城疫强毒株的一些特征。从该分离株扩增出其F和HN基因,并与标准株进行同源性比较,为探讨NDV是否发生变异提供理论依据。本试验通过RT—PCR法特异性地扩增出F和HN基因全基因序列,并对其与已经发表的序列进行核苷酸序列测定和分析。结果表明,ShD-5—06株的F和HN基因开放性阅读框架（ORF）为1662bp和1716bp,分别编码489个和571个氨基酸。与国外发表的部分新城疫病毒强毒株和弱毒株之间相应序列进行比较,F基因核苷酸序列的同源性在84．1％～88．7％之间,氨基酸同源性在88．1％～93．3％之间;HN基因核苷酸序列的同源性在82．19,5～87．4％之间,氨基酸同源性在88．6％～90．9%之间;F蛋白裂解位点区（112～117）氨基酸组成与强毒株一致,说明NDV山东分离株（ShD-5—06）为新城疫强毒株。 相似文献
16.
本研究旨在从分子水平上掌握中国新城疫病毒的变异情况和新城疫的流行规律,对2008-2009年从中国部分省市养殖场分离的9株新城疫病毒毒株,采用RT-PCR方法扩增其F和HN基因,经克隆和测序,对所得序列进行同源性和遗传进化分析。结果显示,9株分离株有8株为基因Ⅶ型,1株为基因Ⅱ型,F基因开放性阅读框架(ORF)为1662 bp,强毒株同La Sota的核苷酸同源性为83.5%~84.2%。HN基因开放性阅读框架(ORF)为1716或1734 bp,强毒株在538位缺失1个糖基化位点。结果表明,近年流行的ND疫情主要是由基因Ⅶ型NDV引起,F和HN基因的变异可能与频繁的疫苗免疫选择压力有关。 相似文献
17.
为制备基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶蛋白(HN)的单克隆抗体(MAb),本研究利用JS/17病毒株的HN重组蛋白和活病毒分别免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,并通过ELISA、间接免疫荧光和western blot方法筛选,制备了3株特异性识别HN蛋白的单克隆抗体(MAb)。其中,MAb1D4和4D9具有病毒中和活性(VN)及血凝抑制作用(HI),可以识别多种基因型的Ⅱ类NDV,但与Ⅰ类NDV病毒株无反应。MAb 2G8识别线性表位131DYIGGIGKE139,该表位在各病毒株中高度保守。获得的3株MAb可以用于NDV的鉴定及HN蛋白的功能研究。 相似文献
18.
The avian adeno-associated virus (AAAV) is a replication-defective nonpathogenic virus member of the family Parvoviridae that has been proved to be useful as a viral vector for gene delivery. The use of AAAV for transgenic expression of Newcastle disease virus (NDV) hemagglutinin-neuraminidase (HN) protein and its ability to induce immunity in chickens were assessed. Proposed advantages of this system include no interference with maternal antibodies, diminished immune response against the vector, and the ability to accommodate large fragments of genetic information. In this work the generation of recombinant AAAV virions expressing the HN protein (rAAAV-HN) was demonstrated by electron microscopy, immunocytochemistry, and western blot analysis. Serological evidence of HN protein expression after in ovo or intramuscular inoculation of the recombinant virus in specific-pathogen-free chickens was obtained. Serum from rAAAV-HN-vaccinated birds showed a systemic immune response evidenced by NDV-specific enzyme-linked immunosorbent assay and hemagglutination inhibition testing. Positive virus neutralization in embryonated chicken eggs and indirect immunofluorescence detection of NDV infected cells by serum from rAAAV-HN vaccinated birds is also reported. A vaccine-challenge experiment in commercial broiler chickens using a Venezuelan virulent viscerotropic strain of NDV was performed. All unvaccinated controls died within 5 days postchallenge. Protection up to 80% was observed in birds vaccinated in ovo and revaccinated at 7 days of age with the rAAAV-HN. The results demonstrate the feasibility of developing and using an AAAV-based gene delivery system for poultry vaccination. 相似文献
19.
从山东潍坊某非典型新城疫发病鸡群中分离到一株新城疫病毒(暂命名:ShD-5-04),其生物学特性表明该病毒具有新城疫强毒株的一些特征。通过RT-PCR特异性地扩增出F和HN基因序列,并对其进行核苷酸序列测定和分析,结果表明ShD-5-04株的F和HN基因开放性阅读框架(ORF)为1662bp和1716bp,分别编码489个和571个氨基酸,与国外发表的部分新城疫病毒强毒株和弱毒株之间相应序列进行比较,F基因核苷酸序列的同源性在84.1%～88.7%之间,氨基酸同源性在88.1%～93.3%之间;HN基因核苷酸序列的同源性在82.1%～87.4%之间,氨基酸同源性在88.6%～90.9%之间;F蛋白裂解位点区(112-117)氨基酸组成与强毒株一致,说明NDV山东分离株(ShD-5-04)为新城疫强毒株。 相似文献
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新城疫病毒(NDV)的HN蛋白是一个多功能蛋白,具有血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)两种活性,在病毒感染过程中扮演重要角色。本研究利用反向遗传操作技术,将NDV强毒株F48E9的HN基因替换弱毒株rLaSota的HN基因,获得嵌合病毒rL-F48E9HN。收获病毒尿囊液,提取基因组RNA,进行序列分析,结果显示嵌合病毒基因组的HN基因获得了正确替换。嵌合病毒在鸡胚内的生长特性与亲本株LaSota一致,与F48E9的生长特性相差甚远。嵌合病毒红细胞吸附性明显增强,较rLaSota株增加51%,而细胞融合作用无明显变化。rL-F48E9HN的鸡胚平均致死时间(MDT)为148 h,脑内致病指数(ICPI)为0.43,静脉接种致病指数(IVPI)为0,说明rL-F48E9HN的毒力仍然属于弱毒力范围,而没有达到中等毒力或者强毒力。 相似文献