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为评价ST细胞代次的增高对猪细小病毒NJ株免疫原性的影响,将第10、30、60代ST细胞分别接种猪细小病毒NJ株F8、F18代毒种进行病毒培养,通过检测其病毒含量、血凝价以及制备疫苗免疫机体的抗体水平等指标来进行评价。结果表明,各代次病毒含量为10~(7.2)～10~(7.5)TCID_(50)/mL,血凝价为2~9～2~(10);制苗后免疫阴性豚鼠与后备母猪,免疫28 d后均出现抗体反应,HI效价分别为2~7～2~9和2~8～2~9。不同代次毒种接种不同代次ST细胞培养的病毒含量、血凝价及疫苗免疫效力均符合要求。各代次细胞增殖性能稳定,培养的PPV NJ株均能满足兽用生物制品的生产要求。 相似文献
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从中国典型培养物保藏中心(CCTCC)引进High Five细胞并对其进行驯化,获得无血清悬浮驯化株(Hi5-SF)。依据《中华人民共和国药典(2010年版三部)》对其进行细胞生物学特性研究、微生物污染、病毒外源因子及细胞致瘤性检测。结果发现,Hi5-SF细胞复苏活力76.3%,生长曲线呈"S"型,最大增殖密度可达3.50×10~6 mL~(-1),群体倍增时间为26.2h;细菌、真菌及支原体检查均为阴性;血细胞吸附试验、致细胞病变试验和特异性病毒荧光抗体结合物检查结果均为阴性;致瘤性检查结果也为阴性。说明该细胞株符合兽用疫苗生产用细胞质量要求,可以在疫苗研究与生产中应用。 相似文献
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为评价PK15细胞能否用于兽用疫苗的研究和生产,对其进行了生物学特性研究和微生物污染及病毒外源因子检测。结果表明:PK15细胞复苏活力为91.77%,呈贴壁性生长,形态为上皮型;生长曲线呈"S"型,最大增殖浓度为24.67×104个·mL-1,群体倍增时间为21.08h;同工酶为5条,染色体2n=38,证实为猪源性且没有发生细胞间的交叉污染;细菌、真菌和支原体检查均为阴性;细胞体外培养观察、血吸附试验、接种鸡胚和动物以及特异性荧光抗体结合物检查病毒均为阴性;能较好地表达外源基因,达到了兽用疫苗生产用细胞的质量要求,可为以该细胞为基质的疫苗研究和生产提供细胞资源。 相似文献
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《江苏农业科学》2015,(12)
将猪细小病毒接种于ST细胞,于不同时间点收获病毒测定其病毒滴度与病毒拷贝数,以此分析该病毒在ST细胞上的增殖规律。细胞于感染后48 h开始出现细胞病变,84 h细胞出现脱落和崩解。TCID50结果显示,病毒感染后18 h即能检出病毒滴度,随后逐渐升高至72 h达到峰值(107.2/m L),其后逐渐下降。通过SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法测定不同时间病毒体外感染细胞后的复制动态水平,病毒含量的增长于108 h达到峰值随后逐渐下降。通过对PPV在ST细胞中的体外复制动态分析结果表明感染后96~108 h为最佳收毒时间,这为利用细胞增殖病毒生产疫苗提供重要参考。 相似文献
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猪细小病毒灭活疫苗NJ株毒种分离及鉴定 总被引：2，自引：0，他引：2
为防控猪细小病毒病,进行了猪细小病毒灭活疫苗毒种研究。将南京某猪场初产母猪流产胎儿的脾、肺等组织病料处理后接种ST细胞培养,获得了1株猪细小病毒强毒,将分离毒株适当稀释接种ST细胞,经3轮蚀斑纯化获得1株纯净的猪细小病毒NJ株(PPV-NJ株),作为疫苗毒株。将NJ株接种ST细胞培养连续传15代,每代次病毒效价均不低于1 ml 107.25TCID50、血凝素效价不低于29。选择第5代病毒液,灭活后与矿物油佐剂混合乳化制成灭活疫苗,以不同剂量分别免疫豚鼠和后备母猪,用血凝抑制试验(HI)和ELISA检测抗体效价。分别用剂量0.125 ml、0.250 ml和0.500 ml疫苗免疫豚鼠28 d后,各免疫组HI抗体效价均高于28,0.5 ml组HI抗体效价高达211,ELISA抗体均显示阳性(OD630≥0.32),分别用剂量0.5 ml、1.0 ml和2.0 ml疫苗免疫后备母猪后,HI检测结果显示,3个剂量组免疫后1周HI抗体效价高于26,3周后达峰值,至免疫后4个月略有下降,2.00 ml剂量组HI效价最高(211.75)。ELISA检测结果显示,各剂量组在免疫后1周均转阳(OD630≥0.32),免疫后4～18周均维持较高水平。HI抗体效价和ELISA抗体水平与免疫剂量均呈正相关性。结果显示,利用NJ株病毒制备的灭活疫苗具有抗体产生快、效价高等特点,显示出良好的疫苗开发前景。 相似文献
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为了确保疫苗质量,保证生产用种毒的稳定性,将猪细小病毒PPVS-1A株的干毒和湿毒分别在-20℃和-70℃保存,每12个月取样一次,分别进行病毒含量测定、红细胞凝集价测定、乳鼠安全试验和豚鼠抗体检测。结果病毒含量均大于107.25;红细胞凝集价为1∶1024;乳鼠接种未见不良反应;豚鼠抗体检测HI均不低于1∶32。确定猪细小病毒PPVS-1A株湿毒在-20℃的保存期为24个月,在-70℃的保存期为48个月;猪细小病毒PPVS-1A株冻干毒在-20℃的保存期为36个月,在-70℃的保存期为60个月。猪细小病毒PPVS-1A株毒保存期长,具有良好的安全性和免疫效力。 相似文献
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ZHANG De-Li LI Liu-jin XIA Geng-tian HE Xu-yu GAO Bu-xian BAI Xiao-hong HUANG Gao-sheng LIU Shang-gao YAN Long-Fei FANG Fu-de 《中国农业科学(英文版)》2002,1(7):816-827
The chromosomal number variations & structural aberrations of the MDCK cell line, primary feline or canine kidney cell(FKC or CKC) and Hela cell line were investigated and their karyotypes of conventional chromosome bands were analyzed. The carcinogenesis or tumorigenicity testing of these cell lines in about 232 nude mice and for colony formation in soft agarose and for haemagglutination under different concentration of plant lectins of these cells were carried out. Under the prerequisite that the incidence of cancer or tumor in negative-control nude mice inoculated subcutaneously with primary feline or canine kidney cell cultures purified in vitro at passage 3 was 0 (0/22) and 0 (0/10), respectively. The incidence of the progressively-growing malignant tumor(MT) in positive-control nude mice inoculated subcutaneously with Hela cell cultures of KB, X, or NM20/X strain was 10/10, 25/25 and 5/51, respectively. The results showed that the incidence of tumor in nude mice with tetrapioid YA strain of MDCK cell during 20 - 45 passages, with hypodiploid JB strain of MDCK cell on passage 25, with di-and hypoploid JC strain of MDCK cell during 2 - 15passages or with hypoploid M strain of MDCK cell during 9 - 27 passages was 28/58, 1/5, 4/18 and 0/31,respectively. The chromosomal analysis results showed that the ratio of difference in the rate of modal chromosome number between high (mcs + n) and lowest (mcs)passages was not more than 5 % - 15 % and the structure aberrations was generally 0 - 3%. These results proved that the genetic characteristics of chromosomal number of cell lines determines their tumorigenicity, but it is species-specific. MDCK line has tumorigenicity no matter what its chromosome karyotype is, at least it has very low tumorigenicity even when its modal chromosome number is hypoploid. The repeatedly frozen, thawed and split controls of tumorigenicity-positive cell lines(X strain of Hela, M strain of BHK-21, JA strain of Vero, YA strain of MDCK) have much lower tumorigenicity or are even non-carcinogenesis, and the repeatedly frozen, thawed and split controls of very low tumorigenicity cell lines (M or JC strain of MDCK) are certainly non-carcinogenic and never have increased tumorigenicity.It is thus evident that MDCK cell of M, JB or JC strain can be approved as substrate for the preparation of attenuated viral vaccines, but MDCK cell of YA strain can not be approved as substrate for the preparation of comattenuated viral vaccines. In summary, all strains of MDCK cell line have tunorigenicity, at least have low tumorigencity, never have non-cancinogenic MDCK, but very low tumorigenicity MDCK cell strains can certainly be used for the approval production of canine viral vaccines if the DNA content in viral cell cultures was remarkably decreased through conventional means in manufacturing process. Therefore, the master cell stock and working cell bank of MDCK line used for vaccine manufacture were established in China, which are free of infectious agents, and described with respect to cytogenetic characteristics and tumorigenicity. Tests showed that there were correlations among cell line chromosome number variations, anchorage independence in soft agarose, haemagglutination under plant lectins, and tumor-forming ability in nude mice, thus all the in vitro tests are economic, simple and reliable means for monitoring the tumor-forming ability of MDCK line in nude mice. 相似文献
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猪细小病毒X株在不同细胞上增殖效果比较 总被引：2，自引：0，他引：2
为选择猪细小病毒X株增殖的细胞系,对猪细小病毒X株在ST、PK-15、CEF、Vero细胞系上增殖情况进行比较,观察病变时间和病变情况,并分别测定其TCID50和血凝价。结果表明,猪细小病毒X株在这4种细胞上都能产生细胞病变,在ST、PK-15、CEF、Vero细胞上最先开始出现病变的时间分别为24、36、72和48 h,测其在以上4种细胞上的TCID50分别为10-6.4/0.1 mL、10-5.8/0.1 mL、10-2.1/0.1 mL和10-3.2/0.1 mL,HA分别为1 210、1 28、1 23、1 25,因此,建议选用ST细胞作为猪细小病毒X株的增殖细胞系。 相似文献
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【背景】高致病性禽流感疫情的暴发造成了巨大的经济损失和环境卫生的破坏,现阶段疫苗接种仍是我国控制禽流感的主要措施之一,需要大量安全、高效和低成本的禽流感病毒疫苗。鸡胚法制备禽流感病毒疫苗的工艺存在原料来源受限、过程复杂、个体差异、培养周期长和不易放大培养等缺陷。而利用生物反应器大规模培养动物细胞生产病毒疫苗,不仅可以大幅度提高单位产量,实现高密度细胞和高病毒产率,同时可保证产品质量。目前我国用于禽流感防控的疫苗为重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)。国内细胞全悬浮工艺生产禽流感灭活疫苗单罐产能最大为6 000 L,高病毒含量抗原的提供是生产高效疫苗的主要影响因素之一。【目的】为了能够提供稳定的、高效的生产抗原,开展种毒驯化试验。【方法】将重组禽流感病毒H7N9 H7-Re1株分别在MDCK细胞及悬浮MDCK细胞上增殖。在MDCK细胞上通过不同的病毒接种剂量、不同收获时间、不同TPCK-胰酶浓度的试验,确定了H7N9 H7-Re1株在MDCK细胞上最佳收获时间为64 h,最佳接毒剂量为0.008%或MOI为10~(-4),最佳TPCK-胰酶浓度为2μg·mL~(-1),根据确定的最佳培养条件连续传代,并对各代次病毒含量进行检测。【结果】在MDCK细胞上传至第5代时,HA可达1﹕256,每1 mL病毒含量达到10~(8.5)TCID50,每0.1 mL病毒含量达到10~(8.5)EID50,均高于其他代次。【结论】将第5代确定为MDCK细胞传代最佳代次,可考虑确定为生产用基础种毒代次。在悬浮MDCK细胞上对重组禽流感病毒传代进行了优化试验,确定了H7N9 H7-Re1株在悬浮MDCK细胞上最佳收获时间为48 h,最佳接毒剂量MOI为10~(-2),最佳TPCK-胰酶浓度为4—8μg·mL~(-1)。在实际疫苗生产过程中,可选择MDCK细胞或悬浮MDCK细胞来扩繁种毒。 相似文献
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[目的]对一种商业化的低血清培养基适应BHK21细胞进行传代培养,并分析该细胞染色体的变异稳定性,以判定其质量。[方法]采用直接法制备4个代次BHK21细胞的染色体标本,用常规Giemsa染色,在1 000倍光学显微镜下计数中期分裂相染色体数目,并进行核型分析。[结果]BHK21为亚二倍体或亚四倍体细胞系,亚二倍体总数为42,亚四倍体细胞总数为72~74,该细胞系染色体的畸变率在各代次所占比例为0~2%,均较低。[结论]该细胞系的遗传学特性相对稳定,各代次间无本质差异,可候选为制苗用细胞。 相似文献
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一株2型牛病毒性腹泻病毒的分离鉴定及其在MDBK细胞上的克隆纯化 总被引：1，自引：0，他引：1
为了解牛病毒性腹泻病毒(BVDV)在猪用活疫苗生产过程中的污染情况,利用抗原捕获ELISA方法对用于制作原代睾丸细胞的犊牛血清进行检测。将检测结果为阳性的1份犊牛血清,接种于MDBK细胞上,盲传3代,出现明显细胞病变。用BVDV 5′-UTR端特异性引物进行RT-PCR扩增,并对扩增片段进行克隆测序和序列分析。结果表明,分离得到一株2型牛病毒性腹泻病毒,并将其命名为JN-2。将该病毒用蚀斑方法进行克隆纯化,并对纯化前后病毒的TCID50进行测定比较,结果发现纯化后病毒滴度显著提高。 相似文献
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MDCK细胞库的建立及其生物学特性研究 总被引：1，自引：1，他引：0
分别从美国典型培养物保藏中心(ATCC)、中国典型培养物保藏中心(CCTCC)、北京协和细胞资源中心及某企业引进4株MDCK细胞系,扩大培养后液氮冻存,分别建立种子细胞库和工作细胞库。细胞复苏后分别对每株细胞进行了活力、形态、生长曲线、微生物污染、核型及荧光蛋白质粒转染表达等特性研究。结果表明,4个来源的MDCK细胞均呈上皮型,生长状态良好;生长曲线呈S型;细菌、真菌、支原体检测都为阴性;染色体2n=78;外源质粒在该细胞中能进行复制和表达。建立的细胞库为开展MDCK细胞及流感细胞基质疫苗的研究提供了基础理论依据和细胞资源。 相似文献
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河曲马睾丸组织成纤维细胞系的建立及生物学特性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
采集河曲马睾丸组织,用热消化法制备原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法纯化细胞,扩大培养至第3代用液氮保存,细胞复苏后进行活力、形态、生长曲线、微生物污染、核型、乳酸脱氢同工酶谱及荧光蛋白质粒转染表达等特性研究。结果显示,河曲马睾丸组织原代和传代细胞呈成纤维型,生长良好,最大增殖数量为4.32×105 mL-1,倍增时间为34.58h;细菌、真菌、病毒、支原体检测呈阴性;染色体2 N=64,二倍体为85%,占主体;乳酸脱氢酶同工酶电泳图谱有明显特征,共有4条谱带,其中LDH3浓度较高,活性较强;外源质粒在该细胞中能进行复制和表达。表明已成功建立河曲马睾丸组织成纤维细胞系,使河曲马这一重要种质资源在细胞水平上得以保存。 相似文献