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鹑源减蛋综合征病毒QAVc—94株的酶切图谱分析 总被引：2，自引：0，他引：2
选HindⅢ、EcoRⅠ、PstⅠ、SphⅠ、BamHⅠ、BamHⅠ和BglⅠ6种限制酶，对QAVc-94株和AV－127国际标准株的DNA进行酶切图谱比较结果发现，QAVc-94株用上述6种酶酶切得到的片段数分别为10、3、12、4、6、9条，将各片段碱基数相加得出其基因组长34.7kb，略高于国内的报道，而与Zask等的结果相接近，从分子水平上将QAVc-94鉴定为一株EDSV。对照AV－127株的酶切结果与文献报道相符。QAVc-94株酶切图谱分析显示：HindⅢ和EcoRⅠ的酶谱与报道的其他EDSV分离株基本相似，HindⅢ的酶谱与国内研究最多的AA－2长春分离株一致，EcoRⅠ的酶谱结果与Zask等报道的B8／78株相同。而其他4种限制酶的酶切图谱与已报道的各地分离株相比，差异较大，如PstⅠ和BglⅠ多出2－5个识别位点。说明鹌鹑源EDSV已与鸡源、鸭源、鹅源EDSV有较大的变异，是一株血清型相同而基因型不同的鹌鹑减蛋综合征病毒。 相似文献
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减蛋综合征病毒(EDSV)的分离与鉴定 总被引：3，自引：0，他引：3
从河北邯郸某鸡场190d未经EDS疫苗免疫的，突然产蛋下降并出现大量软壳蛋，无壳蛋的鸡群中分离到一株病毒，经理化特性鉴定，单抗Dot-ELISA检测，DNA探针斑点杂交，确定分离到的病毒为EDSV。经限制性核酸内切酶酶切分析，表明分离株EDSV标准株AV127属于同一个基因型。 相似文献
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利用高渗缓冲液裂解感染鸭瘟病毒的鸭胚成纤维细胞,加入核酸酶消化细胞DNA,再抽提病毒DNA的方法提取鸭瘟病毒基因组,结果证明,这种方法可以最大限度地消除细胞DNA的污染,得到纯净的病毒基因组DNA.用10种限制性内切酶对鸭瘟病毒疫苗株和分离株的基因组进行酶切分析,酶切产物电泳结果表明,Sma Ⅰ、Sal Ⅰ、Pst Ⅰ、Not Ⅰ、Hind Ⅲ、EcoR Ⅴ和BamH Ⅰ 7种限制酶产生酶切图谱二者几乎完全一致,EcoR Ⅰ和Sac Ⅰ仅有个别条带不同,BglⅡ产生的条带迁移率差别较大,但条带数量相同. 相似文献
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根据GenBank中已发表的犬新孢子虫SAG1基因序列(AF132217),设计了一对含有Kozak序列、起始密码子、终止密码子、BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点的引物。以含有SAG1基因的重组质粒pMD-18T-SAG1为模板,经PCR扩增获得SAG1基因,利用BamHⅠ和EcoRⅠ酶切该片段,回收含有BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点粘性末端的SAG1基因片段,将此基因片段克隆至相同酶切回收后的pVAX1真核表达载体中,获得重组质粒pVAX1-SAG1,经PCR鉴定、酶切分析和重组质粒的序列测定、比较,证实了重组质粒的正确性。 相似文献
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鸡毒霉形体HS株pMGA多基因族的研究 总被引：2，自引：1，他引：1
鸡毒霉形体（Mycoplasma gallisekpticum,GM)基因组中存在着编码细胞表面血凝粘附素蛋白（protein of Mycoplasma gallisepticum adhesin,pMGA)相关基因组的多基因族。为筛选出含有完整的pMGA基因片段，并估算出鸡毒霉形体HS株基因组中pMGA多基因族的基因数，本试验以pUC18为载体，用EcoR I限制性内切酶构建了鸡毒霉形体HS株的基因组文库。根据pMGA基因引导序列的保守区和pMGA基因间隔区的序列，人工合成了2个寡核苷酸探针（探针I、探针Ⅱ），经标记后，双筛选所建的基因文库，从600个转化子中共得到的38个含有pMGA基因的阳性克隆子，选其中1个7．5kb的片段（17号阳性克隆子，W17），用4种限制性内切酶（EcoR I,Hind Ⅲ，Pst I,Bgl Ⅱ）酶切消化，绘制了该片段的物理图谱。该片段酶切产物经电泳、转膜后与探针I和探针Ⅱ杂交，发现2个探针杂交图谱基本相同，根据杂交带及放射信号的强度值，估测出该片段含有4个pMGA基因，以这个片段所含的pMGA基因数为标准，估算出鸡毒霉形体HS株含有39个pMGA基因。 相似文献
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从豫西地区发病鸡群中分离的鸡减蛋综合征病毒 (EDSV) ,经非免疫鸡胚增殖后 ,用差速离心法纯化和蛋白酶 K法抽提 ,得到全长约 34.3kb的 EDSV基因组。分别以 Hind 、Bam HI、Eco RI及 Bam HI Eco RI对 EDSV -g DNA进行限制性酶切 ,分别得到 10、4、4和 7个片段。用 10 g/ L琼脂糖凝胶电泳酶切样品并以凝胶成像系统对酶切片段的大小和分子量进行测定。将这些结果与 NE4、WPDV2 0 5、AV-12 7标准株及 B8/ 78株基因组 DNA由相同酶切的结果进行比较 ,发现豫西地区 EDSV与AV- 12 7和 B8/ 78较为相似 ,但也存在微小差别 ,与其他毒株的差别较大 相似文献
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犬新孢子虫NcSRS2基因原核表达质粒的构建 总被引：1，自引：0，他引：1
根据已发表的犬新孢子虫NcSRS2基因序列,设计1对含有EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点的引物。以提取犬新孢子虫虫体基因组DNA为模板,应用PCR扩增获得NcSRS2 ORF基因片段,将此基因片段克隆到pMD18-T Simple载体上,用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切该片段,回收得到含有两个酶切位点黏端的Nc-SRS2 ORF基因,将此基因片段克隆至相同酶切回收后的PGEM-4T-2原核表达载体中,获得重组质粒pGEX-NcSRS2,经PCR鉴定,限制性内切酶分析和克隆片段序列测定比较,证实了重组质粒的正确性。 相似文献
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试验旨在对基因组DNA的制备进行研究,为细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)文库的构建奠定基础。以豁眼鹅全血为试验材料,提取高质量的基因组DNA,分别采用HindⅢ、EcoRⅠ和BamHⅠ3种限制性内切酶对所提基因组DNA进行部分酶切,并利用控制酶切时间、设置不同的HindⅢ酶切浓度梯度对基因组DNA进行部分酶切。结果表明,HindⅢ为最佳限制性内切酶,并得到了最佳酶切用量(40U/μL)。该方法所制备的基因组DNA质量较好,可用于BAC文库的构建。 相似文献
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产蛋下降综合征（EDS－76）病毒DNA酶切图谱分析 总被引：4，自引：0，他引：4
选用ＥｃｏＲＩ、ＰｓｔⅠ、ＰｖｕⅡ、ＨｉｎｄⅢ、ＢｇｌⅠ和ＢｇｌⅡ６种限制性内切酶，对国内４株ＥＤＳ－７６病毒鸡源分离株和国外标准株ＡＶ－１２７及１株鹅源腺病毒的ＤＮＡ进行酶切图谱的比较，结果发现４种鸡源分离株与ＡＶ－１２７株用上述６种酶切的片段数分别为４、８、１０、１０、６和７条。各酶切图形、片段大小亦十分相似，表明均为ＥＤＳ－７６病毒。ＥｃｏＲＩ－ＨｉｎｄⅢ和ＰｓｔＩ－ＥｃｏＲＩ的双酶切也得到同样结果。鹅源分离株的酶切片段数分别为６、７、９、７、４和１０条，酶切图形和片段大小均与ＡＶ－１２７有很大不同，表明该分离株可能为１株血清型相同而基因组不同的ＥＤＳ－７６鹅腺病毒。 相似文献
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为了了解大肠杆菌O157分离菌株携带毒力及黏附相关基因的情况及菌株的多态性.用聚合酶链式反应扩增stx1、stx2、eaeA、ehxA、EspA和Tccp基因.选用限制性内切酶HincⅡ和EcoRⅡ对分离的O157:H7菌株eaeA基因进行酶切,选用限制性内切酶HaeⅢ、HinfⅠ、EcoRⅡ和RsaⅠ对分离的O157:H7菌株chxA基因进行酶切,最后对这两个基因进行PCR-RFLP分析.结果,所有O157:H7菌株扩增出eaeA、ehxA、EspA和Tccp基因,但没有扩增出stx1和stx2基因;4株O157:H?菌株,均没有扩增出stx2、eaeA、ehxA、EspA和Tccp基因,且只有1株扩增出stx1基因.所有分离菌株的eaeA基因和ehxA基因选用限制性内切酶酶切之后所得酶切片段数目和大小与标准菌株的eaeA基因和ehxA基因选用限制性内切酶酶切之后所得酶切片段数目和大小相同.结果表明,由于所有菌株缺失stx2基因,其致病力相对较低,且在基因水平较为保守,多态性较为单一. 相似文献
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选用ＥｃｏＲⅠ、ＢａｍＨⅠ、ＨｉｎｄⅢ、ＥｃｏＲⅤ、ＰｖｕⅡ、ＢｇｌⅠ、ＳｍａⅠ和ＰｓｔⅠ等８种限制性内切酶,对不同地区分离的３株减蛋综合征（ＥＤＳ）病毒进行酶切图谱比较。结果发现３株毒用前６种酶切割后产生的片段数及各片段的大小均相同,而用ＳｍａⅠ和ＰｓｔⅠ切割后,贵州分离毒ＨＳ－１与国际标准毒ＡＶ－１２７、南京他离毒ＧＣ２相比,多出１个片段。表明不同地区ＥＤＳ分离毒的核酸结构基本相同而又略有差异 相似文献
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鸡贫血病毒国内分离株的酶切图谱多态性分析 总被引：2，自引：1，他引：1
用套式PCR 扩增了鸡贫血病毒(CAV)长度为687 bp 的特异片段,以Hae Ⅲ、Hinf Ⅰ、Hpa Ⅱ分别酶切,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了其限制性酶切片段的多态性。对几株国内外分离株的分析表明,TK5803和山东分离株SJ1、SJ2 应属于Todd 的限制性内切酶酶切图谱多态性分析法(RFLP)分类中的第2 组;吉林JL1 株和哈尔滨CL1 株相同,但与其他任何毒株均不相同,大连DL1 株也不同于任何现有毒株,因而都不能归属于Todd 划分的7 个小组;荷兰弱毒株与目前发现的所有毒株均不同,具有其特征性的酶切图谱。 相似文献
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光生物素标记六邻体蛋白基因探针检测减蛋综合征病毒的研究 总被引：1，自引：1，他引：0
根据基因文库中减蛋综合征病毒（EDSV）AV127株的序列设计1对引物，从四川本地分离的EDSVSG9301株中扩增出六邻体蛋白基因并将其克隆到PUC18的多克隆位点中，经PCR、酶切分析、DNA杂交分析和序列测定证明，所扩增、克隆的基因包括了六邻体蛋白基因从起始密码子到终止密码子在内的完整序列。用光生物素对含六邻体蛋白基因的重组质粒标记后，采用斑点印迹法对4株EDSV（标准株AV-127株和3株四川分离株）、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒和鸭瘟病毒的核酸进行检测，结果，该探针能检测出4株EDSV，但不能检出新城疫病毒、传染性支气管炎病毒和鸭瘟病毒。表明该六邻体蛋白基因探针具有特异性，检测的灵敏度高达1pg。 相似文献
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分离自不同种、不同部位的6种牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)毒株经限制罂内切酶 EcoRⅠ、HindⅢ、RstⅠ和 SmalⅠ消化分析后呈现3种酶切电泳图.2株分离自精液的病毒(美精株和洛精株)4种酶切电泳图完全相同;Bartha Nu/67株与美精株和洛精株仅在 EcoRⅠ酶切图谱上有微小差异(一个酶切位点的变化),其它3种酶切图也完全相同。分离自水牛的 B7株与其它5种病毒DNA 的酶切图谱差异十分显著。2株分离自呼吸道的病毒(IBR-125和 LA 侏)与其它几株病毒差异也较明显,但二者之间也有一定的差异。 相似文献
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为了建立区分疫苗株与广西分离株的检测方法,根据GenBank上的山羊痘病毒序列设计1对引物,用来扩增山羊痘病毒P32基因,通过对国内疫苗株及6株广西分离株的P32基因进行克隆、测序比较发现,所有广西分离株核苷酸651位的碱基全部由T变为C,647位～652位核苷酸构成由TGTATA变异为TGTACA,多了1个限制性内切酶Bsp 1407Ⅰ位点,因此用特异性引物扩增出739bp的目的片段后,再用限制性内切酶BsP1407 Ⅰ进行酶切分析。疫苗株可以切成135hp和604bp3个片段,广西分离株可以切成135、226、378bp3个片段。结果表明,所建立的PCR—RFLP方法可以区分疫苗株和广西分离株。 相似文献