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我国鸡传染性支气管炎病毒地方性流行毒株S1基因的RT—PCR扩增及其 … 总被引:1,自引:0,他引:1
采用RT-PCR方法,以IBV S1全基因特异性引物分别从我国华东,华北,华中,华南,西北及东北等地的IBV流行株基因组中扩增出预期的1.7kb左右的DNA片段。PCR产物的HaeⅢ酶切分析及其与英国IBV S1全基因核酸探针的分子杂交证实所获6个IBV流行株的PCR产物为IBV S1基因。将此6个毒株的S1基因PCR产物分别进行5‘和3’端的BamHI和HindⅢ酶切识别位点的分子修饰之后插入到 相似文献
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选择S1基因做为目的基因,运用RT-PCR技术分别扩增12株以非免疫鸡胚繁殖并通过超速离心浓缩的鸡胚尿囊液中的IBV,所用引物为IBVBeaudette株S1基因两侧的对应序列,跨幅为1.72kb。结果6株IBV毒株(SAIB3、F、D41、M41、H52、Holte)扩增出了长约1.7kb的S1基因片段,而另6株IBV毒株虽经4次RT-PCR重复后也显阴性。用HaeⅢ内切酶对6个毒株的RT-PCR产物进行酶切,结果显示M41、H52、D413个IBV毒株的S1基因包含两个HaeⅢ位点,F株与Holte株S1基因包含1个HaeⅢ位点,而SAIB3株S1基因则已丢失HaeⅢ位点。实验结果表明:运用RT-PCR技术检测IBV时,由于S1基因的核酸序列具有较高的变异率,因此S1基因不宜做为目的基因。 相似文献
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应用RT—PCR技术扩增禽传染性支气管炎病毒S1基因的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
选择S1基因做为目的基因,运用RT-PCR技术分别扩增12株以非免疫鸡胚繁殖并通过超速离心浓缩的鸡胚尿囊液中的IBV,所用引物为IBV Beaudette株S1基因两侧的对应序列,跨幅为1.72kb。结果6株IBV毒株(SAIB3、F、D41、H52、Holte)扩增出了长约1.7kb的S1基因片段,而另6株IBV毒株虽经4次RT-PCR重复后也显阴性。用HaeⅢ内切酶对6个毒株的RT-PCR产物 相似文献
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以IBVBeaudette株S1基因两仙21个碱基的对应序列来合成引物,并在两引物Oligo5′,Oligo3′的5′端分别加有HindⅢBamHI酶切位点,对IBV标准毒株M41,广东地方肾病变形致弱株D41作RT-PCR(反转录-聚合酶链反应)得到了1720bp预计大小的DNA片段,又经M41株PCR产物的HaeⅡ酶切分析,表明此DNA片段即为IBVS1基因片段,并用此对引物,以Oligo3′ 相似文献
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用地高辛标记的核酸探针从尿囊液和组织中检测传染性支气 … 总被引:1,自引:0,他引:1
将IBVT株基因组S1基因上0.6kb片段(位于S1基因上1121bp~1723bp之间)克隆到PIB-PCR Cloning vector中,用地高辛标记探针,分别与9株IBV 的PCR产物和12株IBV的核酸进行点杂交均呈阳性反应,而该探针不与IBDV和NDV的RNA,EDS-76病毒的DNA及正常鸡胚尿囊液的抽提物反应。探针检测IBV-PCR产物的灵敏度为100~200pg。用该探针检测不同毒株IBV在鸡胚中的繁 相似文献
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本研究对分离自沈阳地区的一株传染性支气管炎病毒(SY毒株)进行了生物学特性的研究,同时成功地对其免疫原S1基因进行了RT-PCR扩增、克隆与序列分析。 通过电镜观察、动物回归试验、血凝特性研究等试验验证分离自沈阳地区的SY毒株确实为一株传染性支气管炎病毒。气管环组织培养交叉中和试验结果表明,分离株SY株不同于参考毒株澳大利亚T、H52、M41,且不同于国内其它流行株HD、HB、XB、DB等,是一个新的变异株。 利用IBV S1基因特异性寡聚核苷酸引物,经RT-PCR扩增SY毒株的S1基因,得到预期的约1.7Kb片段;并将扩增所得cDNA插入克隆质粒pUC19的EcoRⅠ/BamHⅠ位点,在大肠杆菌DH5a中实现目的基因的克隆。经限制性核酸内切酶分析及PCR鉴定,证实为阳性重组质粒,利用末端双脱氧链终止法对其测序,得到S1基因全长1640bp,包括整个开放阅读框。通过序列分析软件DNASIS、PROSIS、MEGA等软件对S1基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行分析,结果表明:分离株SY与7株参考株和国内流行株HD株相比,无论是核苷酸序列同源百分率还是氨基酸序列同源百分离都较低,均未达到80%,这就提示我们SY毒 相似文献
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应用反转录聚合酶链反应检测鸡传染性支气管炎病毒核酸的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
根据国外报道的鸡传染性支气管炎病(IBV)Gray株的纤突蛋白(S1)核苷酸序列,自行设计合成了S1蛋白主要抗原决定簇基因两侧的1对引物,跨幅为1.0kb。用该引物对从内蒙古、天津、山东等地分离的3株IBV进行RNA提取,反转录后PCR,经琼脂糖凝胶电泳结果表明,3株毒株均获得了与预期一致的PCR产物;此外,IBVPCR灵敏度的测定结果表明,PCR方法可检测出10pg的模板,PCR酶切结果为,HaeⅢ、TagⅠ酶对3株PCR产物均有1个酶切位点,而MsPⅠ酶无酶切位点 相似文献
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传染性法氏囊病病毒VP2基因的克隆和鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
以鸡胚成纤维细胞培养IBDV弱毒疫苗株D78,经蔗糖密度梯度离心纯化,电镜下见典型IBDV粒子。用SDS-蛋白酶K法提取病毒基因组,低熔点胶回收,琼脂糖凝胶电泳,可见IBDV典型双节段基因组。根据已发表的IBDV基因组序列,设计并合成了1对特异扩增IBDVVP2基因的引物。以IBDV基因组为模板,利用RT-PCR技术扩增出了1.5kb的cDNA产物,将PCR产物适当处理后与经SmaⅠ酶切的pUC19质粒平端连接,转化大肠杆菌DH5α,在含Amp、Χ-gal和IPTG的琼脂平板上培养,产生大量白色菌落。挑取白色菌落,经质粒大小比较分析初步筛选到一重组质粒。以重组质粒DNA为模板作PCR检测和部分酶切分析证实,该质粒为含D78IBDVVP2基因的重组pUC19 相似文献
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传染性支气管炎病毒Holte株S1基因的克隆及鉴定 总被引:6,自引:2,他引:4
为给鸡传染性支气管炎(IB)基因工程疫苗的研制提供基因储备,通过RT-PCR扩增出IBVHolte株S1基因cDNA,其长度与理论值1762bp相符;S1基因内部位点经HaeⅢ酶切所产生的片段,亦与理论值549、343、324、191、180、171bp6个片段大小一致。将S1基因cDNA克隆入pUC18,并对S1基因两翼进行了序列分析。结果表明,所克隆的S1基因与GenBank中收录的IBVHolte株S1基因完全相符。 相似文献
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我国鸡传染性支气管炎病毒地方分离株S1基因的RFLP基因分型的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
采用RT-PCR方法分离得到了五个IBV地方分离株(HN2,HN4,JX1,SC2和SC4)的S1基因片段,并用限制性内切酶HaeⅢ对五个IBV地方分离株S1基因的cDNA进行RFLP分析。结果显示,五个IBV地方分离株S1基因cDNA的HaeⅢ带型与标准毒株M41和Beaudette相同。根据Kwon建立的RFLP分型标准,本试验的五个地方分离株应归属于马萨诸塞血清型。 相似文献
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RT-PCR检测禽传染性支气管炎病毒 总被引:2,自引:0,他引:2
用2对已发表的引物和1对自行设计的引物对同一禽传染性支气管炎病毒(IBV)H120株进行RT-PCR,分别获得了S1基因上与引物设计相一致的1720、228、602bp的扩增片段。用自行设计的引物对7个毒株(H120、H52、M41、Conn、Gray、T、Holte)和5个分离株(宜毒、上毒、云毒、HK、118)的含毒尿囊液或纯化病毒进行RT-PCR,结果除Holte株和2个分离株(宜毒、云毒)外,其余均成功地扩增出600bp的片段。用1.7、0.2、0.6kb3对引物对6个IBV毒株和6个分离株的含毒尿囊液在相同和不同条件下进行RT-PCR,结果3对引物分别扩增出3、5、9株IBV,同时可将不同血清型的12个IBV株分成6种基因型。将IBV分离株HK与标准株M41经PCR扩增、HaeⅢ和Hind酶切、RFLP分析,表明属同一马萨诸塞血清型。3株IBV(H120,HK,M41)在鸡胚中繁殖,PCR最早检出的时间为20~24h。RT-PCR提供了直接从尿囊液和感染鸡组织中快速检测病毒的新方法。 相似文献
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