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应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)和MALDI-Biotype 3软件对河南分离株肠球菌进行快速鉴定及同源性分析。使用甲酸提取法按照MALDI-TOF-MS要求进行样品制备,点靶并获取样品质谱图;运用Biotyper分析软件对所获取的质谱图进行鉴定和同源性分析。同时用Vitek-2全自动微生物鉴定系统进行辅助分析鉴定。结果显示,应用MALDI-TOF-MS方法鉴定的33株肠球菌中粪肠球菌13株,屎肠球菌20株,且可信度分值大于2.300,能完全鉴定到种的水平。PCA聚类分析显示,与屎肠球菌相比,粪肠球菌的亲缘关系更近一些。而Vitek-2对屎肠球菌的鉴定结果差异较大。结果表明,MALDI-TOF MS对肠球菌的快速鉴定和同源性分析,操作快速简便,准确率高,有利于兽医临床快速诊断,将成为兽医微生物常用诊断工具。 相似文献
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细菌鉴定是细菌耐药性监测过程中的重要工作环节之一,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption ionization time-off flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)能够高效鉴定细菌。为了快速监测五家养殖场来源的大肠杆菌和肠球菌的临床耐药特征,本研究利用MALDI-TOF MS和微量肉汤稀释法,快速鉴定临床分离的大肠杆菌和肠球菌,并对其进行耐药表型检测。结果显示,MALDI-TOF MS实现了对临床分离菌株(31株大肠杆菌和34株肠球菌)的快速鉴定;鸡源大肠杆菌和肠球菌的耐药情况最为严重,其次为羊和牛。其中,鸡源的大肠杆菌均对四环素(100%)和氨苄西林(91.67%)耐药率最高,肠球菌对苯唑西林(62.07%)耐药率较高。研究结果表明,不同动物源细菌临床耐药性表型严重程度有所不同,与此同时,MALDI-TOF MS技术可以同时实现对动物源大肠杆菌和肠球菌的快速鉴定,值得在动物源细菌耐药性检测领域推广应用。 相似文献
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一株致仔猪关节炎粪肠球菌的鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
对1株分离自关节炎病仔猪的肠球菌进行鉴定。选用常规方法进行染色特性、培养特性观察以及药物敏感性和致病试验,然后利用Vitek-32全自动细菌鉴定系统进行生化特性鉴定,并用PCR方法扩增分离株的16 S rRNA基因,克隆并测序,与GenBank上登录的相关菌株及3个粪肠球菌标准菌株进行16 SrRNA序列比较、同源性分析并构建系统发育树。结果显示,该分离株形态及染色特性与肠球菌一致,对仔猪具有一定的致病性,并对临床常用的7种药物产生了耐受性;Vitek-32生化鉴定和16 S rRNA基因同源性分析及比对结果均显示其为粪肠球菌(E.faecalis)。试验证实了粪肠球菌可导致仔猪关节炎。 相似文献
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为快速鉴定从临床死亡羊肺脏中分离的一株革兰阴性短杆菌,通过基质激光解吸电离飞行时间质谱方法(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)对其进行了鉴定,发现该分离菌为肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种,表明MALDI-TOF MS方法达到了亚种水平的鉴定,鉴定分数为2.549。而VITEK2 compact传统生化方法和16SrRNA测序方法均鉴定为肺炎克雷伯氏菌,仅为种水平的鉴定。获得分离菌纯菌落后,MALDI-TOF MS方法仅需约30 min即可实现对该菌的有效鉴定,而VITEK2传统生化方法需要约4 h,16SrRNA测序方法则需要至少2 d。结果表明,MALDI-TOF MS方法能够快速、准确鉴定临床分离的肺炎克雷伯氏菌,从而为肺炎克雷伯氏菌的快速检测提供了技术支撑。 相似文献
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本试验通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对临床分离的1株羊源多杀性巴氏杆菌进行了快速鉴定,取得了与VITEK2 Compact传统生化方法和16S rRNA测序方法一致的结果。MALDI-TOF MS对分离菌株的鉴定分数为2.371,达到了种水平的鉴定。从分离到纯菌落到获得有效的鉴定结果,MALDI-TOF MS仅需要约30 min,而VITEK2需要约4 h, 16S rRNA测序方法需要至少2 d。因此,MALDI-TOF MS可以实现对临床分离的多杀性巴氏杆菌菌株的快速、准确鉴定,对进一步改善动物巴氏杆菌病的临床诊治具有重要意义。 相似文献
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试验结合革兰氏染色及16S rRNA分子鉴定,对分离自红原县的17份牦牛粪便样中的肠球菌进行鉴定。结果显示,通过细菌分离纯化及PCR扩增,从牦牛粪便样品中分离出8株疑似肠球菌,分离菌的扩增产物经凝胶电泳后均产生1 500 bp特异性条带。16S rRNA测序结果显示,8株疑似肠球菌中,6株为粪肠球菌,2株为屎肠球菌。同源性比对分析显示,粪肠球菌与参考序列同源性为99.7%~100.0%,屎肠球菌与参考序列同源性为98.2%~99.2%,说明牦牛源肠球菌在遗传进化过程中高度保守。运用K-B纸片法进行药敏试验,结果显示,分离株对氨基糖苷类抗生素耐受性较高,2株屎肠球菌中,11-1-2菌株表现为5重耐药,且该菌株耐万古霉素,粪肠球菌主要表现为3重耐药,药敏结果提示牦牛源肠球菌耐药较严重,应引起高度重视。 相似文献
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选用通过常规生理生化特性鉴定的疑似粪肠球菌菌株3株,采用16S rDNA的通用引物对其可变区基因进行克隆、测序和同源性比对,并用CLUSTAL和MEGA软件分析其遗传距离并构建系统进化树.结果表明,此3株菌株通过同源性比对,与GenBank数据库中粪肠球菌的同源性均大于99.8%,经遗传距离分析和系统进化树的构建均表明为粪肠球菌.肠球菌属细菌有40个种,各种之间的生化生理特性差别甚微,在无法通过生化生理特性准确鉴定到种的情况下,用粪肠球菌的16S rDNA全序列的测定及系统进化树的分析是鉴定该菌的一个科学可靠的方法. 相似文献
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从湖南各地送检至实验室的临床样本中分离到42株革兰氏染色阳性及过氧化氢酶阴性的球菌,其中78.6%来自于肺脏,菌落形态及染色镜检均与粪肠球菌参考株ATCC 29212相似,兰氏分群鉴定97.6%（41/42）为D群,生化特性符合粪肠球菌特征。16SrDNA测序鉴定显示：42个分离株与同步测序的ATCC 29212同源性在99.2%到100%之间,与所选择粪肠球菌参考序列的同源性在98.7%到100%之间,NCBI在线BLAST分析发现42株均与GeneBank收录的粪肠球菌序列同源性最高。湖南分离株16SrDNA序列与E.faecalis参考序列进化关系与地域分布无关,来源于不同宿主的菌株的16SrDNA变异并不大,而与E.faecium、E.canis、E.avium、E.hirae等4种肠球菌则有多处变异,这些变异区域在这4种肠球菌中却是保守的。 相似文献
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为了调查雏鸡屎肠球菌感染,从疑似病雏肝脏分离病菌,进行菌落和菌体形态学观察,16SrDNA序列比对,特异PCR分析和病理学观察。结果显示,分离株菌落较小圆形,菌体为圆形或椭圆形,革兰染色阳性。分离株与GenBank中屎肠球菌同源性为99.6%~98.7%,与其他菌株的同源性均小于97%。PCR扩增条带为特异屎肠球菌的目的片段。经分子生物学方法结合菌落及菌体的形态学,该菌被鉴定为屎肠球菌。病理学观察发现,肝脏肿大、出血,肝细胞质疏松并且致病力试验复制出与临床相似病例,这些提示该病雏为屎肠球菌感染。 相似文献
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本研究考察了培养基、培养时间对基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDITOF MS)快速鉴定猪、鸡源大肠杆菌和肠球菌的影响。结果表明:在哥伦比亚血琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基和肠球菌显色营养琼脂培养基上培养对粪肠球菌、屎肠球菌的鉴定没有显著区别;在哥伦比亚血琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基上培养对大肠杆菌的鉴定没有显著区别,而麦康凯培养基则不适合大肠杆菌的快速鉴定。大于24h的培养时间对大肠杆菌、粪肠球菌和屎肠球菌3种细菌快速鉴定均有不同程度的影响,其中对大肠杆菌的影响最为显著,而对粪肠球菌的影响最小。重复性实验中,大肠杆菌、粪肠球菌和屎肠球菌的鉴定分值均在90%以上,批间、批内变异系数均小于5%,说明本实验方法稳定性和重复性良好。与传统的生化鉴定方法比较,MALDITOF MS法操作简单快速、准确,可有效提升动物源细菌分离鉴定的工作效率。 相似文献
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致病性猪源肠球菌16S rDNA-RFLP研究及系统进化分析 总被引：1，自引：0，他引：1
为探讨分离自河南滑县、武陟等12个地区的猪源肠球菌的亲缘关系,采用对其16SrDNA基因的RFLP分析、序列分析及系统进化树的构建等方法,对12株疑似猪源肠球菌进行了研究;结果显示,12株分离株均与肠球菌同源性最高,同源率达98.1%～100%;而与猪链球菌同源率最高达85.5%,且进化树中12株菌株均位居与猪链球菌并列的肠球菌主干分支中。HandⅢ、XbaⅠ、EcoRⅠ分别对12株球菌的16SrDNA-RFLP分析发现,它们在该片段上有限制性位点,但没有产生限制性片段长度多态性;而HinfⅠ单酶切结果出现了限制性片段长度多态性,且12株分离株可分为两大rDNA图谱类群,与实际测序分析的酶切位点相一致,且找到鉴定肠球菌的350bp的分子标记。说明所分离12株球菌均是肠球菌,且不同地理种群已出现分化。 相似文献
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4株鸭源肠球菌的鉴定和致病性 总被引：1，自引：2，他引：1
对临床分离的4株鸭源肠球菌郑1株、郑2株、郑3株、北京株和1株粪肠球菌参考菌株进行了系统鉴定,并用SDS-PAGE和Western-blot技术对各菌株细胞壁蛋白图谱进行比较分析。结果5个菌株的形态、染色、生理生化特性均与粪肠球菌特性一致;它们均对青霉素、万古霉素和庆大霉素敏感而对四环素耐药;5个菌株人工感染雏鸭及小白鼠均有致病性,但各菌株间致病力存在差异,北京株最强,参考株最弱,其余3株介于北京株和参考株之间;各菌株的细胞壁蛋白经SDS-PAGE在相对分子质量33 370~131 690之间均显示数十条蛋白带,其中郑2株和北京株在相对分子质量66 840处均有1条染色较深的蛋白带,而用Western-blot分析显示抗北京株胞壁蛋白抗体只能检测到北京株相对分子质量为66 840的抗原蛋白。以上结果表明,这5个被检菌株为致病性粪肠球菌,且致病性以北京株最强。 相似文献
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利用BIOLOG自动微生物分析系统和传统鉴定方法对1株猪源粪肠球菌进行了鉴定，并对其生物学特性进行了系统研究。结果显示，2种鉴定方法的结果一致，与传统的鉴定方法相比，BIOLOG自动微生物分析系统更快捷、方便、高效，可快速为临床诊断和用药提供依据。生物学试验表明，本株粪肠球菌在液体和固体培养基内均可有效抑制大肠杆菌生长，从而维持肠道平衡；另外，该菌株可使培养液的pH值降低至3．69。上述结果为该菌株的进一步开发利用提供了理论支持。 相似文献
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《中兽医医药杂志》2020,(5)
某养殖场羔羊突然死亡,为了查明死亡原因,采集病死羔羊病变肺脏等进行细菌的分离培养,分离到1株革兰阳性、短链状排列的球菌,在血琼脂培养基上呈β溶血。通过对该菌的16S r RNA进行扩增和序列分析,其与屎肠球菌的同源性高达99%,应用通用引物对16S～23S rRNA的序列进行PCR扩增产生2个条带,分别为522 bp和619 bp。用Vitek 2全自动微生物分析仪鉴定为屎肠球菌,可能性为98%。该菌对万古霉素和米诺环素敏感,对青霉素、庆大霉素等药物表现耐药。结果显示,分离到的细菌为屎肠球菌,且该菌具有多重耐药性,本实验为兽医临床肠球菌的分离和鉴定提供了参考。 相似文献
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《中国预防兽医学报》2021,(8)
黑叶猴是我国一级重点保护动物,2018年11月贵州某动物园中黑叶猴出现死亡,为调查其原因,本研究采集病死黑叶猴的肺脏样品进行细菌分离纯化,并对分离菌进行革兰氏染色镜检、生化鉴定、16S rRNA基因序列鉴定、小鼠致病性试验及分离株的药敏试验和耐药基因检测。结果显示:经形态观察、培养特性鉴定以及16S r RNA的PCR鉴定,该分离株为鸟肠球菌,将其命名为GZ1811;16S rRNA基因的同源性分析及进化树结果显示,GZ1811株与GenBank中鸟肠球菌的一致性为100%;小鼠致病性试验结果显示,小鼠出现临床症状,甚至死亡,解剖可见其肺脏有散在出血点;药敏试验结果显示,分离株对四环素等药物耐药。耐药基因PCR检测结果显示分离菌株的四环素类耐药基因tetM呈阳性,表明耐药表型和耐药基因型一致。本实验为黑叶猴鸟肠球菌病的诊断和防治提供具有科学价值的参考依据。 相似文献
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禽类的肠球菌病是由各种肠球菌感染引起的禽类的一种急性或慢性传染病.本研究采用SDSPAGE技术分析4株鸭源粪肠球菌临床分离株和1株粪肠球菌参考菌株的细胞壁蛋白,比较各菌株细胞壁蛋白的异同,旨在揭示同种不同株粪肠球菌的细胞壁蛋白有何共性,以及它们之间存在的差异.这不仅为禽类肠球菌病的病原学研究提供理论依据,而且为该病的流行病学调查、快速检测技术以及免疫预防等方面的临床研究提供十分重要的参考资料. 相似文献