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1.
为了解19株猪链球菌2型(S.suis 2)安徽分离株的毒力基因型及毒力基因变异情况,通过PCR扩增S.suis 2毒力基因cps2J、mrp、epf和sly,对这4种毒力基因的扩增片段进行序列测定,并与国内外其他分离株的基因序列进行比较.结果显示,cps2J、mrp、epf和sly基因在19株S.suis 2中的检出率分别为100％、68.4％、68.4％、78.9％;19个受试菌株共分为7个毒力基因型,其中cps2J+/mrp+/epf+/sly+占57.9％,为优势基因型;S.suis 2安徽分离株4种毒力基因的检测序列之间及其与国内其他地区S.suis 2分离株的相应序列同源性均在99.1％以上,与国外S.suis 2分离株的相应序列同源性在87.8％～100％之间;19株cps2J+菌株中有1株菌cps2J基因序列有变异,13株mrp十菌株中有6株菌mrp基因序列发生变异,检测的epf和sly基因序列没有变异.表明cps2J +/mrp+ /epf+/sly+是S.suis 2安徽分离株优势毒力基因型,检测的S.suis 2安徽分离株cps2J、epf和sly基因部分序列较保守,mrp基因部分序列存在较大的变异. 相似文献
2.
《上海畜牧兽医通讯》2016,(5)
根据链球菌保守基因EF-Tu设计引物,从120份30~60日龄健康仔猪鼻拭子分离到11株链球菌,分离率为9.2%(11/120);从72份发生关节病的病猪关节液,分离到6株链球菌,分离率为8.3%(6/72)。为了解分离的链球菌毒力基因分布情况,根据猪链球菌(streptococcus suis,SS)保守基因(GDH)、猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)特异性基因(CPS2J)以及猪链球菌主要毒力基因溶菌酶释放蛋白(MRP)、毒力相关基因ORF2、甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(GAPDH),设计并合成5对引物进行毒力基因检测,提取扩增产物测序,并对序列进行比对分析。毒力基因检测结果显示,11株鼻拭子分离株有1株毒力因子分布为CPS2J+,鉴定为SS2,不包含其它毒力基因;猪关节液分离的链球菌,有2株SS2和1株SS,2株SS2的毒力基因分布为GDH+/CPS2J+/MRP+/ORF2+/GAPDH+,属于强毒株,1株SS毒力基因为GDH+。2株SS2毒力基因测序结果显示,CPS2J、MRP基因未见变异,提示其高度保守,ORF2、GDH、GAPDH基因存在碱基点突变,但突变对结构无影响,与参考菌株同源性较高。 相似文献
3.
猪链球菌2型四川分离株毒力基因的检测及其序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
根据猪链球菌2型的MRP、EPF和SLY基因设计合成了四对引物,对我们分离鉴定的2005四川分离株进行毒力因子检测,并对阳性产物测序比较。结果以分离株为模板,获得了与预期结果一致的867bp(MRP)、572bp(EF)的2个片段,以及SLY的长度为1502bp目的片段(外引物)和1443bp的目的片段(内引物)。说明分离株SSsc0501为MRP+EF+SLY+,属于具有3种主要毒力因子的强毒株。经对PCR阳性产物测序及序列分析,结果其与P1/7株的核苷酸序列完全一致,与1933株的同源性达99.7%,仅在128位、217位、744位、1380位、1386位的5个核苷酸发生突变。在氨基酸水平上SSsc0501株与1933株的同源性达99.6%,有2个氨基酸发生替代。 相似文献
4.
《养猪》2015,(6)
研究对从山西省主要养猪区30多个养猪场(户)分离并初步鉴定的80株有致病性的猪链球菌菌株进行主要毒力相关基因测定及耐药性监测。毒力基因测定研究结果表明:87.5%毒株含毒力因子谷氨酸脱氢酶(GDH),62.5%毒株含毒力因子溶菌酶释放蛋白(MRP),58.75%毒株含毒力因子胞外因子(EPF),72.5%毒株含毒力因子溶血素(SLY)。对致病菌株的溶血素(SLY)、胞外因子(EPF)、溶菌酶释放蛋白(MRP)这3个主要毒力相关基因进行克隆和核苷酸序列分析,未见变异。耐药性监测研究结果表明:分离鉴定的猪链球菌菌株对氨苄西林、头孢他啶和头孢曲松高度敏感;对卡那霉素、螺旋霉素、氧氟沙星、恩诺沙星中敏;对青霉素、环丙沙星、链霉素、庆大霉素、强力霉素、阿莫西林、复方新诺明、诺氟沙星、红霉素、磺胺二甲基嘧啶和土霉素等药物有耐药性。这一研究结果为山西省猪链球菌病防控措施的制定提供了科学依据。 相似文献
5.
为了解血清2型猪链球菌(S.suis2)河南分离株的毒力基因型及cps2j全基因突变情况,本研究扩增S.suis2毒力基因gdh、cps2j、mrp、ef 、sly、orf2和fbps,并对s.suis2的cps2j进行全基因序列测定和同源性分析.结果表明,gdh、cps2j、mrp、ef、sly、orf2和fbps基因在8个S.suis2分离株中的检出率分别为100％(8/8)、100％(8/8)、62.5％(5/8)、75％(6/8)、87.5％(7/8)、100％(8/8)和100％(8/8);其中cps2j全基因核苷酸及推导的氨基酸序列与来源不同的S.suis2分离株同源性分别达98％和97％以上,以该基因构建的系统发育树表明8株S.suis2河南分离株与国内外不同参考株同源性高,亲缘关系密切. 相似文献
6.
《中国动物传染病学报》2018,(6)
为探讨河南省2型猪链球菌的毒力及分布情况,本实验设计3对引物,分别扩增溶菌酶释放蛋白(muramidase-released protein,MRP)、胞外因子(extracellular protein fateror,EPF)和溶血素(suilysin,SLY)基因,对2016年1月～2016年12月从河南省猪场采集的各种组织病料中分离鉴定出的87株2型猪链球菌进行了初步的小鼠毒力试验和mrp、epf、sly基因的扩增。结果表明,河南省流行的2型猪链球菌的菌株均对小鼠有毒力,共有8种毒力基因型,其中以毒力相对高的sly+mrp+epf+型为主,其次为sly+mrp-epf+型和sly-mrp+epf+型。 相似文献
7.
猪链球菌的分离鉴定及其致病性分子基础研究 总被引：1，自引：0，他引：1
为调查猪源链球菌(S.suis)血清型的流行特点、主要毒力基因的分布及致病力情况,本研究针对来自我国部分地区800份疑似S.suis发病猪的病料样品进行S.suis的分离鉴定、血清型分型、致病力试验及主要毒力基因型检测。研究结果显示,在800份样品中分离到41株S.suis(5.13%);其中,血清型2型或1/2型S.suis 10株(24.4%),3型6株(14.6%),8型3株(7.3%),9型7株(17.1%),21型1株(2.4%),未定型14株(34.1%);致病力试验结果显示,以1×108 cfu/mL S.suis菌液接种昆明小鼠,41个分离株中具有致死性的菌株19株,其中6株致死性较强,13株致死性较弱;毒力基因检测结果显示gdh、fbps、orf2、gapdh、sly、ef和mrp基因的检出率分别为100%、82.9%、75.6%、41.5%、39.0%、19.5%和12.2%,以gdh+orf2+fbps+gapdh型(9株)、gdh+orf2+fbps型(8株)和sly+gdh+orf2+fbps+gapdh型(6株)为主要的毒力基因型。本研究结果揭示了我国S.suis各血清型的流行情况,初步探明S.suis致病力的强弱,为深入开展S.suis防控技术研究及其致病机理奠定了基础。 相似文献
8.
为探究广西部分地区猪链球菌(Streptococcus suis,SS)流行菌株主要血清型及毒力因子分布情况。本试验于2018年1月至2018年6月对从多个猪场采集到的116份疑似链球菌感染的组织病料(脑、肺脏、淋巴结等)进行病原菌检测,采用细菌分离鉴定、形态学观察及PCR扩增等方法对病原菌及其血清型和部分毒力因子进行鉴定。结果显示,116份样品共分离到链球菌32株,阳性率为27.59%(32/116),其血清型主要以SS2和SS9为主,分离率分别为40.63%(13/32)和43.75%(14/32),其他血清型为15.63%(5/32);毒力因子检测结果表明:SLY、MRP、EPF以及SBP2′因子的检出率分别为:81.25%(26/32)、59.38%(19/32)、50.00%(16/32)和71.88%(23/32)。32株链球菌中以SLY~+MRP~+EPF~+SBP2′~+(13株)、SLY~+MRP~-EPF~-SBP2′~-(5株)、SLY~+MRP~+EPF~-SBP2′~+(5株)为主要的毒力基因型,其中SS2均能检测出3个或3个以上的毒力因子。玉林、柳州市主要分布SS9型,南宁、百色市主要分布SS2型;广西不同地区毒力因子的分布情况存在差异且不同血清型或同一血清型的链球菌毒力因子的分布情况也各不相同,其中SS2携带的毒力因子检出率明显高于其他血清型。该研究可为今后猪链球菌疫苗及致病机理研究提供理论依据,为广西地区猪场链球菌血清型疫苗选择提供指导。 相似文献
9.
为探究广西部分地区猪链球菌(Streptococcus suis,SS)流行菌株主要血清型及毒力因子分布情况。本试验于2018年1月至2018年6月对从多个猪场采集到的116份疑似链球菌感染的组织病料(脑、肺脏、淋巴结等)进行病原菌检测,采用细菌分离鉴定、形态学观察及PCR扩增等方法对病原菌及其血清型和部分毒力因子进行鉴定。结果显示,116份样品共分离到链球菌32株,阳性率为27.59%(32/116),其血清型主要以SS2和SS9为主,分离率分别为40.63%(13/32)和43.75%(14/32),其他血清型为15.63%(5/32);毒力因子检测结果表明:SLY、MRP、EPF以及SBP2′因子的检出率分别为:81.25%(26/32)、59.38%(19/32)、50.00%(16/32)和71.88%(23/32)。32株链球菌中以SLY^+MRP^+EPF^+SBP2′^+(13株)、SLY^+MRP^-EPF^-SBP2′^-(5株)、SLY^+MRP^+EPF^-SBP2′^+(5株)为主要的毒力基因型,其中SS2均能检测出3个或3个以上的毒力因子。玉林、柳州市主要分布SS9型,南宁、百色市主要分布SS2型;广西不同地区毒力因子的分布情况存在差异且不同血清型或同一血清型的链球菌毒力因子的分布情况也各不相同,其中SS2携带的毒力因子检出率明显高于其他血清型。该研究可为今后猪链球菌疫苗及致病机理研究提供理论依据,为广西地区猪场链球菌血清型疫苗选择提供指导。 相似文献
10.
11.
从中国部分地区分离到9株新城疫病毒(NDV),采用RT-PCR方法扩增NDV F基因(535 bp),参照国内外已经发表的F基因构建系统进化树。结果:6株吉林分离株和2株山东分离株属于VIId基因型,氨基酸裂解位点序列为112R-R-Q-K-R-F117,为典型的强毒株特征。吉林分离株之间的核苷酸同源性为93.5%～99.1%,山东分离株之间的核苷酸同源性为99.3%,吉林和山东分离株之间的核苷酸同源性较高,约为93.5%～96.3%。1株安徽分离株属于Ⅰ基因型,氨基酸裂解位点序列为112G-K-Q-G-R-L117,为典型的弱毒株特征,与V4毒株核苷酸同源性为95.7%,与吉林、山东分离株存在一定差异。表明我国新城疫病毒主要以VIId基因型为主,也存在其他基因型的流行。 相似文献
12.
《中国预防兽医学报》2021,(5)
为了对两起牛呼吸道疾病病原进行细菌学诊断,本研究分别从出血性肺炎病死牛的肺脏和流涎病牛的唾液中分离到2株革兰氏阳性链状球菌YN180721和ZY200425。生理生化试验结果显示2株分离株生化特征与副猪链球菌(Streptococcus parasuis)模式菌株JCM 30273T相符;通过对16S rDNA基因扩增测序、分析结果显示,2株分离株与19株S. parasuis参考株形成第一个进化分支,全部13株猪链球菌(Streptococcus suis)参考株形成第二个进化分支;16S rDNA基因同源性分析结果显示,2分离株与S. parasuis参考株之间的同源性为98.8%～100%,与JCM 30273T株之间的同源性分别为98.9%和100%。以上结果表明2株分离株均为S. parasuis。进一步对16S rDNA基因分析结果显示,2株分离株和S. parasuis参考株存在两个独特相邻的核苷酸插入片段ATGA和CATT,这两个核苷酸插入片段可作为鉴别S. parasuis和S. suis的遗传标记。药敏试验结果显示,2株分离菌株对青霉素、阿莫西林、头孢噻吩等多种抗生物敏感,对磺胺甲恶唑耐药。将两株分离菌悬液分别以1×108cfu/只腹腔接种小鼠,进行致病性试验,结果显示,2株分离株对小鼠均具有较强致病性。本研究在国内首次分离到牛源S. parasuis,证实牛S. parasuis感染在我国的存在,对了解S. parasuis的生物学特性和牛S. parasuis感染的预防和控制具有重要指导意义。 相似文献
13.
猪链球菌2型毒力相关基因在分离株中的分布与突变研究 总被引：1，自引：0，他引：1
猪链球菌2型(SS2)是一种重要的人畜共患病病原,研究表明其致病力与毒力因子的相关性各有不同。为探究SS2毒力因子与致病性间的相关性,明确毒力因子能否用于致病性的评价,本研究通过PCR方法对来自吉林省9个不同规模和经营模式的猪场临床健康猪群的32株SS2分离菌株和5个强毒参考菌株的毒力相关基因(38KD蛋白、GDH、OFS、SLY、HYL、FBPS、GAPDH、ORF2和Ssn A)进行克隆测序,比较这9个毒力相关基因在该37株SS2分离株中的分布差异和突变情况。结果显示各个毒力相关基因在来自临床健康猪群的32个分离株和5个强毒参考株中呈现不均等的分布,在强毒参考菌株中谷氨酸脱氢酶(GDH)、38KD蛋白、分泌性核酸酶(Ssn A)基因的检测阳性率达到100%,在健康猪群分离株中它们的阳性率也超过90%。纤维蛋白原结合蛋白(FBPS)和溶血素(SLY)基因在强毒参考菌株中阳性率为100%,而在健康猪群分离株中FBPS和Sly基因检测率分别为68.75%和65.63%。透明质酸裂解酶(HYL)基因在两类菌株间阳性率相差较大,在强毒参考株中其阳性率约为60%,在健康猪群分离株中HYL阳性率仅为18.75%。通过测序和Blast比对分析显示,健康猪分离株中毒力相关基因突变情况非常少,而SS2强毒参考株中其突变位点较多,并呈现多种突变方式,GAPDH、HYL、Ssn A基因属于保守序列,突变较少。SLY和GDH基因也是保守序列,在健康猪群分离株中只发现一株无意义突变,但在强毒参考株中却发现多个导致氨基酸改变的突变位点和突变方式。OFS、ORF2和FBPS基因在两组菌中均有突变,但在强毒参考株中存在较多的突变,并且可造成其编码的氨基酸序列改变。提示SS2毒力相关因子复杂,仅仅依据毒力基因是否存在不能判断其毒力的强弱,其突变位点及突变方式对毒力的判断也具有一定的参考意义。 相似文献
14.
为鉴定一株2012年分离自广东省的致病菌并评价其免疫原性,本研究对该分离株进行分型鉴定和MSLT分型分析。鉴定结果显示,该分离株为血清2型猪链球菌(S.suis);其MSLT分型为ST1型,等位基因图谱是1、1、1、1、1、1、1,与高致病性的世界流行株P1/7同型;毒力基因型为Mrp+/Ef+/Sly+,将其命名为GD。进一步使用GD灭活菌以3×108cfu剂量3次免疫小鼠,免疫后分别采用GD,7型、9型S.suis WH和ZD进行攻毒试验。动物试验结果显示,免疫后小鼠抗体水平显著升高;对GD、WH和ZD的保护率分别为87.5%、87.5%和75%;免疫组小鼠血液和脏器内的细菌载量均显著低于对照组,而且无明显病变。本研究结果表明,GD灭活疫苗可以对不同血清型S.suis攻毒提供有效的免疫保护,可以作为预防S.suis病的有效灭活疫苗候选株。 相似文献
15.
猪链球菌扁桃体分离株的毒力因子分布特征与致病性 总被引：6，自引：0，他引：6
本研究设计并合成7对引物,用PCR方法对猪链球菌7种主要毒力因子,包括谷氨酸脱氢酶(gdh)、溶血素(sly)、胞外蛋白因子(ef)、溶茵酶释放蛋白(mrp)、纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白(fpbs)、三磷酸甘油醛脱氢酶(gadph)和毒力相关序列orf2进行检测,分析了29株猪链球菌扁桃体分离株的毒力因子分布特征.在被检的25株2型菌株中,共检测出7个基因型.其中10株(40%)的基因型为cps2/gdh+/sly+/ef+/mrp+/fbps+/gadph+/orf2+,7株(28%)表现为cps2/gdh+/sly-/ef-/mrp+/fbps+/gadph+/orf2+,4株(16%)表现为eps2/gdh+/sly-/ef+/mrp+/fbps+/gadph+/orl2+,基因型表现为eps2/gdh+/sly+/ef+/mrp+/fbps+/gadph+/orf2-、cps2/gdh+/sly-/ef-/mrp+/fbps+/gadph+/orf2-、eps2/gdh+/sly-/ef-/mrp*/fbps+/gadph+/orf2+、eps2/gdh+/sly-/ef-/mrp-/fbps-/gadph+/orf2-各1株;1株猪链球菌7型(SS7)分离株,基因型表现为cps7/gdh+/sly+/ef-/mrp-/fbps+/gadph+/orf2+;3株猪链球茵9型(SS9)扁桃体分离株,均表现为cps9/gdh+/sly-/ef-/mrp-/fbps+/gadph+/orf2+.可见我国SS分离株的毒力基因分布较为复杂,而且SS2的优势流行菌株是同时具有多种毒力因子的高致病茵株.通过对不同毒力基因型毒株对西藏小型猪的感染试验发现:毒力基因型为cps2/gdh+/sly-/ef+/mrp+/fbps+/gadph+/orf2+的健康扁桃体分离株SH06-21D对西藏小型猪有较强的致病性,仅次于标准株HA9801,而基因型为sly-/ef-/mrp-/fbps-/gadph+/orf2-的健康扁桃体分离株GZ06-122B对西藏小型猪不表现明显的致病性. 相似文献
16.
致病性猪链球菌2型的病原分离鉴定及毒力因子的PCR检测 总被引：6，自引：3，他引：3
通过对广西某猪场急性死亡的猪进行病原分离,分离到革兰氏阳性球菌,用链球菌快速鉴定试剂条Rapid ID 32 Strep鉴定为猪链球菌2型;并对分离菌进行猪链球菌2型荚膜多糖抗原（cps2J）及其重要毒力因子溶菌酶释放蛋白（MRP）、细胞外蛋白因子（EF）和溶血素（SLY）的多重PCR检测,同时对cps2J基因进行序列测定,与GenBank发表的猪链球菌2型相比,同源性为98.8%,毒力因子MRP、EF和SLY检测均为阳性,证实广西某猪场急性死亡的猪为高毒力猪链球菌2型感染所致。动物试验中,该菌可引起小白鼠部分死亡,家兔体温最高升至40.3℃,最后败血而死。 相似文献
17.
2006-2008年山东鸡传染性支气管炎病毒分离株S1与N基因的分子特征 总被引：1，自引：1，他引：1
为了调查2006-2008年山东省鸡传染性支气管炎的分子流行病学特征,应用RT-PCR方法分别扩增了14株传染性支气管炎病毒地方毒株S1基因和N基因,并进行了基因克隆与测序工作.对此14株病毒的S1基因序列利用限制性内切酶HaeⅢ进行了限制性片段长度多态性(RFLP)分析,结果显示可以将IBV毒株分为3种不同的基因型.其中11个毒株与LX4毒株有相同的RFLP分型,2株病毒属于Mass基因型,1个毒株有特异的RFLP分型.并将这些分离毒株与11个参考毒株分别进行了基因与氨基酸系统进化树关系分析.S1基因分析结果显示将这些毒株分成3个基因型,与RFLP分析的分型结果一致.11株病毒同属于LX4类型的毒株,分离毒株核苷酸序列相互之间有95.4%～99.7%的同源性.基因Ⅱ型与疫苗株H120和M41的同源性很高.属于基因Ⅲ型的1个毒株形成了独特的基因型.N基因分析结果表明:12株病毒与LX4属于同一基因型,有着较高的同源性.另2株病毒与疫苗株H120同源性很高.以上分析结果表明:山东省IBV分离株存在较为广泛的基因突变、插入和缺失,同时,IBV毒株间的基因重组也可能是山东省IBV变异株产生的另一主要原因. 相似文献
18.
从送检的非法屠宰的猪肉中分离到1株链球菌,结合其培养特性、生化特性、血清定型、PCR鉴定、动物实验等对其进行了鉴定。用国际通用的链球菌乳胶分型诊断液检测,结果表明其不属于链球菌兰氏分群的A～G群。但它凝集猪链球菌2型标准阳性血清,三重PCR扩增及测序结果表明其为猪链球菌2型。分离菌具有猪链球菌2型的CPS、MRP、EPF、SLY、ORF2五种主要毒力因子;将分离株人工静脉注射新西兰兔4只,均在12～24h均死亡,腹腔注射8只BALB/c小鼠后,3周内死亡5只,3只未死亡。 相似文献
19.
对猪链球菌2型、7型、9型的标准菌株和7株猪链球菌2型分离菌的谷氨酸脱氢酶(GDH)基因进行PCR扩增,经回收纯化后克隆到PMD18-T载体,筛选阳性克隆菌后测序并对其进行序列分析。结果,PCR扩增出1300bp左右的片段,包括GDH基因的整个开放阅读框,而测序结果表明,其序列与GenBank中的猪链球菌GDH基因序列一致,进一步序列分析表明,GDH的核苷酸序列在相同血清型之间同源性高达99%以上,而在不同血清型之间的同源型也达到了96%以上,而其氨基酸序列同源性则都在99%以上,且都具有GDH1型家族的功能区域。说明猪链球菌GDH基因及其蛋白具有高度的保守性,为进一步研究与应用提供了重要依据。 相似文献
20.
本研究对青藏高原地区青海猪鼻支原体分离株(Mhr-QH1)进行了Mhr-p37基因的克隆鉴定及测序分析,并利用Mhr-16S rRNA基因与Gen Bank中相关菌株基因进行了基因同源性比较和遗传进化分析。Mhr-p37基因和16S基因PCR扩增测序结果显示,获得核苷酸序列长度分别为346bp和1500bp,Mhr-QH1-p37基因核苷酸序列与中国株、法国株和美国株的同源性达到100%;同样16S rRNA基因与巴西分离株的16S rRNA基因同源性也为100%,与日本、瑞典和美国分离株的同源性为99%。进化树分析发现:Mhr-QH1分离株与巴西株聚为组成一个微小分支,与美国株和巴西株共聚为同一个大支上,并与其他Mycoplasma spp.种系进化距离较远。因此,本研究对青海猪鼻支原体菌株的Mhr-p37基因序列和蛋白氨基酸序列分析,及16S rRNA基因系统进化研究的结果,有望为我国猪鼻支原体病的分子流行病学调查提供一定的数据参考,同时提示猪场搞好饲养管理是预防本病的关键。 相似文献