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1.
铜对仔猪关节软骨细胞TGF-βmRNA基因表达的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
分离、培养仔猪关节软骨细胞，从中提取总RNA，用RT-PCR法扩增出TGF-β的cDNA，与pMD18-T载体相连，转化JM109大肠杆菌，提取质粒，鉴定所扩增片断为目的片断后，培养仔猪关节软骨细胞，并在培养液中添加不同水平的铜，分别在0、12、24、48h培养结束时，收集细胞，提取细胞总RNA。采用RT-PCR法扩增出TGF-β的cDNA，以β-actin为内参，用凝胶分析系统对扩增出的cDNA进行扫描分析，以TGF-β的cDNA的光密度值与β-actin的cDNA的光密度值之比作为TGF-β mRNA基因表达的相对水平。结果表明，细胞培养液中添加不同水平的铜能促进软骨细胞中TGF-β mRNA基因表达，其中以31．2μmol／L效果最佳。 相似文献
2.
猪Ghrelin基因的克隆及原核表达 总被引：1，自引：0，他引：1
从猪下丘脑、胃等组织中提取总RNA，根据已发表的猪的Ghrelin mRNA序列设计合成引物，通过RT-PCR进行cDNA扩增，获得了282bp的片段。将该片段克隆于pMD-18T载体后进行序列分析，确认PCR产物为Ghrelin cDNA。从阳性克隆中提取质粒，经NheⅠ和XhoⅠ双酶切，回收282bp的目的片段，定向克隆到pET-28a表达载体中，提取质粒并再次转化到BL21（DE3）中，成功地筛选出阳性克隆。经IPTG诱导阳性菌，通过SDS-PAGE检测出猪Ghrelin基因的表达． 相似文献
3.
从健康新生牛大网膜脂肪组织中提取总RNA,根据已发表的牛Resistin mRNA序列设计、合成引物,通过RT-PCR进行cDNA扩增,获得了343 bp的片段。将该片段克隆于pMD18-T载体后进行序列分析,确认PCR产物为牛Resistin cDNA。从阳性克隆中提取质粒,经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,回收343 bp的目的片段,定向克隆到pGEX-6P-1表达载体中,提取质粒并再次转化到BL21(DE3)中,成功地筛选出阳性克隆。经IPTG诱导阳性菌,通过SDS-PAGE检测出牛的Resistin基因的表达。 相似文献
4.
铜对体外仔猪软骨细胞增殖和自分泌IGF—I、IGFBP的影响 总被引：9，自引：3，他引：6
体外分离、培养仔猪关节软骨细胞，然后在细胞培养液中分别添加0、7．8、15．6、31．2、62．5μmol/L铜。结果表明，软骨细胞在4种浓度的铜中可存活并增殖，而且能增加胰岛素样生长因子（IGF－I）、胰岛素样生长因子结合蛋白（IGFBP3）的分泌量。但随铜浓度的增加，其存活率、增殖率、^3H-TdR掺入率及IGF－I、IGFBP3的分泌量有明显的差异。且以培养液中添加31．2μmol/L铜对软骨细胞的增殖作用最强，增殖率、^3H-TdR掺入数、IGF－I、IGFBP3的分泌量显著高于对照组9P＜0．01）。表明31．2μmol/L铜浓度是促进体外软骨细胞增殖和自分泌IGF－I、IGFBP3的最适浓度。 相似文献
5.
对仔猪软骨细胞进行了分离、培养，并在软骨细胞培养液中添加不同水平的铜，以观测铜对软骨细胞外基质胶原含量的影响。结果表明，在软骨细胞培养液中添加铜能显著增加细胞培养液中的胶原含量．其中以添加31．2μmol/L铜的效果最明显。证实铜能促进细胞产生胶原蛋白。 相似文献
6.
提取绵羊睾丸总RNA，并以此为模板，采用RT—PCR技术扩增出精子表面特异性蛋白PH-20的cDNA。应用T／A克隆策略，将扩增的PH-20基因克隆入T栽体，通过酶切和测序进行鉴定，结果表明，PH-20 mRNA在绵羊睾丸和附睾中均有表达。 相似文献
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利用不同的锌源饲喂早期断奶仔猪,研究其对仔猪早期生长的影响,并从激素水平及基因表达上探讨其可能的作用机制。选取28d断奶的猪45头,随机分为3组,每组设3个重复,每重复5头,对照组饲喂基础日粮（含锌101mg／kg）,另外2组分别添加硫酸锌组（ZnSO4）、蛋氨酸锌组（Zn—Met）使日粮含锌240mg／kg。结果表明：日粮中添加不同形式的锌,均能显著提高仔猪日增重和胰岛素生长因子-Ⅰ（IGF—Ⅰ）基因表达量（P〈0．05）,蛋氨酸锌组IGF—ⅠmRNA表达量显著高于硫酸锌组（P〈0．05）;而对猪血浆生长激素（GH）水平及其生长激素受体（GHR）表达影响均不显著。表明添加锌可以通过IGF—Ⅰ对生长的调控作用而影响机体生长发育。 相似文献
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从雌性绵羊妊娠期不同阶段的输卵管、子宫内膜、黄体组织中提取总RNA,根据已经发表的绵羊的Flt-Ⅰ基因的cDNA序列设计合成引物,采用RT-PCR扩增出绵羊VEGF基因;将扩增产物克隆于裁体后进行序列分析,以基因为内参,对扩增的VEGF基因进行琼脂糖凝胶电泳后,应用,推断出不同组织中Flt-Ⅰ基因的表达量.结果表明:从雌性绵羊妊娠期不同阶段生殖道各组织上皮均获得82 bp的VEGF基因的扩增片段,且VEGF基因在雌性绵羊生殖道各组织内的表达量不同.说明VEGF基因对绵羊的妊娠维持起着重要的作用. 相似文献
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该试验的目的是克隆大鼠Ghrelin基因eDNA片段进行序列分析，同时研究该基因在发情周期不同阶段卵巢中的表达。该试验是在成年大鼠胃组织提取总RNA，从Genbank里检索到大鼠Ghreline DNA序列后设计并合成引物，采用RT—PCR技术扩增出大鼠Ghreline DNA序列，获得了362bp的片段。将该片段回收并克隆到pMD18-T载体上，经PCR和限制性内切酶初步鉴定后测序，最终证明扩增出来的片段确实是GhrelineDNA序列。用相同的引物检测发情周期不同阶段大鼠卵巢中Ghrelin mRNA表达情况，发现发情前期、发情期、发情后期和休情期卵巢中都有Ghrelin mRNA的表达。 相似文献
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实验检测3乳酸脱氢酶-C4基因mRNA在绵羊睾丸和附睾中的表达情况。提取绵羊睾丸组织、附睾头、体、尾部组织总RNA，以此为模板，逆转录合成cDNA，自行设计引物，PCR扩增出347bp的目的DNA。然后，将目的片段克隆入T载体，通过菌液PCR和重组质粒酶切，鉴定重组质粒中的目的DNA。再经序列分析鉴定目的片段。同时，以β-actin为内参照物，进行RT—PCR半定量分析，比较在睾丸、附睾头、体、尾部组织中的表达量。结果表明：乳酸脱氢酶-C4在绵羊睾丸中表达量最多，尾部中表达不明显。 相似文献
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半定量RT-PCR法分析猪肝脏中铜锌超氧化物歧化酶mRNA表达水平 总被引：3，自引：0，他引：3
细胞内铜锌超氧化物歧化酶（CuZnSOD）是动物体内一种重要的抗氧化酶。本实验室构建了优化的半定量RT-PCR法，以18S rRNA为内标，研究猪肝脏组织中CuZnSOD基因mRNA表达水平。提取猪肝脏组织总RNA，经反转录后进行扩增，先寻求PCR线性扩增范围，确定RT．PCR的最佳循环数和Mg^2＋浓度。扩增后用VDS摄像系统扫描PCR扩增产物的电泳条带灰度。通过CuZnSOD PCR产物的灰度与18S rRNA PCR产物的灰度之比，即可计算出CuZnSOD mRNA的相对含量。 相似文献
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铜对体外仔猪软骨细胞增殖和自分泌IGF-Ⅰ、IGFBP3的影响 总被引：4，自引：0，他引：4
体外分离、培养仔猪关节软骨细胞,然后在细胞培养液中分别添加0、7.8、15.6、31.2、62.5μmol/L铜.结果表明,软骨细胞在4种浓度的铜中可存活并增殖,而且能增加胰岛素样生长因子(IGF-Ⅰ)、胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP3)的分泌量.但随铜浓度的增加,其存活率、增殖率、3H-TdR掺入率及IGF-Ⅰ、IGFBP3的分泌量有明显的差异.且以培养液中添加31.2μmol/L铜对软骨细胞的增殖作用最强,增殖率、3H-TdR掺入数、IGF-Ⅰ、IGFBP3的分泌量显著高于对照组(P＜0.01).表明31.2μmol/L铜浓度是促进体外软骨细胞增殖和自分泌IGF-Ⅰ、IGFBP3的最适浓度. 相似文献
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从雌性绵羊输卵管、子宫体、子宫颈、阴道组织中提取总RNA，根据已获得的绵羊ghrelin基因cDNA序列设计特异性引物，采用RT—PCR方法扩增出了绵羊ghrelin基因；将扩增产物克隆于pMD19-T载体后进行测序。以β-肌动蛋白（β-actin）基因作为内参，采用半定量RT—PCR法扩增ghrelin基因，经琼脂糖凝胶电泳后，应用凝胶成像分析系统计算雌性绵羊不同生殖道组织中ghrelin基因的表达量。结果显示，从雌性绵羊生殖道各组织均扩增出了233bp的ghrelin基因片段；ghrelin基因在子宫体的表达量最高，输卵管内次之，子宫颈和阴道内最低。表明，ghrelin对雌性绵羊生殖系统的调节及生殖激素的分泌等具有重要作用。 相似文献
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亚洲璃眼蜱唾液腺差异表达基因文库的构建及分析 总被引：4，自引：0，他引：4
从单雌蜱克隆群中挑选未吸血雌蜱60只，随机分成两组。未吸血组直接剖取唾液腺．半饱血组于蜱吸血第5d采集，分离唾液腺。Trizol法提取总RNA，经第一链合成、LD—PCR、RasⅠ酶切、接头连接和抑制消减杂交（SSH）等步骤，获得差异表达基因的cDNA片段。将纯化的cDNA片段与pGEMT—Easv我体连接，转化DH5a，获得204个白色菌落。扩增检查表明，136个克隆含有插入片段，片段大小为250bp-850bm，测出有效序列120个。由10个cDNA片段的RT—PCR检查结果初步断定，本研究消减效果良好。由网上资源分析得：21个片段与其他蜱的基因，19个片段与按蚊、库蚊、钩虫、奥斯特线虫等其他吸血寄生虫的基因，9个与果蝇的基因具有同源性。 相似文献
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竞争性RT-PCR检测铜对Ctr1 mRNA表达的影响 总被引：3，自引：0，他引：3
为了应用竞争 RT- PCR法检测铜对猪传代肾细胞 (PK15 )中特异性铜转运蛋白 Ctr1基因 m RNA表达水平的影响 ,经 2次克隆 ,将筛选出一段 4 0 0 bp的核苷酸序列 ,插入 RT- PCR扩增出的 5 30 bp Ctr1目的片段中 ,构建了插入突变型 Ctr1- c DNA竞争模板。再将竞争模板与各试验组 c DNA同时进行 PCR扩增。结果 ,猪肾 PK15细胞 Ctr1基因m RNA表达量在 7.8～ 31.2 μmol/ L Cu范围内随铜添加浓度的升高减少 ,当铜添加浓度达到 6 2 .5 μmol/ L 时 ,其表达量又有所回升 ,呈双相反应。 相似文献