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旨在建立检测鸡传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus, ILTV)绝对定量方法。根据已发表的鸡ILTV的TK基因序列,针对其保守区域分别设计1对特异引物和1条探针,建立检测鸡ILTV的微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)方法,并评价其特异性、敏感性和重复性。结果显示,建立方法的最佳引物浓度为20μmol/μL,最佳探针浓度为10μmol/μL,最佳退火温度为56℃。特异性检测结果显示,建立的方法只检出ILTV,没有检出其他病原株。敏感性检测结果显示,采用建立的方法定量检出ILTV重组质粒标准品的最低限为4.6拷贝/μL。对3个连续稀释的pMD18-ILTV重组质粒DNA进行检测,3次重复检测结果的变异系数均小于5%。对83份病鸡喉拭子、肺及脾组织样品进行检测,采用建立的ddPCR检出ILTV阳性样品10份,荧光定量PCR检出ILTV阳性样品9份,ddPCR的阳性检出率(12.05%)高于荧光定量PCR的阳性检出率(10.84%)。结果表明,建立的ddPCR方法定量检测ILTV特异性强、敏感性高、重复性好... 相似文献
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多重PCR同时检测鸡AIV、NDV、IBV、ILTV和MG方法的建立和临床应用 总被引：3，自引：2，他引：1
通过建立针对鸡AIV、NDV、IBV、ILTV和MG的多重PCR鉴别诊断技术,并进行了特异性、敏感性试验和临床应用。结果表明：设计的5对引物对同一样品中的RNA（AIV、NDV、IBV）和DNA（ILTV、MG）进行多重PCR扩增,均同时得到5条片段大小与设计相符的特异性片段,即268bp（AIV）、321bp（NDV）、457bp（IBV）、662bp（ILTV）和732bp（MG）。说明该多重PCR技术具有较强特异性和较高敏感性,能检测出1pgAIV、1pgNDV、10pg IBV的RNA和1pg ILTV、10pgMG的DNA。对自然感染鸡临床样品检测的结果则证明,该技术在临床诊断方面具有广阔的应用前景。 相似文献
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鸡传染性喉气管炎病毒PCR诊断技术研究 总被引：4，自引：0，他引：4
根据传染性喉气管炎病毒 (ILTV)基因的核苷酸序列 ,设计并合成了一对引物 ,以ILTV北京E2株、ILTV山东分离株和 4个发病鸡喉气管组织的DNA为模板 ,利用PCR反应扩增出了一条长 12 0 0bp的核苷酸片段 ,而以正常绒尿膜组织、鸡正常喉气管组织、鸡传支病毒、鸡新城疫病毒感染鸡胚的尿囊膜DNA为模板的PCR扩增反应 ,则为阴性 ,说明该方法对ILTV是特异的。敏感性实验表明 ,该体系可检测到 40pg的ILTV感染鸡胚尿囊膜DNA。对发病鸡不同部位DNA的PCR扩增结果表明 ,喉气管是ILTV的主要增殖部位 相似文献
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鸡传染性喉气管炎病毒PCR诊断方法的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
根据已知的鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV) gp60 基因自行设计引物,对ILTV 的PCR诊断方法进行研究。以ILTV- SD 分离株、ILTV- Vac 疫苗株DNA 为模板进行扩增,得到了422bp大小的扩增片段,经序列分析发现2 个毒株的gp60 基因序列相同。用MDV、HVT以及正常绒尿膜组织的DNA作PCR,结果为阴性。PCR和病毒分离方法均能在人工感染2 ～8 天的鸡样中检测到ILTV,二者对12 个田间样品的阳性检测率分别为8/12 和4/12 。结果表明,所建PCR方法具有高度特异性,比病毒分离方法更为敏感、快速、简便。 相似文献
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本试验以Genbank中登录的鸡毒支原体的16s rRNA基因序列为标准,根据前人设计的两套引物(外引物和内引物)对鸡毒支原体DNA进行两次PCR扩增,建立两次PCR扩增体系和条件。最后,用此体系和条件对从市场上随机购买的17支鸡新城疫La Sota系活疫苗样品和13支鸡新城疫Ⅰ系活疫苗样品进行检测。结果显示,运用建立的两次PCR扩增体系和条件可以从疫苗样品中检测到支原体的污染,外引物的检出率为23.3%(7/30),内引物的检出率为10%(3/30)。 相似文献
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鸡传染性贫血病PCR试剂盒技术的研究及应用 总被引：2，自引：0，他引：2
根据鸡传染性贫血病毒（CIAV）的VP1、VP2基因序列的结构特点,设计合成了一对引物,建立了检测鉴别鸡传染性贫血病毒PCR技术,并研制出CIAV—PCR检测试剂盒。试验结果显示,该CIAV—PCR检测试剂盒对参考菌株和地方分离株均能特异性地扩增出420bp条带,而对其他禽病病原体的扩增结果为阴性;该CIAV—PCR试剂盒最低能检测出10fg的CIAV DNA模板;保存期测定结果显示,在-20℃条件下保存至1、3．6、9个月时,试剂盒的敏感性无明显变化,仍能检测到10～100fg的CIAV DNA模板,保存至12个月时其敏感度虽然降低了1个滴度,但仍能100％检出人工感染鸡的临床样品。表明该CIAV—PCR检测试剂盒对CIAV临床样品的检测具有特异、敏感、快速和准确的特点,适合在临床生产中推广使用。 相似文献
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为建立一种简便、快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪细小病毒（PPV）和猪伪狂犬病病毒（PRV）3种病原的多重PCR方法，针对PRRSVN基因、PPVVP2基因及PRVgp50基因分别合成了1对特异性引物，通过PCR均扩增出分子长377bp、445bp和217bp的DNA条带，与预期扩增片段相符。以3对引物同时对PRRSV、PPV和PRV疫苗株进行多重PCR扩增及反应条件的优化，同时扩增出3条特异性条带。利用所建立的多重PCR方法，对贵州省11个养猪场的40份疑似病料进行检测，结果显示，PRRSV、PPV和PRV的阳性检出率分别为62．5％、17．5％和0％。 相似文献
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利用设计合成的根肿病菌 (Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａｂｒａｓｓｉｃａｅ)特异性寡聚核苷酸引物Ｄ85 81 9Ｆｗ/Ｄ85 81 9Ｒｖ,根据本研究组成员对十字花科蔬菜根肿病菌核糖体基因ＩＴＳ区段克隆测序结果 (未发表 )而设计的引物ＩＴＳＦｗ/ＩＴＳＲｖ和真菌核糖体基因ＩＴＳ区段通用引物ＩＴＳ1 /ＩＴＳ4,对分离自十字花科作物(白菜、青菜、甘蓝、芥蓝、花椰菜等 )根肿病菌全基因组ＤＮＡ进行ＰＣＲ(ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ)特异性扩增试验。试验结果表明 ,这 3对引物均能从十字花科根肿病菌全基因组ＤＮＡ中扩增… 相似文献
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根据番茄白粉菌核糖体DNA的ITS(internal transcribed spacer)序列的特异性,设计2对引物OidF1/R1、OidF2/R2,对番茄白粉菌进行了PCR特异性扩增试验。结果表明:2对引物都可以从番茄白粉菌基因组DNA中扩增出350 bp左右的特异性扩增产物,并具有专一性,只在白粉菌和接种感病组织DNA中有扩增条带,而番茄早疫病菌、叶霉菌以及健康组织DNA中均无特异性扩增片段;引物具有高度的灵敏度,可以检测含有1 ng的番茄白粉菌DNA。由此证明,该方法可快速、准确和灵敏地鉴定和检测番茄白粉病的发生。 相似文献
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随着转基因水稻研究在世界范围内的研究和开发,以及转基因水稻商业化的争议性加剧,相关部门对粮食安全、食品安全更加关注,农业科研单位检测转基因水稻也将具有重要意义。参照农业部的质检标准书和转基因PCR检测中的实践经验,对抗虫转基因水稻在转基因检测中可能出现的问题进行了技术层面和理论层面分析;同时对转基因抗虫水稻的启动子、终止子、内参基因、靶基因等几个元件的检测分别进行探讨,并重点分析了启动子和终止子的检测工作,根据研究者的工作经验报道,从植物病毒学原理和植物基因工程的理论角度,提出了对转基因PCR定性检测中可能遇到问题的解决方案。 相似文献
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随着全球水产养殖产业的蓬勃发展,水产动物疫病频繁发生,给水产产业带来巨大经济损失. 快速检测技术在防控水产疫病中具有重要的意义. 基于 LMAP 法与荧光定量 PCR 法为原理设计的水产病害快速检测试剂盒,凭借其快速高效的检测能力在基层检测中得到了广泛应用,为评价这些新兴快检产品的检出能力和判定准确性,本试验分别采用 LAMP、荧光 PCR 和标准 PCR 对6种水产疫病的进行比较检测. 结果表明,3种检测方法的检测能力排序是：荧光PCR快速检测>标准PCR>LAMP,但是三者判定准确度一致,说明3种检测方法在检测水产动物疾病中是可靠的. 相似文献
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【目的】建立巢式PCR方法,快速检测处于病害潜育期的玉米叶片内的多堆柄锈菌(Puccinia polysora),为玉米南方锈病(southern corn rust)的预测和防治提供技术支持。【方法】根据多堆柄锈菌ITS区序列,在其变异区设计3条多堆柄锈菌特异性检测引物NX471-F、NX255-F和NX255-R,建立以NX471-F与真菌ITS区通用引物ITS4为外侧引物,NX255-F/NX255-R为内侧引物的巢式PCR。采用20μL扩增体系：Ex Taq DNA聚合酶(5 U·μL-1)0.15μL、10×Ex Taq Buffer(Mg2+plus)2μL,d NTP Mixture(各2.5 mmol·L-1)1.6μL,上下游引物(10μmol·L-1)各0.3μL,DNA 1μL,14.65μL ddH2O。扩增程序：利用外侧引物NX471-F/ITS4进行第一步PCR扩增,95℃预变性7 min;95℃变性30 s,55℃退火30 s,72℃延伸45 s,... 相似文献
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PCR检测鸭疫里默氏菌的研究 总被引：8，自引：1，他引：8
对本研究室分离、鉴定并保存的42株鸭疫里默氏菌(包括8个血清型)、9株鸭源大肠杆菌和4株鸭源禽多杀性巴氏杆菌进行PCR扩增，结果所有的鸭疫里默氏菌均能扩增出809bp的特异性DNA片段，而鸭源大肠杆菌和鸭源禽多杀性巴氏杆菌均为阴性。试验证明以细菌DNA和全菌体分别作模板，对PCR的扩增结果无影响。经过优化的该PCR方法能检测出的最低DNA量为1pg。 相似文献