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重金属镉离子免疫抗原初步制备与鉴定 总被引：2，自引：0，他引：2
选用螫合剂Isothiocyanobenzyl-EDTA（IEDTA）分别桥接载体蛋白KLH和BSA。络合重金属镉离子，初步制备免疫抗原和检测抗原，免疫Balb／C小鼠并制备抗血清；利用紫外分光光度法、三硝基苯磺酸法（TNBs）和测定抗体效价初步鉴定抗原。建立了重金属镉离子ELISA快速检测技术及单克隆抗体高效特异的免疫与检测抗原。抗原紫外吸收峰与载体蛋白紫外吸收峰有明显差异，2种抗原游离氨基酸含量在33％～40％之间，抗原蛋白含量均高于70％，血清效价在1：81920以上。结果提示，免疫抗原特异性较好。可用于单克隆抗体制备。 相似文献
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为制备一种呕吐毒素(deoxynivalenol,DON)单克隆抗体(McAb),对DON进行改造,合成了半抗原,然后与载体蛋白BSA、OVA分别偶联合成偶联抗原DON-BSA、DON-OVA,并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳法和紫外分析法对合成的偶联抗原进行鉴定。然后用DON-BSA作为免疫抗原,DON-OVA作为检测抗原免疫小鼠制备抗DON的单克隆抗体。结果所得单克隆抗体为IgG1亚型,分子质量为158ku,抗体标准曲线IC50值为1.7μg/L,与T2毒素、黄曲霉毒素B1几乎没有交叉反应,筛选到的单克隆抗体可用于研制DON酶联免疫检测产品。 相似文献
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为建立一种快速、简便、适应现场应用的水牛大片形吸虫检测方法,本试验利用抗大片形吸虫ES抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株7D1和7D4分别制备和纯化得到单克隆抗体7D1和7D4;采用柠檬酸三钠还原法制备颗粒大小为30 nm的胶体金,再用胶体金标记纯化单克隆抗体7D1,在硝酸纤维素膜的质控带和检测带处分别包被羊抗鼠IgG二抗和单克隆抗体7D4,经反应条件优化,组装成了大片形吸虫免疫检测试纸条。经测试该检测试纸条对ES抗原的检测下限为0.94 μg/mL,与胰扩盘吸虫、前后盘吸虫、支原体、弓形虫、伊氏锥虫均无交叉反应,特异性好。采集广西地区334份水牛新鲜粪样并用试纸条检测,阳性率为38.62%。结果表明,试纸条方法操作简单、快速、易于判定,特异性好,敏感性高,适合基层大面积普查和现场检测大片形吸虫。 相似文献
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在常规酶联免疫法(ELISA)的基础上,用辣根过氧化物酶标记氯霉素与牛血清白蛋白偶联后免疫小鼠制得的单克隆抗体,并优化抗体工作浓度、反应时间等试验参数,建立了一种简便、快速、准确的氯霉素(CAP)残留一步式化学发光酶联免疫检测方法。结果表明:该方法最佳检测范围为20～1620 pg/mL,IC50值达59.911 pg/mL,检测限为9.3 pg/g,可检出国际规定的CAP残留标准限量值以下的残留量。与常规ELISA检测方法相比,不仅提高了检测限和灵敏度,而且反应时间缩短了60 min。采用一步式化学发光酶联免疫检测氯霉素残留,可以大幅度缩减检测时间,更符合快速检测的要求。 相似文献
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猪胸膜肺炎放线杆菌单克隆抗体的制备与鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
目的:建立抗血清1型猪胸膜肺炎放线杆菌(APP-1)脂多糖(LPS)的单克隆抗体杂交瘤细胞株,为今后建立该菌的免疫检测技术奠定基础。方法:腹腔注射APP-1标准株的甲醛固定抗原免疫BALB/c小鼠,ELISA检测血清中LPS抗体滴度并选择值最高的小鼠用于细胞融合,且于融合前3天加强免疫1次。常规方法进行融合,HT、HAT培养液选择培养融合后的细胞,ELISA检测细胞培养上清中的LPS抗体,阳性杂交瘤细胞用有限稀释法克隆传代。结果:获得2株稳定分泌抗APP-1LPS抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株,其小鼠腹水单克隆抗体效价132000～164000。结论:已成功建立2株稳定分泌抗APP-1LPS抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株,为今后建立该菌的免疫胶体金分型诊断技术奠定基础。 相似文献
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ELISA一步法快速检测牛奶中三聚氰胺的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
在制备三聚氰胺单克隆抗体的基础上建立了一种用于检测牛奶中三聚氰胺含量的间接竞争酶联免疫检测方法,采用一步法操作,评估了方法的回收率、准确度、精密度和特异性,并利用液相色谱―串联质谱法进行了盲样确证试验。结果显示,该方法的线性检测范围为10~810 ng/mL,灵敏度为10 ng/mL,回收率为84.0%~90.0%,同类似物交叉反应率均小于0.1%。本试验建立的ELISA一步法能满足牛奶中三聚氰胺的检测要求。 相似文献
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《畜牧与兽医》2016,(11):27-31
通过对金刚烷胺分子结构进行改造,制备得到了金刚烷胺半抗原及人工抗原,免疫动物,制备特异性单克隆抗体。在筛选金刚烷胺单克隆抗体的基础上,建立酶联免疫检测方法,并研制出检测动物组织中金刚烷胺残留的试剂盒。该试剂盒工作范围为0.5~40.5μg/L,线性回归方程为y=-2.069x+0.493,IC_(50)为2.1μg/L,相关系数R2为0.998;试剂盒检测限为0.25μg/kg,金刚烷胺回收率在82.5%~91.0%,批内、批间变异系数均小于10%;与阿莫西林、苯唑西林、头孢噻呋三种类似结构药物均无交叉反应。该试剂盒灵敏度高、检测限低、特异性强、操作简便,可广泛用于动物组织中金刚烷胺残留量的测定。 相似文献
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农药、兽药、重金属、生物毒素等残留物质的痕量检测在医学诊断、食品安全、环境监测等领域均具有重要意义，其中基于抗原-抗体特异性识别的免疫分析技术具有特异性强、灵敏度高、稳定性好、操作简便快捷等优点，但如何获得小分子化合物的特异性抗体是研制免疫分析技术的关键。作者介绍了基于杂交瘤技术制备小分子化合物单克隆抗体的方法，分析了影响杂交瘤技术制备小分子化合物单克隆抗体的因素，然后综述了小分子化合物单克隆抗体在兽药残留、药物开发、环境保护等动物医学领域的应用，最后展望了小分子化合物单克隆抗体生产和应用的发展趋势，为小分子化合物单克隆抗体的制备与应用相关研究提供指导。 相似文献
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本研究旨在阐明鸭疫里默氏杆菌RA-LZ01株GE296_RS01450基因介导其对重金属离子产生耐受性的作用。构建RA-LZ01株的GE296_RS01450基因缺失株Δ1450和回复株cΔ1450,测定菌株的生长曲线、抗菌素对菌株的最小抑菌浓度（MIC）、菌株对重金属离子的耐受程度以及GE296_RS01450基因在特异性重金属离子刺激下的转录水平。结果显示,与亲本株相比,缺失株的生长能力以及11类抗菌素对缺失株的MIC值均无明显变化;与亲本株和回复株相比,缺失株对重金属离子Ni、Mn和Co的敏感性显著上升,并且在Ni、Mn刺激下,GE296_RS01450基因的转录水平显著上调。上述结果表明,GE296_RS01450基因不参与亲本株的生长及菌株对抗菌素的耐药性,可介导菌株对Ni、Mn和Co产生耐受性。GE296_RS01450基因属于GE296_RS01445-GE296_RS01450-GE296_RS01455 RND外排泵,编码外膜蛋白,我们将其命名为RopM。 相似文献
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重金属污染与蚕桑生产关系研究进展 总被引：1，自引：0，他引：1
重金属污染来源广泛,给人类的健康和生态环境造成了极大破坏。介绍了重金属污染对动植物生长、发育以及人类健康等方面的影响和对桑树及家蚕生长发育的影响,提出了将桑树作为某些重金属污染土壤修复植物使用的设想,并对桑树育种在保护生态、改善环境上指出了新的方向。 相似文献
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重金属是危害草原生态健康的主要污染物之一,迄今有关大庆市及周边地区草原土壤重金属含量、空间变异和污染程度的研究鲜见报道。本文通过野外调查采样,应用地统计学,结合经典重金属污染评价方法,分析了大庆市及周边地区草原土壤Cd,Cr,Pb,Cu,Zn,Ni,Hg及As含量的空间变异与污染程度,结果表明:研究区8种重金属含量具有中等空间异质性,变异系数在28.3%~58.5%。8种重金属元素可以用指数模型、高斯模型和球状模型拟合,Cd,Cr,Pb,Cu,Zn,Ni和As的块金值/基台值[C0/(C0+C)]在25%~75%,其空间变异由结构性变异(母质、地形等)和非结构性因素(人类活动)共同引起,Hg的[C0/(C0+C)]>75%,即非结构性因素对其的影响大。土壤重金属含量呈斑块状、条带状、点状和环岛状分布特征。研究区8种重金属的超背景值率较高,表现为累积的特征。As和Ni的分别有23.7%和1.7%的采样点重金属含量超过《国家土壤环境质量标准》(GB15618-1995)2级标准限值。地积累指数评价表明,As存在轻度污染风险,其他重金属无单因子污染风险。潜在生态风险评价表明,8种重金属元素均不存在潜在生态风险。大庆市及周边地区草原土壤重金属呈现空间中等强度变异,个别重金属元素存在超标现象,土壤质量整体良好。 相似文献
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重金属铅暴露对家蚕组织GSTs和GSH-Px酶活力及基因表达的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
谷胱甘肽S-转移酶(GST)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)是生物体内重要的解毒酶。为了研究重金属铅对鳞翅目昆虫的影响机制,给家蚕添食Pb(NO3)2进行Pb2+暴露,用酶活测定和real-time PCR方法,调查家蚕5龄6 d幼虫不同组织中酶活性及相关基因mRNA转录水平的变化。正常家蚕5龄6 d幼虫生殖腺中的GST酶活性分别是脂肪体和中肠中的20.0倍、34.6倍,GSH-Px酶活性分别是脂肪体和中肠中的57.7倍、46.6倍。幼虫食下含10 mg/kg Pb2+以上的人工饲料时,生殖腺中2种解毒酶的活性成倍下降;人工饲料含20～80 mg/kg Pb2+时,生殖腺中的Gstd1和Gsh-Px基因mRNA转录水平也显著下调,且雄性比雌性更加显著。幼虫食下含10～160 mg/kg Pb2+的人工饲料时,脂肪体中2种解毒酶活性显著升高,Pb2+对2种酶的影响浓度分别为10～160 mg/kg和20～80 mg/kg,但在20～80 mg/kg Pb2+范围内,Gsh-Px和Gstd1基因mRNA的转录却受到抑制,并且雌性幼虫脂肪体中的GSH-Px酶活性及其基因mRNA转录水平、雄性幼虫脂肪体中的GST酶活性及基因mRNA转录水平对Pb2+暴露更加敏感。幼虫食下含20 mg/kg Pb2+以上的人工饲料时,中肠的GST酶活性显著上升,而GSH-Px酶活性变化较小,性别间差异不明显;Gstd1基因mRNA转录水平有上调趋势,Gsh-Px基因mRNA转录水平则受到显著抑制。结果显示,家蚕幼虫生殖腺虽然有比脂肪体和中肠更强的GST酶和GSH-Px酶活性,但对Pb2+的毒害敏感,雄性比雌性受影响更大,生殖腺通过抗氧化防御系统抵御Pb2+毒害的作用很弱。 相似文献
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论文测定了陕西关中地区塿土紫花苜蓿（Medicago sativa- Linn.）、白三叶(Trifolium repens- Linn.)、菊苣(Cichorium endivia- Linn.)、大麦(Hordeum vulgare Linn.)和无芒雀麦(Bromus inermis-Leyss.)地上部与根部铅、铬、锌、铜、铁、锰5种重金属元素的含量,评价了参试牧草对各种重金属的转运能力和饲草的安全性。结果表明：（1）5种牧草根部对所测六种重金属元素的吸收转运能力不同,对铅、铁、锰、锌、铜、铬的吸收能力有禾本科强于豆科的趋势;（2）白三叶对于铁,铜和菊苣对于猛、锌、铜的转运系数大于1,分别为1.70、2.55、1.57,属富积型植物;（3）菊苣的铅含量与种牧草的铬含量均已超过饲料标准;菊苣和大麦作为人类的蔬菜和粮食均已超过相应标准,但作为饲料基本接近相应标准。 相似文献
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丝素蛋白是蚕丝的主要组成部分,具有较好的吸湿性、透气性、吸附性等。而现今人类生活环境中存在较多的有害金属离子,因此拓展丝素蛋白吸附金属离子的用途具有重要的意义。本文在前期研究已证实丝素蛋白具有较好的吸附重金属离子能力的基础上,进一步测定分析了不同状态下的丝素蛋白（溶液状、凝胶状、粉末状）对金属离子（以锌为例）的吸附作用,探讨了丝素蛋白二级结构的变化,阐明了丝素蛋白吸附金属离子的机理。结果显示：丝素蛋白吸附锌离子时,氢元素与氧元素参与了其反应,而氮元素也可能参与了反应,丝素蛋白肽链上的-OH、-CO-NH-以及-NH2与Zn2+通过配位键形成了配合物;且丝素蛋白β-折叠增加而无规卷曲减少,丝素蛋白与Zn2+形成的配合物具有更稳定配位结构;同时pH对该配位反应过程也存在一定的影响。 相似文献
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A review of enzyme immunoassay for detection of antibody to Brucella abortus in cattle 总被引：2，自引：0，他引：2
K H Nielsen P F Wright W A Kelly J H Cherwonogrodzky 《Veterinary immunology and immunopathology》1988,18(4):331-347
Enzyme immunoassay has gained wide acceptance for serological diagnosis of bovine brucellosis because of its ability to detect antibody of all isotypes unlike the conventional tests. The indirect enzyme immunoassay, however, presents several parameters that require careful analysis. These parameters include the choice of antigen and antiglobulin-enzyme conjugate reagents for use in the assay, dealing with the large amount of data the semi-automatic or automatic assay can generate and the inter- and intralaboratory standardization and quality control. This review considers the various methods described in the literature and, briefly, how some of the problems have been overcome or how they might be dealt with. 相似文献