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为了研究天蚕抗菌肽在奶牛乳腺组织长期表达的可行性以及对大肠杆菌的抑制作用,将天蚕抗菌肽B(cecropinB,CB)的基因序列以哺乳动物偏爱的密码子优化后,合成了四条相互重叠的DNA片段,通过重叠延伸PCR法获得了天蚕抗菌肽B的基因,将其亚克隆至T栽体,测序正确后构建逆转录病毒载体pLNCX_bCP-cecB,经过包装细胞的包装,获得含有天蚕抗菌肽B表达框的逆转录病毒,注射入奶牛乳腺组织,通过琼脂板孔穴扩散法检测基因的表达及活性;实验结果表明,克隆的抗菌肽基因在乳腺中获得了表达,表达产物对大肠杆菌具有抑制作用,抑制效果可以持续至13天以上. 相似文献
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天蚕素类杂合肽cecropinA-magainin突变体的合成以及在毕赤酵母中的分泌表达 总被引：1，自引：1，他引：0
根据天蚕素类抗菌肽作用机制假说,设计引物对前期构建成功的载体天蚕素类杂合肽cecropinA-magainin进行定点突变,使其生成杂合肽的衍生物,测序正确后转化Pichia pastoris受体菌SMD1168,在醇氧化酶(AOX)启动子调控下,分子质量约119ku的cecA-mag杂合抗菌肽突变体获得表达,并通过琼脂扩散试验对表达产物的抑菌活性与cecA-mag进行了比较。结果表明,突变体对金黄色葡萄球菌抑菌活性比cecA-mag提高了1.2倍。 相似文献
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通过重叠区扩增基因拼接法(SOE)合成抗菌肽天蚕素B基因,并在其N端引入Kex2酶切位点.亚克隆天蚕素B并将3个亚克隆串联在一起,每个单体前都加上Kex2酶切位点,将天蚕素B以及串联体克隆至表达载体pPICZαA上,用Sac Ⅰ酶切使之线性化,采用电击法转化毕赤酵母SMD1168,转化子用小瓶发酵.经Tricine-SDS-PAGE检测,在α信号因子的引导下,表达产物可以分泌到培养基中,且具有明显抑菌活性. 相似文献
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抗菌肽天蚕素B基因及其串联体在毕赤酵母中的表达 总被引：1，自引：0，他引：1
通过重叠区扩增基因拼接法(SOE)合成抗菌肽天蚕素B基因,并在其N端引入Kex2酶切位点.亚克隆天蚕素B并将3个亚克隆串联在一起,每个单体前都加上Kex2酶切位点,将天蚕素B以及串联体克隆至表达载体pPICZαA上,用Sac Ⅰ酶切使之线性化,采用电击法转化毕赤酵母SMD1168,转化子用小瓶发酵.经Tricine-SDS-PAGE检测,在α信号因子的引导下,表达产物可以分泌到培养基中,且具有明显抑菌活性. 相似文献
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抗菌肽天蚕素对鸡生长性能、肠道黏膜形态、盲肠菌群及免疫功能的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
为了研究抗菌肽天蚕素对鸡生长性能、肠道黏膜形态、盲肠主要菌群以及血液免疫指标的影响,选取1日龄体质量相近的固始鸡450羽,随机分为5组,对照组饲喂基础日粮,试验组饲喂分别添加了500 mg/kg抗生素以及100 mg/kg、200 mg/kg、500 mg/kg天蚕素的日粮,试验期为60 d。结果显示,日粮中添加200 mg/kg天蚕素可显著提高1~21日龄鸡平均日增质量、降低料质量比(P0.05);日粮中添加200~500 mg/kg天蚕素能显著增加鸡十二指肠、空肠、盲肠的黏膜厚度和绒毛长度/隐窝深度比值(V/C值)(P0.05);添加500 mg/kg天蚕素能够有效地减少鸡肠道中大肠杆菌和沙门氏菌数量,同时又提高乳酸菌数量,并可显著增加鸡血清IgA、IgG、IgM含量(P0.05),添加200~500 mg/kg天蚕素可显著增加血清补体4(C4)含量(P0.05)。由此可见,日粮中适量添加天蚕素可以提高鸡的生长性能,改善鸡肠道黏膜形态,抑制肠道有害菌的增殖并刺激有益菌的增殖,同时还能提高机体的免疫功能。 相似文献
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应用基因枪将蚕抗菌肽基因导入水稻获抗白叶枯病株系 总被引：22，自引：1，他引：22
将天蚕抗菌肽Ｂ基因应用基因枪法导入水稻发芽种胚，获得转基因植株。经Ｂａｓｔａ抗性鉴定，应用ＰＣＲ技术和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析表明，抗菌肽Ｂ基因已整合到水稻的基因组。Ｔ３抗白叶枯病朱系Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析证明抗菌肽Ｂ基因在ＲＮＡ水平有表达。 相似文献
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转基因水稻外源基因的遗传和表达初步研究 总被引：13，自引：0，他引：13
将天蚕抗菌肽B基因应用基因枪法导入水稻TN1发芽肿胚，获得转基因植株2株，转基因水稻T1－T5 5个世代不同株系，对bar基因、抗菌肽基因的遗传和表达进行初步研究。结果表明：转基因后代株系bar^R:bar^S在部分符合3：1分离比率。T1、T4转基因株系PCR、Southern印迹分析表明，T18株有抗菌肽B基因；T4仍有4个株系有抗菌肽基因，其他的株系基因丢失，T3 1个株系Northern印迹证明抗菌肽基因在RNA水平有表达；抗菌肽B转基因水委对白叶枯病的抗病性有提高，抗性能传递到高世代，在T3得到抗病性提高的株系。 相似文献
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抗菌肽的研究概况及应用前景 总被引：7，自引：0，他引：7
抗菌肽是动物防御体系中产生的一类抵抗外源性病原体侵害的肽类物质,具有抗细菌、真菌、病毒、原虫、癌细胞等多种生物活性,且不易产生抗药性,其应用前景广阔。概述抗菌肽的分类、结构特征、生物活性、作用机制,指出抗菌肽研究的存在问题及应用前景。 相似文献
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斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)肝脏表达的抗菌肽-2(LEAP-2)在E.coli中的融合表达 总被引：1，自引：0，他引：1
抗菌肽是存在于生物细胞中的一类具有强抗菌作用的天然小分子多肽,它们在机体免疫系统中发挥了重要作用,被认为是抗生素的理想替代品.本文通过RT-PCR法从斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)的肝脏中分离到抗菌肽-2(LEAP-2)基因,该基因编码94个氨基酸残基组成的多肽;氨基端的信号肽由28个残基组成,成熟肽含有41个残基;对于鱼类和哺乳动物显示高度保守的4个半胱氨酸残基位于多肽的羧基端区域.通过对LEAP-2基因添加EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点和对pET32a进行双酶切处理,成功构建了"pET32a-IpL-2"重组表达质粒,并转化工程茵E.coli BL21(DE3).在工程菌对数生长后期加入诱导剂IPTG、经25℃培养后,可溶性的"trxA-IpL-2"融合蛋白得到高程度的表达.Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析表明,获得了高纯度的目的蛋白. 相似文献
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对虾抗菌肽Penaeidins的研究进展 总被引：4，自引：0，他引：4
抗菌肽广泛存在于自然界中，在寄主先天性免疫机制中占有重要地位。尽管已经对其他节肢动物(包括昆虫和螯肢动物)体内的大量抗菌肽进行了研究鉴定，对甲壳动物体内分离出来的抗菌肽的研究报道却较少。Penaeidins是从南美白对虾血液中分离出来的一组抗菌肽。本文介绍了Penaeidins的结构、抗菌属性、免疫功能以及受到微生物刺激时Penaeidin基因的表达和Penaeidins的分布，并且对Penaeidins以及其他抗菌肽在水产动物疾病防治中的应用前景进行了展望。 相似文献
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抗菌肽的结构特点·作用机理及其应用前景 总被引：4，自引：0，他引：4
抗菌肽是一种广泛存在于生物界的抵抗病原微生物入侵的重要防御分子,是生物先天免疫的重要防御物质,不仅具有广谱抗菌活性和抗病毒、抗真菌、抗寄生虫及抗肿瘤等生物活性,还具有随物种适应环境而产生的结构多样性以及区别于传统抗生素杀菌机理的独特性,且不易产生耐药性,是一类极具潜力的肽类抗生素。抗菌肽对靶细胞表现出选择性,有助于设计出活性更高的新型肽类抗生素。从抗菌肽的作用机制、结构特点、新型抗菌肽分子设计、抗菌肽基因工程等方面阐述了抗菌肽研究的新进展。 相似文献
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水产动物抗菌肽研究的最新进展 总被引：2，自引：0，他引：2
张家国 《大连水产学院学报》2009,(Z1)
抗菌肽是一类具有抗菌活性的生物短肽,广泛存在于生物界中。作者综述了抗菌肽的几种类型及其作用机理,并重点介绍了水产动物抗菌肽的研究现状,探讨了抗菌肽作为饲料添加剂在水产养殖业的应用前景。 相似文献
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不同菌源诱导免疫的黄粉虫抗菌肽提取物对26种病原菌抑菌活性分析 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]探索经不同菌源诱导黄粉虫所产生的免疫物质——抗菌肽对病原菌是否存在活性差异。[方法]对饥饿后黄粉虫幼虫通过饲细菌、针刺饲真菌（放线菌）法产生诱导免疫反应,研磨、冷冻离心法获得抗菌肽提取物,采用抑菌圈法测定其对26种病原菌抑菌活性,利用三等分法划分四种类型评价抑菌活性及抑菌谱。[结果]经不同菌源诱导黄粉虫所产生的抗菌肽抑菌活性及抑菌谱上均存在明显差异。[结论]生防菌源在诱导昆虫体液免疫物质——抗菌肽表达上具有明显优势。 相似文献
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抗菌肽又称宿主防御肽,是一种具有广谱抗菌活性小肽类物质,是生物先天免疫系统的重要组成部分。抗菌肽具有抗细菌,抗真菌、抗寄生虫、抗病毒、抗癌细胞和免疫调节等功能,与抗生素作用机制不同,不易产生耐药性,有望成为抗生素替代品,在畜禽生产中应用广泛。文章综述抗菌肽作用机制及其在畜牧养殖中的应用,初步探讨抗菌肽作为抗生素替代物的应用前景。 相似文献
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抗菌肽抗细菌机理研究进展 总被引：3，自引：0，他引：3
抗菌肽是一类有望解决全球范围内抗生素耐药性问题的新型抑菌多肽。抗菌肽主要有3种抑菌机制:其一是针对细菌细胞膜作用,膜作用主要针对两种不同菌膜结构特性的细菌,革兰氏阴性菌外膜富含脂多糖,革兰氏阳性菌细胞壁富含磷壁酸,抗菌肽可靶向作用于此类细菌菌膜结构特定组分。此外,抗菌肽可抑制细菌生物被膜形成,分解已形成细菌生物被膜。抗菌肽作用于特异性酶或靶向作用于DNA产生抑菌效果,其抑制作用可抵抗细菌耐药性产生。基于抗菌肽改变菌膜结构并抑制细菌外膜及酶合成的特性,此杀菌策略已应用于抗菌药物设计。 相似文献
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抗菌肽种类繁多,分布广泛,是生命体先天性免疫应答的产物。抗菌肽的广谱抑菌、杀菌功能使其成为潜在的新型抗菌药物。近年来在我国动物生产中的应用研究表明,抗菌肽能够提高畜禽健康状况和生产性能,同时有益调节畜禽机体的免疫功能,有效预防和治疗畜禽多种疾病。抗菌肽与抗生素的对比研究表明,抗菌肽用量少、无残留。而作为新型抗菌剂开发应用之前,有些问题我们应认真考虑,尤其是抗菌肽有可能出现的细菌耐药性。 相似文献