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目的：研究Trizol RNA提取法、杭州博日吸附柱RNA提取法、Promega核酸提取仪磁珠RNA提取法、西安天隆核酸提取仪磁珠RNA提取法、Thermo核酸提取仪磁珠RNA提取法等五种不同核酸提取方法对不同含量猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）阳性样品的相对提取效率,为动物疫病监测诊断实验室核酸提取方式的选择提供技术参考。方法用五种不同核酸提取方法对4份10倍梯度稀释的PRRSV阳性血清、2份PRRSV阳性组织悬液及其离心后的上清液共8份样品同时进行核酸提取,用荧光RT-PCR方法进行检测,获取各样品PRRSV荧光RT-PCR结果的CP值,分析五种提取方式的相对提取效率。结果对合适的提取样品,磁珠提取法相对提取效率最高,吸附柱法其次,Trizol提取法相对效率较差;在三种磁珠提取法中,提取效率相差在2个CP值内,差异不明显,但以天隆磁珠提取法提取效率更高。结论预装试剂结合仪器自动化操作的磁珠法提取效果稳定,效率最高;国产仪器国产试剂提取效率不亚于进口仪器和试剂。 相似文献
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为比较不同类型核酸提取试剂盒的布鲁氏菌核酸提取效率,选取6种核酸提取试剂盒(磁珠法、柱式法各3种),分别对布鲁氏菌灭活菌液和16份临床组织样品进行核酸提取,使用荧光定量PCR方法评估提取效率。结果显示:6种试剂盒在提取10~2和10~4稀释度的布鲁氏菌灭活菌液核酸时,磁珠法的提取产物荧光定量PCR的Ct值整体低于柱式法,批内变异系数小于5%;提取临床组织样品时,2种柱式法细菌提取试剂盒能够提取全部样品的核酸,2种磁珠法细菌提取试剂盒提取了14份核酸,剩下的1种磁珠法和1种柱式法病毒提取试剂盒分别提取了12份和3份核酸。结果表明:6种试剂盒均能有效提取布鲁氏菌灭活菌液,其中磁珠法提取效率略高于柱式法;柱式法细菌DNA对临床组织样品的提取效率略高于磁珠法细菌DNA,但磁珠法和柱式法的病毒DNA提取试剂盒均不适用于临床组织样品的布鲁氏菌核酸提取。在实际操作中,应根据实验室条件、样品数量和任务紧迫性等因素,选取应用合适的试剂盒。本研究为布鲁氏菌核酸提取方法的选择提供了参考。 相似文献
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为比较不同核酸提取方法检测禽流感病毒敏感性的差异,将 H5N1禽流感抗原做10－2～10－10稀释,分别用 Trizol 法、磁珠法和膜吸附法提取上述抗原稀释度核酸模板,采用荧光 RT-PCR 对其进行评价。结果表明,在不同稀释度的抗原的检测中,3种核酸提取方法以膜吸附法提取效率最高,其依次为磁珠法、Trizol 法,经方差分析,3种核酸提取方法之间存在显著性差异（P＜0．05）。说明 3种核酸提取方法提取效率存在显著差异,核酸提取效率的高低影响禽流感病毒荧光 RT-PCR 检测的敏感性,建议实验室根据实际情况选择核酸提取的方法。 相似文献
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为比较不同核酸提取试剂盒对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）核酸的提取效率,使用国家标准物质“猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲经典株核酸标准物质”作为模拟样品,分别使用试剂盒A、B、C（磁珠法）以及试剂盒D、E（柱式法）等5种核酸提取试剂盒进行核酸提取,然后通过荧光RT-PCR和数字RT-PCR方法评估提取效率,并分析不同基质对提取效率的影响。结果显示：5种试剂盒均能有效提取PRRSV RNA,其中磁珠法的提取效率高于柱式法;试剂盒B和C对PRRSV RNA的提取效率较高;基质会对提取效率造成影响,精液和抗凝血对试剂盒提取效率的影响较大。综上,试剂盒B、C均可适用于猪繁殖与呼吸综合征临床样品的核酸提取。实际操作中,应根据实验室条件、样品数量、样品类型和时间要求等因素,选择应用合适的提取试剂盒。 相似文献
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快速提取病毒核酸用于PCR或RT-PCR 总被引：4，自引：0，他引：4
PCR或RT—PCR因其操作简便快速、灵敏度高已越来越广泛的应用到病毒核酸的检测中，但其检测效率在很大程度上受到核酸提取速度和质量的影响。经典的病毒核酸提取方法主要包括变性剂裂解、蛋白酶K处理、有机溶剂抽提、乙醇或异戊醇沉淀等操作。众多的步骤和多次的转移操作以及在每个步骤上消耗的时间往往会降低核酸提取的效率。本文介绍了一种改进的异硫氰酸胍法，经多次提取鸭瘟疱疹病毒（Duck plague herpesvirus，DPV）的基因组DNA和鸭肝炎病毒（Duck hepatitis virus，DHV）的基因组RNA，显示出该法具有简单快速、安全可靠、低成本和高效率的特点。 相似文献
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对饲养在温室内的感染柑橘黄龙病甜橙树上的柑橘木虱采用三种方法进行单头核酸提取,通过超微量核酸蛋白分析仪和细菌通用引物27F1492R常规PCR检测核酸质量,利用柑橘黄龙病菌特异性引物OI1/OI2c常规PCR和以r-rplLAs/f-rplLAs引物进行荧光定量qPCR检测。研究结果表明,三种方法均可以成功提取到单头柑橘木虱总核酸且均能检测到黄龙病菌,李菁方法时间短,步骤简便,提取的核酸浓度较高,但核酸质量较低;氯仿-异戊醇抽提方法步骤较多、历时长,提取核酸浓度较低,但核酸质量较高;试剂盒方法简便快速,提取的核酸浓度高,核酸质量一般,成本较高。三种方法各有优缺点,可根据后续分子实验具体要求选择合适的提取方法。本文为有效的检测柑橘木虱体内黄龙病菌提供了技术基础,也可以推广到其他微小昆虫的内生细菌等相关基因研究领域。 相似文献
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为确定一种稳定高效的鸡血液DNA提取方法,满足基因组检测对DNA的要求,研究应用磁珠法、酚-氯仿法和试剂盒法。分别对抗凝血和凝血状态的鸡血液样品进行基因组DNA提取,通过超分光光度计和1%琼脂糖凝胶电泳评价所获得的DNA质量,并对三种提取方法所需成本进行估算和比较。结果显示：三种方法均能从两种不同状态血液样本中提取出基因组DNA,酚-氯仿法最为经济,但耗时长且需要使用危险化学品,磁珠法与试剂盒法具有耗时短和环保的优点,且磁珠法较试剂盒法更经济。研究表明磁珠法使用的试剂量少、操作简单、耗时短、日提取样本数目远大于其他两种方法,是三种方法中最为快捷的方法,可以满足实际生产中大批量鸡血液基因组DNA提取的要求。 相似文献
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运用硫酸铵法、聚乙二醇(PEG)法、冷乙醇法对卵黄抗体进行提取,并使用间接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定所得卵黄抗体的特异性,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测其纯度,用Nanodrop2000测其蛋白浓度并计算提取量,比较三种方法所得抗体的特异性、纯度和提取量。结果显示,三种提取方法所得卵黄抗体特异性高低依次为硫酸铵法、冷乙醇法、PEG法;纯度高低依次为硫酸铵法、冷乙醇法、PEG法;三种方法的提取量高低依次为PEG法、硫酸铵法、冷乙醇法。经综合分析与评价,硫酸铵法的抗体特异性较好、纯度较高、提取量也较高,且其操作方法相对简便,是比较具有优势的提取方法。 相似文献
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《畜牧与饲料科学》2017,(4)
为提高新城疫病毒荧光RT-PCR检测灵敏度,对柱式提取法提取新城疫病毒核酸的裂解液(异硫氰酸胍)、洗液1(盐酸胍)浓度进行了优化;探索Triton-100和EDTA对病毒裂解效果的影响;采用荧光RT-PCR检测方法比较优化后的柱式提取法和Trizol经典法提取新城疫病毒核酸的效率。结果显示,柱式提取法提取新城疫核酸裂解液(异硫氰酸胍)的最佳浓度为5 mol/L,洗液1(盐酸胍)最佳浓度为5.5 mol/L;将20 mmol/L EDTA加入裂解液对新城疫病毒核酸的提取有抑制作用,将0.8%Triton-100加入裂解液能提高核酸提取效率;优化后的柱式提取法比经典Trizol提取法提取效率高。该试验优化了适合从新城疫病毒中高效提取核酸的方法。 相似文献
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从茶叶中提取茶多酚的方法主要有离子沉淀萃取法、有机溶剂萃取法、树脂吸收法、超声波提取法等,但应用最广的提取方法是离子沉淀萃取法和有机溶剂萃取法。其中盐离子沉淀提取法是生产高纯度茶多酚的一种廉价方法,该法选择性强,产品纯度高,无须使用大量的氯仿等有机试剂,成本低。 相似文献
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目前,在基层兽医实验室中实验人员常用实时荧光PCR方法对动物疾病作定性诊断,而病毒核酸提取方法的选择影响荧光PCR实验结果的准确性和效率。本实验选择屠宰检疫过程中较常见的细菌性病原猪丹毒杆菌和病毒性病原猪圆环2型病毒作为研究对象,对热提取法和离心柱吸附法两种核酸提取效果的准确性、稳定性和差异性作对比,在实验人员进行实时荧光PCR实验时选择合适DNA病原提取方法有一定参考意义。 相似文献
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为比较猪制品中非洲猪瘟病毒（ASFV）核酸提取效率,将非洲猪瘟假病毒掺入新鲜猪肉、香肠、血粉试验材料,制备相关模拟感染样品,然后采用核酸免抽提、柱式核酸提取及磁珠吸附核酸提取方法提取ASFV核酸,计算ASFV核酸回收率,评估提取效率。结果显示：猪制品模拟感染样品中,ASFV核酸在上清和沉淀中均被检出,且上清中的检出量高于沉淀;对于香肠模拟感染样品上清,3种核酸提取方法均适合,但以柱式提取方法为佳,病毒回收率高达82.8%;对于新鲜猪肉模拟感染样品上清,以磁珠吸附核酸提取方法为佳,病毒回收率为20.9%;对于血粉模拟感染样品上清,以柱式核酸提取方法为佳,病毒回收率为10.2%。本研究为不同猪制品中ASFV核酸提取提供了参考。 相似文献
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为评价不同检测试剂盒对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)的检测性能,以及不同提取方法对ASFV核酸的提取效率,本研究以国家标准物质“ASFV B646L基因质粒标准物质”作为模拟样品,通过荧光定量PCR检测,比较扩增曲线、Ct值等指标,分析了4个厂家的5种试剂盒的敏感性、重复性及反应耗时等检测性能,同时比较了磁珠法与柱式法等2种核酸提取方法的提取效率。结果显示：5种试剂盒均能有效检测出不同浓度的ASFV B646L基因质粒标准物质,不同的试剂盒最低检测限不同,最低的试剂盒为5.8×10-1 copies/μL,线性关系最优的试剂盒R~2=0.997,各试剂盒实际反应时间与理论时间均有差异。2种提取方法均可有效提取ASFV B646L基因质粒标准物质,其中柱式法的提取效率高于磁珠法,但柱式法的离散度大于磁珠法。综上,4个厂家的5种试剂盒及柱式法与磁珠法均可使用ASFV B646L标准物质作为基准进行试剂盒性能及提取效率评价。在实际检测中,应根据具体情况选择合适的检测试剂盒及核酸提取方法。 相似文献
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为筛选从猪精液中提取微量蓝耳病病毒(PRRSV)核酸的有效方法,将蓝耳病(变异株)弱毒苗稀释成不同滴度(TCID50/mL)的病毒液,与健康猪常温精液混合作用。分别用Trizol法、磁珠法、离心柱法提取含毒精液中的病毒RNA,用荧光RT-PCR试验检测病毒RNA,结果表明,当精液中病毒滴度高于0.1 TCID50/mL时,3种病毒RNA提取方法均可检出。离心柱法对猪精液中PRRSV核酸提取灵敏度最高,可检出0.01 TCID50/mL滴度的病毒,稳定性好。 相似文献
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磁珠法核酸自动提取仪可以简单、快速、高效和经济地实现各种标本核酸的自动提取。本文概述了核酸自动提取仪的原理及分类,磁珠法核酸自动提取仪原理、分类、特点及其在分子生物学领域的应用。 相似文献