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1.
中国农科院哈尔滨兽医研究所的科研人员利用现代基因工程技术手段,人工构建出非产肠毒素性且具有K88 K99两种保护性抗原的大肠杆菌菌株,通过接种于适宜培养基发酵高密度培养,成功试制出了新生猪腹泻大肠杆菌K88 K99双价基因工程疫 相似文献
2.
根据GenBank中发表的E.coli K88、K99基因序列,分别设计合成1对引物.利用PCR技术,以大肠杆菌C83907和C83644的质粒为模板分别扩增不含信号肽的K88及K99基因.通过分离、纯化、限制性核酸内切酶酶切,连接和转化,构建了含K88-K99串联表达载体的重组菌株BL21(DE3)(pETK88CK99).结果显示,经酶切,PCR鉴定和DNA序列分析,证实了构建的重组质粒pETK88CK99中含有K88K99融合基因,且基因序列和阅读框架均正确.经过SDS-PAGE分析,串联表达蛋白含量占菌体蛋白的40%左右,经Western blotting检测,该串联表达蛋白能被大肠杆菌K88、K99标准血清识别.结果表明,构建的重组菌株可以作为预防新生仔猪大肠杆菌性腹泻基因工程疫苗的候选菌株. 相似文献
3.
采用加热法和盐析法对大肠杆菌K88、K99、987P纤毛抗原进行了提取、纯化,并通过SDS—PAGE凝胶电泳对提纯效果进行了检验。将纯化的纤毛抗原免疫家兔,制备了K88、K99、987P纤毛抗原抗血清,用琼脂扩散试验检测了抗血清的效价。结果表明,纯化的K88、K99、987P纤毛为高纯度的纤毛抗原,其分子量分别约为26、18、20kD。K88、K99、987P抗血清的琼扩效价依次为1：32、1：32、1：128,且特异性高。本研究为K88、K99、987P纤毛抗原定量检测及产纤毛大肠杆菌菌株的鉴定奠定了基础。 相似文献
4.
重组大肠杆菌K88ab和K99蛋白制备的鸡卵黄抗体的效力评价 总被引：1，自引：0，他引：1
为探索以重组大肠杆菌K88ab和K99蛋白为免疫原制备鸡卵黄抗体的可行性,本研究利用基因工程技术,在大肠杆菌中高效表达重组K88ab和K99蛋白。分别以重组蛋白和提取的天然菌毛为免疫原制备抗K88ab和K99菌毛的鸡卵黄抗体,并对抗体效价、特异性以及抗体的预防和治疗效果进行了检测和比较。试管凝集反应结果显示,以重组蛋白为免疫原制备的鸡卵黄抗体效价最高可达1∶2 560,与用天然菌毛为免疫原制备的鸡卵黄抗体的效价基本一致。该抗体分别与K88ab+和K99+大肠杆菌发生特异性凝集,并能分别有效抑制K88ab+和K99+大肠杆菌对新生仔猪肠上皮细胞的吸附。临床应用结果显示,本实验制备的卵黄抗体对仔猪黄痢和仔猪白痢的预防有效率为100%,保护率为91%;治疗有效率为100%,治愈率为87%。实验结果表明该卵黄抗体对仔猪黄痢和仔猪白痢具有良好的预防和治疗效果。 相似文献
5.
仔猪大肠杆菌K88-ST1-LTB三价基因工程灭活疫苗的应用实验 总被引：3，自引：2，他引：1
对妊娠14~16周母猪颈部肌肉注射仔猪大肠杆菌K88-ST1-LTB三价基因工程灭活疫苗(以下简称三价灭活苗)的结果表明:三价灭活苗可以大大降低仔猪大肠杆菌的发病率和死亡率,差异极显著(P<0.01);对仔猪生长安全、无副作用;三价灭活苗的使用效果明显优于仔猪大肠杆菌K88-K99双价基因工程灭活疫苗(以下简称双价灭活苗); 疫苗现场应用免疫保护率明显高于双价灭活苗,差异极显著(P<0.01)。 相似文献
6.
对妊娠14－16周母猪颈部肌肉注射仔猪大肠杆菌K88－ST1－LTB三价基因工程灭活疫苗（以下简称三价灭活苗）的结果表明：三价灭活苗可以大大降低仔猪大肠杆菌的发病率和死亡率，差异极显著（P＜0．01）；对仔猪生长安全、无副作用；三价灭活苗的使用效果明显优于仔猪大肠杆菌K88－K99双价基因工程灭活疫苗（以下简称双价灭活苗）；疫苗现场应用免疫保护率明显高于双价灭活苗，差异极显著（P＜0．01）。 相似文献
7.
用疫苗和抗血清预防猪大肠杆菌病 总被引：1，自引：0，他引：1
长沙县某集约化猪场为预防乳猪黄痢白痢,于母猪产前3～4周颈部皮下注射K88 K99 987P大肠杆菌疫菌。其血中的循环抗体经乳腺富集,后可通过初乳和常乳传递给乳猪,乳猪获得被动免疫。但致病的大肠杆菌有多种血清型且有变异,现场的大肠杆菌血清型可能与疫苗中的血清型不对号或不全部对号, 相似文献
8.
乐牧 《青海畜牧兽医杂志》1985,(5)
羔羊、犊牛腹泻症与仔猪黄痢病为目前中外养殖业中重要病害之一,其死亡率可占30％左右。中国农科院分子生物学研究室,通过分离、纯化带有K88~ 、K99~ 基因的大质粒去氧核糖核酸,进行酶切,基因定位后,植入受体进行多种组合的克隆,构成可以防治幼畜腹泻的K88~ 、K99~ 双价基因工程疫苗菌,无肠毒素基因,能制成活菌苗,安 相似文献
9.
本研究以从断奶仔猪肠道分离的益生菌为试验菌株,将大肠杆菌K88和益生菌接种到体外培养的猪小肠上皮细胞(intestinal porcine epithelial cell-1,IPEC-1)中,测定培养2.5h上清液中的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,同时将益生菌和大肠杆菌K88体外混合培养2.5h,进行平板计数,统计大肠杆菌K88菌数的变化,筛选出可以抑制大肠杆菌K88的益生菌。试验结果显示,干酪乳杆菌和凝结芽孢杆菌能显著降低IPEC-1培养上清液中的LDH活性(P<0.05),降低大肠杆菌K88对细胞的损伤;凝结芽孢杆菌能降低DMEM培养基中大肠杆菌K88的生长速度,结合模拟制粒过程及胃肠道环境的耐高温、耐酸及耐胆盐研究进行综合分析,该凝结芽胞杆菌对大肠杆菌K88有较好的抑制作用且具有良好的耐高温、耐酸及耐胆盐性能,具有作为微生态制剂菌株的应用潜力。本试验建立了能够抑制大肠杆菌K88的益生菌体外筛选技术模型。 相似文献
10.
1疫苗预防
妊娠母猪于产前20～30天,每头猪后海穴注射猪传染性胃肠炎-猪流行性腹泻二联灭活疫苗4毫升,新生仔猪通过吃初乳获得被动免疫,可预防病毒性腹泻。妊娠母猪于产前40天和15天各肌肉注射仔猪大肠杆菌K88、K99、987P三价灭活疫苗1次, 相似文献
11.
经碱变性酸酚法分离纯化的pMV99重组质粒,用SmaⅠ和BamⅢ消化,琼脂糖凝胶电泳分离,冻融法回收,得到4.2Kb的K99基因片段。该片通过DNA缺口翻译技术标记上α-32p,以此为探针,用菌落原位杂交对K99~+毒素源性大肠杆菌(ETEC)进行鉴定。探针与标准的K99~+ETEC杂交为阳性。从腹泻仔猪和犊牛离到ETEC。玻片凝集和反向间接血凝试验检测为K99抗原阳性。与探针杂交物均为阳性。K99基因探针与携带K88、987P,CFA/Ⅰ、CFA/Ⅱ菌毛的大肠杆菌杂交都呈阴性。以上试验表明,以DNA杂交技术测定K99菌毛抗原,结果可靠,特异性强,适于ETEC菌毛的鉴定。 相似文献
12.
选用4株带有K88、K99、987P、F41粘附素抗原的产肠毒素性大肠杆菌,分别接种于BBL、Minca、Slanetz和Minca培养基进行培养,将培养物加热提取粘附素抗原后,加入油佐剂制成四价亚单位疫苗。经成品检验合格后分别免疫小鼠和怀孕母猪,同时监测怀孕母猪抗体。最后1次免疫后15 d,分别用同源ETEC确定的攻毒剂量攻击。结果显示,经2次免疫后,K88、K99、987P、F41对小鼠的免疫保护率与1次免疫没有显著差异(P>0.05);对仔猪,1次免疫跟2次免疫均可显著地降低腹泻指数(P<0.05),2次免疫与1次免疫没有显著差异(P>0.05)。怀孕母猪免疫1周后(产前23 d)抗体开始上升,第2周(产前16 d)达到高峰。2次免疫后抗体迅速回升,第4周(产前2 d)达到最高峰,产后2 d抗体大幅度下跌,几近免疫前水平。二免母猪所产仔猪发病率明显低于一免母猪(P<0.05)。攻毒保护试验和抗体消长规律的结果表明,制备的仔猪大肠杆菌病K88-K99-987P-F41四价亚单位疫苗具有良好的免疫原性,能有效预防仔猪大肠杆菌病的发生。 相似文献
13.
仔猪黄痢主要危害1月龄以内的新生仔猪,尤其是1周龄内仔猪的发病率和死亡率最高,多以急性、水样腹泻为特征,预防仔猪黄痢最有效的措施是采用疫苗对怀孕母猪免疫接种,新生仔猪通过吮吸母猪初乳获得被动免疫。本疫苗是通过分别带有K88、K99、987P纤毛抗原的大肠埃希氏菌,接种于适 相似文献
14.
大肠杆菌K99菌毛抗原的制备及其免疫抗体效价的测定 总被引：3，自引：0，他引：3
肠毒素型大肠杆菌 (Enterotoxigenic E.coli,ETEC)是幼龄动物 (仔猪、犊牛、羔羊等 )腹泻中常见而且重要的致病菌之一 ,此类大肠杆菌能借助于其所产生的菌毛抗原粘附于动物的小肠黏膜上 ,定居并产生肠毒素 ,从而呈现出致病作用。当大肠杆菌 K99菌毛粘附于绵羊红细胞上时 ,能使红细胞发生凝集 ,且不被 D-甘露糖抑制 ,系一种甘露糖低抗血凝反应 (MRHA) ,菌毛的MRHA可被相应的抗体抑制 ,故又可用甘露糖抵抗血凝抑制反应 (MRHI)来对其作出确诊[1] 。目前在各种动物中已发现并展开研究的大肠杆菌菌毛抗原主要有 :K88(F4)、K99(F5)、987… 相似文献
15.
为了快速检测和鉴定产肠毒素大肠杆菌菌毛(K88和K99)基因,本研究设计合成了针对K88、K99的2对特异性引物,对扩增条件进行优化,建立了检测K88和K99的双重PCR方法。该方法对K88、K99基因的扩增产物大小分别为237和314 bp;最终确定dNTP终浓度0.4 mmol/L,K88、K99的引物终浓度均为25 μmol/L,退火温度为52℃。试验结果表明,该方法具有良好的灵敏性和特异性。用所建立的双重PCR方法对实验室分离的23株大肠杆菌进行检测,结果显示,K88单重PCR阳性2株,K99单重PCR阳性3株,K88和K99双重PCR阳性5株。本研究建立的双重PCR检测方法为致幼畜腹泻产肠毒素大肠杆菌的快速准确检测提供了方法。 相似文献
16.
1日常防制措施1.1妊娠母猪饲养管理疫苗的接种常选用以下几种疫苗。仔猪黄痢油剂苗,母猪临产前20-40天,肌肉注射,对仔猪黄痢的预防效果较好。大肠杆菌遗传工程活菌苗,母猪临产前20-25天口服,对仔猪黄白痢均有效。仔猪腹泻基因工程K88、K99双价灭活苗,母猪产前21天左右耳根皮下注射,主要预防仔猪黄痢。仔猪大肠埃希氏菌病三价灭活疫苗K88、K99、K987P,母猪产前15天、40天各肌肉注射一次,预防仔猪黄白痢。 相似文献
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史同瑞 《畜牧兽医科技信息》2003,(2)
牛大肠杆菌是引起犊牛腹泻的主要病原菌,该病危害严重,经济损失较大。最近,埃及学者研制了牛大肠杆菌K99疫苗,并对其免疫效果作了评价。试验采集119头犊水牛的粪便样品进行细菌学检查,这些犊牛是99头免疫母牛和20头非免疫母牛的子代,粪样为1～30日龄健康或腹泻犊牛的直肠拭子。由于大肠杆菌是肠道致病性革兰氏阴性菌中 相似文献
18.
仔猪黄白痢一直严重影响着养猪业的发展,因而在防治上普遍受到养猪场、户的重视,应用大肠杆菌基因工程双价K88、K99灭活苗结合葸诺沙星注射怀孕母猪,预防仔猪黄、白痢取得了较好的预防效果。 相似文献
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引起仔猪黄痢、白痢的埃希氏大肠杆菌荚膜抗原主要有K_(88)、K_(99)、987P、F_(41)四种,而K_(88)、K_(99)抗原型的大肠杆菌最为常见,也是引起仔猪黄、白痢主要血清型的大肠杆菌.为了探讨大肠杆菌K_(88)、K_(99)双价基因工程冻干菌和抗痢宝对仔猪黄、白痢病预防效果,作了本试验. 相似文献
20.
采用高密度发酵和普通深层通气两种方法培养含K88、K99、987P、F41菌毛抗原的四株猪埃希氏大肠杆菌,对其培养液进行活菌数、OD值、pH值、效价的测定。实验结果表明,运用高密度发酵方法培养,各菌活菌数可达4.1×1010~4.9×1010CFU/mL,效价为211~213;运用普通深层通气方法培养,各菌活菌数为0.51×1010~0.59×1010CFU/mL,效价为24~25,可选择高密度发酵方法替代普通深层通气方法培养,用于制备猪埃希氏大肠杆菌K88、K99、987P、F41四价菌毛提纯苗。 相似文献