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分别用碳二亚胺(EDC)法和生理学法将半抗原青霉素G与BSA、OVA偶联,合成4种抗原分别为PEN-EDC-BSA、PEN-BSA、PEN-EDC-OVA和PEN-OVA。用PEN-EDC-BSA与PEN-BSA分别免疫兔获抗青霉素G多克隆抗体,间接ELISA法检测结果表明使用生理学偶联方法合成的结合抗原其免疫原性好于EDC法。免疫PEN-BSA组的兔抗血清效价达到1∶204800。用正辛酸-饱和硫酸铵法纯化抗血清,IgG的最高浓度为27.42mg/mL。 相似文献
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为探讨展青霉素（patulin,PAT）不同抗原合成方法对完全抗原制备及抗体产生的影响,本试验利用琥珀酸酐联合活泼酯法,分别制备免疫原PAT-BSA和包被原PAT-OVA。为提高PAT与偶联蛋白的结合率,尝试将BSA修饰为EDA-BSA后与PAT进行偶联,并对比2种偶联方法制备的完全抗原免疫动物后抗血清的效价水平。同时利用琼脂糖凝胶电泳、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、凝胶渗透色谱多种方法分析鉴定偶联结果,为PAT单克隆抗体的制备及免疫学检测方法的建立奠定了基础。 相似文献
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本试验旨在建立N-羟乙酰神经氨酸(Neu5Gc) IgY抗体的制备及鉴定方法。通过碳二亚胺法将Neu5Gc和载体蛋白进行偶联,制备Neu5Gc人工完全抗原,用制备的完全抗原免疫海兰褐蛋鸡制备Neu5Gc-IgY抗体,经ELISA检测分析鉴定抗体活性。经紫外光谱扫描、琼脂糖凝胶电泳法初步判断Neu5Gc人工完全抗原制备成功,获得的特异性Neu5Gc-IgY抗体经ELISA检测分析,首次免疫后第7天产生抗体,抗体效价呈动态变化,随着免疫次数的增多,血清效价和抗体效价逐步上升,至初次免疫后63 d达到高峰,效价达1:10 000,停止加强免疫后抗体效价可持续一个月左右,1号鸡产生的IgY抗体具有很好的抗原竞争活性,获得竞争回归方程y=30.28x+16.923,线性系数R2=0.9581。以上结果表明,本试验制备的Neu5Gc IgY抗体取得了理想效果,为红肉、牛奶及肿瘤组织中Neu5Gc的检测奠定了基础。 相似文献
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《中国动物传染病学报》2015,(3)
应用重氮化方法制备了磺胺氯吡嗪钠(sulfachloropyrazine sodium,SPZ)完全抗原SPZ-OVA,将成功偶联的人工全抗原(SPZ-OVA)免疫BALB/c小鼠,免疫4次后,经间接ELISA检测,1号小鼠血清抗体效价达到1:6.4×104。取该小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合。利用ELISA方法对融合后的杂交瘤细胞上清进行检测,筛选出能够稳定分泌抗体的细胞株:D9。将细胞株D9扩大培养后,经腹腔注射小鼠使其产生腹水。腹水单抗经纯化后,通过间接竞争ELISA对该单克隆抗体的效价、半数抑制浓度以及特异性进行检测。结果表明,所制备的单克隆抗体效价为1:4×105,半数抑制浓度为326 ng/m L,特异性良好。 相似文献
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三聚氰胺抗原合成及其多克隆抗体的制备 总被引：1，自引：0，他引：1
以2-氯-4,6-二氨基-1,3,5-三嗪为原料,强碱条件下与3-巯基丙酸反应,制备三聚氰胺半抗原并经质谱和红外鉴定;应用碳二亚胺法将半抗原与BSA和OVA偶联制备三聚氰胺免疫原和包被原,完全抗原经紫外扫描鉴定偶联成功,偶联比分别为16:1和10:1,通过免疫新西兰大白兔成功制备三聚氰胺多克隆抗体,抗体效价可达1:128000以上。本研究为三聚氰胺人工抗原的制备提供了有效途径,为三聚氰胺免疫检测方法的研发奠定了基础。 相似文献
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为探讨用不同方法制备的抗原对抗体效价的影响以及抗体之间的交叉反应 ,采用 3种不同方法制备的抗原分别免疫 BAL B/ c小鼠 ,制备出抗青霉素酰化酶 α亚基、β亚基和抗头孢菌素酰化酶α亚基、β亚基 4种抗体 ,测定了它们的效价 ;同时还比较了用同一种方法制备的抗原免疫小鼠后制作这两类抗体的效价以及上述 4种抗体之间对应抗原的交叉反应。结果表明 ,用割胶法制备的抗原免疫小鼠后所得抗体效价较高 ;同样用割胶法制备的抗原免疫小鼠后所得的两类抗体效价无显著差异 ;在交叉反应测试中 ,抗头孢菌素酰化酶抗体也能识别青霉素酰化酶 ,但抗青霉素酰化酶抗体却几乎不能识别头孢菌素酰化酶 ,即抗头孢菌素酰化酶抗体更为活跃 ,而抗青霉素酰化酶抗体则更为专一。同类抗体对应抗原 2个亚基之间的交叉反应说明其互相结合部位结构的类似 ,同时也说明只有进一步制作单克隆抗体才能筛选出特异性强的抗体 相似文献
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采用重氮化法,将半抗原副品红(Pararosaniline,PA)分别与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,反应得到免疫抗原和包被抗原,其偶联最佳结合比分别为8.8∶1,12.7∶1,6.9∶1,经紫外扫描光谱和蛋白电泳鉴定得到全抗原。用制备的抗原乳化后免疫小鼠获得了效价较高的多克隆抗体。为进一步制备抗孔雀石绿单克隆抗体打下基础。 相似文献
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A DNA vaccine (pVAX1-TgADF) encoding Toxoplasma gondii actin depolymerizing factor (ADF) gene was constructed and the immune response and protective efficacy of this vaccine against homologous challenge in BALB/c mice were evaluated. High titers of specific antibody and increases in the percentage of CD4(+) and CD8(+) T lymphocyte cells were observed from BALB/c mice vaccinated with pVAX1-TgADF (P<0.05), when PBS group was used as control. The survival time of BALB/c mice in pVAX1-TgADF group was longer than those in control groups. The numbers of brain cysts in the experimental BALB/c mice immunized with pVAX1-TgADF reduced significantly compared with those in PBS group (P<0.05), and the rate of reduction could reach to around 42.8%. These results suggested that the DNA vaccine pVAX1-TgADF could generate specific humoral and cellular immune responses, prolong survival times, and reduce brain cysts load against T. gondii infection in BALB/c mice. 相似文献
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试验旨在通过大肠杆菌表达系统表达鼠源重组CD40L蛋白,探讨其对河豚毒素（tetrodotoxin,TTX）人工完全抗原在免疫BALB/c小鼠过程中的免疫增强作用。用Trizol试剂提取BALB/c小鼠脾脏总RNA并反转录成cDNA,根据CD40L CDS区设计引物,PCR扩增目的基因,构建pGEX4T-1重组载体,进行原核表达,并纯化重组CD40L蛋白;根据曼尼希反应原理,用甲醛法制备TTX免疫原TTX-BSA和检测原TTX-OVA;以人工重组蛋白CD40L佐剂组为试验组,弗氏佐剂组作为对照组,免疫BALB/c小鼠,用ELISA方法结合SPSS 19.0软件分析各组免疫效果,探讨重组CD40L蛋白在TTX-BSA免疫过程中对免疫效果的影响。结果显示,本试验成功扩增了783 bp的CD40L目的基因,原核表达并纯化了融合GST标签的55 ku鼠源CD40L重组蛋白;与人工制备的TTX-BSA协同免疫小鼠试验结果显示,在免疫初期与弗氏佐剂相比,CD40L具有极显著的免疫增强效果（P<0.01）。综上所述,重组蛋白CD40L与TTX-BSA完全抗原协同免疫小鼠,在免疫初期CD40L具有增强机体对半抗原的应答强度的作用,为进一步开发适于小分子半抗原抗体高效制备的免疫增强佐剂奠定基础。 相似文献
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The aim of this study was to evaluate the immune responses of a SAG1 and MIC3 vaccine cocktail in BALB/c mice. Ninety-six BALB/c mice were randomly divided into eight groups, including three plasmid DNA vaccine groups (pcDNA-MIC3, pcDNA-SAG1, pcDNA-MIC3+pcDNA-SAG1), three recombinant pseudotype baculovirus vaccine groups (BV-G-MIC3, BV-G-SAG1, BV-G-SAG1+BV-G-MIC3) and two control groups (PBS and BV-G-EGFP). All groups were immunized intramuscularly twice at three-week intervals. The production of anti-Toxoplasma gondii lysate antigen (TLA) antibodies, lymphoproliferation, levels of IFN-γ, IL-4 and IL-10 and the survival time were monitored after vaccination. The results showed that immunization of BALB/c mice with MIC3 and SAG1 vaccines stimulated both the cellular and humoral immune responses with the production of anti-T. gondii TLA antibodies. The vaccine cocktails of pcDNA-MIC3+pcDNA-SAG1 or BV-G-SAG1+BV-G-MIC3 induced significantly higher immunogenicity than a single-gene vaccine (P<0.05). Splenocytes from the immunized mice significantly proliferated in response to the TLA and released interferon (IFN)-γ (P<0.05). However, the levels of IL-4 and IL-10 in the sera of the immunized mice were not significantly different from those of the controls (P>0.05). Immunization with the vaccine cocktail (BV-G-SAG1+BV-G-MIC3) in mice significantly prolonged survival (50%; P<0.05) against a lethal challenge of T. gondii (RH tachyzoites), while all mice in the other immunized groups and control groups died within 20 and 4 days post-infection, respectively. Furthermore, the recombinant pseudotype baculovirus vaccines induced better immunogenicity than the plasmid DNA vaccines (P<0.05). These results suggest that an excellent vector-mediated vaccine cocktail strategy might be used to develop a new generation of vaccines against T. gondii infection. 相似文献
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小鼠对猪囊虫抗原基因TS76的免疫应答 总被引：3，自引：0，他引：3
将猪囊虫抗原基因 TS76的真核表达型质粒 VTS76单独或与 p UC18联合肌肉免疫注射于 BAL B/ c小鼠 ,以MTT比色法检测小鼠脾淋巴细胞 Con A刺激的增殖反应及 IL - 2的诱生活性 ,EL ISA方法检测免疫小鼠 Ig G总量和特异性抗体水平 ,常规法检测外周血免疫细胞数量的动态变化。结果发现 ,VTS76免疫小鼠各项细胞和体液免疫应答反应指数均比空白对照组小鼠显著提高 ;联合免疫组小鼠的细胞免疫应答和体液免疫应答反应指数均比 VTS76小鼠提高。由此可见 ,以 VTS76免疫小鼠可诱导其特异性细胞和体液免疫反应 ,而 p UC18又明显提高了 VTS76免疫小鼠的免疫应答水平 ,具有显著的免疫增强作用 相似文献
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为研究日本血吸虫凋亡蛋白抑制因子（inhibitor of apoptosis protein of Schistosoma japonicum,SjIAP）重组蛋白诱导BALB/c小鼠的免疫保护效果,利用PCR技术扩增SjIAP基因,构建重组表达质粒pET-28a（＋）-SjIAP,诱导表达重组SjIAP蛋白,并利用重组蛋白制备兔源多克隆抗体血清。然后,选用SjIAP重组蛋白免疫BALB/c小鼠,利用ELISA检测免疫小鼠血清中的特异性抗体水平,以及免疫小鼠脾脏淋巴细胞在SjIAP重组蛋白刺激后产生的细胞因子水平。强化免疫后,将小鼠进行血吸虫尾蚴攻虫试验,感染38 d,进行剖杀,计算虫体减虫率及肝脏减卵率。Western blot结果表明本研究制备的兔源多抗血清能特异性识别SjIAP重组蛋白。ELISA检测表明免疫SjIAP重组蛋白可诱导较高水平的IgG及IgG亚型（IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3）抗体和IFN-γ、IL-2及IL-4细胞因子。动物试验表明,免疫SjIAP重组蛋白的小鼠与PBS组相比分别获得了31.5%的减虫率和37.2%的肝脏减卵率。免疫SjIAP重组蛋白能诱导小鼠获得一定减虫和减卵保护效果,提示血吸虫凋亡蛋白抑制因子可作为抗血吸虫病的疫苗候选分子。 相似文献
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为制备抗东方马脑炎病毒(EEEV)结构蛋白E2的单克隆抗体(MAb)并鉴定其抗原表位,本研究以Bac-to-Bac真核表达系统表达EEEV E2蛋白,纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合.以原核表达载体pET-30a表达并纯化的EEEV E2蛋白作为包被抗原建立间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞,获得4株稳定分泌抗EEEV E2蛋白MAbs的杂交瘤细胞株,分别命名为6F3、6F11、7C11、8B11.Western blot与间接免疫荧光试验结果表明,获得的4株MAbs均与EEEV呈阳性反应,而与西方马脑炎病毒、乙型脑炎病毒以及登革热病毒1型～4型呈阴性反应.利用部分重叠的原核表达的短肽对E2蛋白抗原表位进行鉴定,初步确定MAb 6F11、7C11和8B11识别的抗原表位均为E-33 (321EGLEYTWGNHPPKRVW336),而MAb 6F3无短肽与其反应,推测可能为构象表位.本研究结果为建立EEEV型特异性检测方法、研究E2蛋白结构功能及该病的进一步防制奠定了基础. 相似文献
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用混合酸酐法将莱克多巴胺(Rac)与匙孔蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)偶联,经紫外光谱扫描确定偶联成功,测得偶联物Rac-KLH浓度为3.6 mg/mL,Rac-BSA浓度为6.2 mg/mL。以偶联物Rac-KLH作为免疫原,免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/O-Ag-14进行融合。以Rac-BSA作为包被抗原,经间接ELISA筛选出阳性细胞株,再用有限稀释法进行多次亚克隆,获得稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株1D9、1F3、2C11、5C3、3A10、4A8、6B7、6D5、7C11、7D3。其中单克隆抗体5C3和3A10间接ELISA效价1∶500 000,对莱克多巴胺的半数阻断浓度(IC50)均为3.98 ng/mL,对盐酸克伦特罗和沙丁醇胺的IC50均大于2 000 ng/mL;对盐酸克伦特罗和沙丁醇胺的交叉反应率均小于0.2%。间接竞争ELISA检测莱克多巴胺在0.5～100 ng/mL范围内为线性分布,确定的最低检测限为0.5 ng/mL。 相似文献
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Igarashi I Asaba U Xuan X Omata Y Saito A Nagasawa H Fujisaki K Suzuki N Iwakura Y Mikami T 《The Journal of veterinary medical science / the Japanese Society of Veterinary Science》2000,62(7):717-723
The surface proteins of Babesia rodhaini have previously been shown to induce a high degree of protective immunity. In the present study, one of those proteins, B. rodhaini antigen p26 was expressed in Escherichia coli and in insect cells infected with a recombinant baculovirus. These proteins were recognized by immune serum from a drug-cured BALB/c mouse. While BALB/c mice immunized with both recombinant antigens and Freund's adjuvants showed 40-100% survival rate against challenge infection with B. rodhaini, saponin failed to induce protection, although significant levels of B. rodhaini-specific antibodies were produced in both immunized mice (1:1,000-2,000 by indirect immunofluorescent antibody test). The immunization of IFN-gamma-deficient mice with the recombinant proteins was not protective against B. rodhaini infection, indicating that IFN-gamma is one of the important factors for the survival against lethal B. rodhaini infection. 相似文献