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用流式细胞术可检测出SPF猪外周血单核细胞中的α-干扰素和γ-干扰素阳性细胞,在一些感染、未感染猪繁殖与呼吸综合征猪及阴性猪中也可检测到γ-干扰素阳性细胞。γ-干扰素阳性细胞分为单核细胞和浆细胞样树突细胞。通过Western blotting可以检测外周血单核细胞中有无α-干扰素的表达;通过免疫沉淀反应可在健康SPF猪外周血单核细胞中检测到大小为32和55～57ku的α-干扰素条带;样品中同样可检测到γ-干扰素,细胞因子呈大小为24、37、54ku的条带。细胞内干扰素的巨大作用可能是由于齐聚反应形成的,与之前对人α-干扰素的描述相像。猪细胞内α-干扰素在牛肾细胞系细胞上表现出预期的抗病毒活性。结果表明,干扰素以其独特的分子特性在猪白细胞中呈组成型表达。 相似文献
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用流式细胞术可检测出SPF猪外周血单核细胞中的α-干扰素和γ-干扰素阳性细胞。在一些感染、未感染猪繁殖与呼吸综合征猪及阴性猪中也可检测到γ-干扰素阳性细胞。γ-干扰素阳性细胞分为单核细胞和浆细胞样树突细胞。通过Western blotting可以检测外周血单核细胞中有无α-干扰素的表达。通过免疫沉淀反应可在健康SPF猪外周血单核细胞中检测到大小为32和55～57ku的α-干扰素条带。样品中同样可检测到γ-干扰素,细胞因子呈大小为24、37、54ku的条带。细胞内干扰素的巨大作用可能是由于齐聚反应形成的,与之前对人α-干扰素的描述相像。猪细胞内α-干扰素在牛肾细胞系细胞上表现出预期的抗病毒活性。结果表明,干扰素以其独特的分子特性在猪白细胞中呈组成型表达。 相似文献
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重组猪α-干扰素喷干粉剂的制备及其效果评价 总被引：1，自引：0，他引：1
为制备一种高活性、低价格重组猪α-干扰素（PoIFN-α）,采用喷雾干燥技术制备出重组猪α-干扰素（rPoIFN-α）喷干粉剂,并通过对rPoIFN-α喷干粉剂的稳定性,安全性,治疗效果等质量标准进行综合评价。结果显示,本试验制备的重组猪α-干扰素喷干粉剂质量稳定性,有效期暂定为两年;除10倍剂量rPoIFN-α喷干粉剂导致猪肝脏轻微脂肪样病变,其余各较低剂量rPoIFN-α喷干粉剂对猪无毒副作用;人工感染和临床应用试验表明rPoIFN-α喷干粉剂对猪腹泻具有显著的治疗效果。以上试验结果为PoIFN-α喷干粉剂的工程化生产及其在养猪业中的应用打下了基础。 相似文献
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猪α-1干扰素(poIFNα-1)对猪的很多病毒性传染病,如流行性腹泻、猪瘟、传染性胃肠炎等,以及对牛病毒性腹泻、小鹅瘟、羔羊腹泻等都具有较好的疗效,试验证实猪干扰素与牛羊等动物之间存在交叉活性。研究采用Escherichia coli大肠杆菌表达重组猪α-1干扰素,结果表明,此法不仅表达量高,而且成本低廉,工艺简单,生产周期短,极具推广价值。1试验材料1·1菌株已携带猪α-1干扰素基因的pBV220载体转化的Escherichia coliDH 5α菌株,-80℃保存,临用前筛选。1·2试剂蛋白胨(Sigma)、酵母粉(Sigma)、琼脂粉(Sig-ma)、尿素(Sigma)均为分析纯。ME… 相似文献
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利用RT-PCR方法从猪肝细胞总RNA中扩增出编码猪α干扰素基因,根据大肠杆菌偏嗜性及活性位点改造基因并克隆至原核表达载体p ET21a,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行蛋白诱导表达和鉴定。重组蛋白以包涵体形式表达,经变-复性及纯化处理后,获得多种不同基因型的高纯度猪α干扰素。用细胞病变抑制法在MDBK/VSV系统上进行抗病毒活性测定,结果表明经过基因改造的猪α干扰素(Po IFN-M6)具有更高抗病毒活性,约为2.97×108U/mg。本研究为猪α干扰素基因工程产品的研发及其在临床兽医的应用奠定基础。 相似文献
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《中国兽医学报》2019,(7):1261-1268
干扰素(interfern,IFN)是在特定的诱生剂作用下,由细胞产生的一种具有高度生物活性的糖蛋白,具有广谱抗病毒活性。从江香猪源Ι型干扰素α2和Ⅱ型干扰素γ于生菜中融合表达及生物活性研究未见报道。本研究应用生菜植物表达系统,将从江香猪源干扰素植物表达载体PBI121-IFNα2、PBI121-IFNα2γ、PBI121-IFNγ、PBI121-Vec转入根癌农杆菌LBA4404中,用真空渗透法将携带干扰素质粒的根癌农杆菌感染生菜叶片;用β-葡萄糖苷酸酶(β-glucuronidase,GUS)染色和酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测从江香猪源干扰素在生菜叶片中的表达;用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,Q-PCR)技术分析从江香猪源干扰素蛋白活性。结果显示:GUS染色和ELISA检测证明从江香猪源IFNα2、IFNα2γ、IFNγ在生菜中实现了表达;Q-PCR检测显示:在Marc-145细胞上从江香猪源干扰素蛋白对PRRSV的复制有明显抑制作用,在PK15细胞上从江香猪源干扰素蛋白对干扰素γ诱导蛋白30(interferon-gamma-inducible protein 30,IFI30)、2′-5′寡聚腺苷酸合成酶(2′-5′oligoadenylate synthetase,OAS)、抗黏液病毒蛋白(myxovirus resistance,MX)基因的mRNA水平的上调有一定的促进作用。本研究成功实现从江香猪源IFNα2、IFNα2γ、IFNγ在生菜中进行表达且表达蛋白具有生物学活性,为从江香猪源Ι型和Ⅱ型干扰素新复合型药物植物蛋白的开发利用提供参考依据。 相似文献
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本文主要探讨的是将重组猪α干扰素应用在猪蓝耳病的治疗中,采取实验对照的方式,对实验数据进行统计分析,进而总结出在猪蓝耳病的治疗中,重组猪α干扰素的应用价值,旨在为猪蓝耳病的治疗提供参考。 相似文献
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《中国畜牧兽医》2010,(5)
细胞因子,尤其是α-干扰素对控制流感病毒感染起重要作用。为了研究α-干扰素对控制流感的作用,用猪α-干扰素中和单克隆抗体K9来建立猪流感病毒感染模型。首先,确定α-干扰素中和单克隆抗体最佳剂量和给药途径,基于上述结果来研究单克隆抗体对猪流感病毒感染的作用。猪气管内接种106.0EID50A/Swine/Belgium/1/98(H1N1)病毒,接毒后18h,气管内和腹腔内注射高剂量α-干扰素中和单克隆抗体和对照抗体,分别于接种后0、24、30、48、72h对动物实施安乐死。在24、30h注射单克隆抗体K9的动物支气管肺泡灌洗液中α-干扰素水平被明显抑制,这与IL-6、IL-12水平降低一致。对照单克隆抗体处理组中α-干扰素和IL-1水平未受影响。重要的是α-干扰素中和单克隆抗体处理的动物临床症状出现和高峰要延迟24h,同时伴随α-干扰素的抑制,但对病毒复制和肺部病变无明显的作用。结果表明,在流感病毒症状中,α-干扰素对IL-6、IL-12诱导及3种细胞因子起重要作用。 相似文献
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《畜牧兽医科技信息》2016,(9)
为查明黄芪多糖对猪瘟疫苗体液免疫IgG抗体与猪白细胞介素-4(IL-4)、猪干扰素-γ(IFN-γ)、猪肿瘤坏死因子α(TNF-α)三种细胞免疫因子的影响,选用黄芪多糖注射液直接稀释高效猪瘟活疫苗(细胞源)的方法进行了免疫试验。证实了黄芪多糖直接稀释猪瘟活疫苗不但可以提高猪瘟疫苗IgG抗体水平,还可以提高猪干扰素-γ(IFN-γ)、猪肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度,降低猪白细胞介素-4(IL-4)浓度,证明在使用猪瘟疫苗免疫防控中添加黄芪多糖可增强猪群免疫力,为控制猪瘟流行提供了依据。 相似文献
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干扰素作为一类具有多种生物学功能的细胞因子,已经在人类疾病的防治中得到广泛应用.在兽药行业,大量的临床试验证明了干扰素激活免疫系统快速、广谱的有效性,但干扰素蛋白的活性和使用成本一直是制约其在兽药中应用的重要因素.为了探索人工重组的干扰素在兽医临床上应用的可行性,本文应用果蝇胚胎细胞表达系统筛选出了稳定表达猪干扰素α(rPIFNα)的细胞系,利用Western blot分析了细胞筛选前后的分泌蛋白的表达情况.结果显示,稳定表达细胞系的rPIFNα表达量较高,通过细胞试验证实,分泌表达的rPIFNα具有较强的抗病毒作用.本研究首次利用果蝇胚胎表达系统稳定表达猪干扰素,对干扰素在临床上应用是一个有益的尝试. 相似文献
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我国是世界养猪第一大国,同时也是猪病多而复杂的国家。猪的疾病,尤其是病毒性疾病仍然严重地危害着我国畜牧业的持续发展,部分人畜共患病毒病还直接危害着人类的健康。由于猪α干扰素具有广谱的抗病毒活性,且其具有速效多能、毒副作用小的特点,无疑是猪病毒性疾病预防和治疗的理想生物制品。近年来,许多科研工作者为了表达出高效、廉价的重组猪α干扰素,对猪α干扰素进行了深入研究。1猪干扰素的分类参照国际干扰素命名委员会制定的干扰素命名规则,即根据干扰素的动物来源进行初分类,再根据干扰素的抗原特性和分子结构的差异分成不同的型,… 相似文献
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《畜牧兽医科技信息》2016,(10)
为了进一步探讨应用重组α干扰素在治疗高致病性猪蓝耳病的治疗效果,达到临床应用与推广之目的,笔者随机选取高致病性猪蓝耳病患猪60头,将其随机均分为对照组与观察组,对照组应用常规治疗方法治疗,观察组在对照组的基础上加用重组猪α干扰素进行治疗。试验结果表明:观察组治疗的有效率明显优于对照组,且P0.05,差异具有统计学意义。 相似文献
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猪α-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其生物活性测定 总被引：1，自引：0，他引：1
利用基因工程技术,将编码梅山猪α-干扰素成熟蛋白基因(mPoIFNα,501 bp)亚克隆到含分泌信号肽序列的毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建成分泌型重组表达载体pPIC9K-mPoIFNα。用化学方法(LiCl)将线性化的mPoIFNα与ssDNA共转化入毕赤酵母菌株GS115,转化子经MD平板筛选和PCR鉴定后,得到的阳性菌株再以高浓度的G418筛选多拷贝重组子。该高拷贝菌株经1%甲醇连续诱导4 d,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot检测,结果表明在毕赤酵母中猪α-干扰素获得分泌型表达,表达产物约为20 000,在GS115中的表达量约为40mg/L,占GS115表达的可分泌型总蛋白的40.1%。对表达产物进行理化分析发现,重组酵母菌表达的蛋白耐酸(pH2),对热(56℃)部分敏感,并能被特异性抗猪α-干扰素抗体中和而不与抗猪γ-干扰素抗体反应。细胞病变抑制法(CPE50)测定干扰素生物活性,试验结果表明rPolIFNα具有较高的抗病毒生物活性,在MDBK中的抗VSV比活性为8.0×106U/mg。 相似文献
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目的:主要研究重组猪α干扰素治疗高致病性猪蓝耳病的效果。方法:选取本地区于2015年1月-2015年12月间收治的66例高致病性猪蓝耳病病猪,随机将其分为观察组、对照组,其中观察组病猪33例,接受重组猪α干扰素治疗;对照组病猪33例,接受常规治疗,比较两组治疗效果。结果:通过比较两组病猪治疗3 d后的采食量、体温等数据,观察组明显优于对照组,组间数据差异具有统计学意义(P0.05)。结论:重组猪α干扰素在治疗高致病性猪蓝耳病中发挥着重要作用,其疗效确切,并且能在较短的时间内改善病猪临床症状,应该在临床上做进一步推广。 相似文献
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猪圆环病毒2型是猪的一种重要病原。有证据显示,使用γ-干扰素或α-干扰素对PCV-2感染细胞进行处理,可以增强体外PCV-2的复制,经鉴定干扰素刺激应答元件（ISRE）样序列存在PCV-2的基因组中。为了确定ISRE是否与病毒对IFNs的响应有关,构造一些经ISRE序列系列突变而来的ISRE突变体。 相似文献
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目的:评定重组猪α干扰素在猪蓝耳病中的临床疗效。方法:重点筛选本兽医站2015年1月~2016年1月救治的63头蓝耳病病猪,以不同治疗方法分组。分试验组(32头,以重组猪α干扰素救治)和参照组(31头,以常规药物救治),对比两组临床效果。结果:经不同方法救治后,试验组"显效"、"好转"、"无效"、"有效率"95.24%,均高于参照组"显效"、"好转"、"无效"、"有效率"78.05%(P0.05)。结论:临床治疗猪蓝耳病时,以重组猪α干扰素救治,能够大大提升临床有效率,具有较高的临床应用价值。 相似文献