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用经蔗糖密度梯度离心纯化的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ，Ｍ４１）作为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过常规淋巴细胞杂交瘤技术产生杂交瘤细胞，经ＥＬＩＳＡ筛选，获得了４株能分泌特异性抗ＩＢＶ单克隆抗体的细胞系，分别命名为４ＡＣ１、４ＡＦ１、６ＤＨ８及２ＤＨ１０。４株单抗的亚类都属于ＩｇＧ２ｂ，在Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ试验中，４ＡＦ１、６ＤＨ８２株单抗特异性地识别ＩＢＶ的核衣壳蛋白（Ｎ）；经ＥＬＩＳＡ测定，各株单抗４０ｈ培养上清效价达１０－２～１０－４，第７天腹水效价达１０－５～１０－６，４ＡＦ１、６ＤＨ８与所试７个ＩＢＶ标准株及２个ＩＢＶ分离株都发生反应 相似文献
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新城疫病毒F48E8株cDNA文库的构建 总被引：2，自引：0，他引：2
以ＳＰＦ鸡胚繁殖我国标准新城疫病毒Ｆ４８Ｅ８强毒株，经蔗糖密度梯度超速离心纯化病毒。再以酚－ＳＤＳ法提取病毒基因组ＲＮＡ，作为反就模板，采用Ｐｒｏｍｅｇａ公司商品试剂合成双股ｃＤＮＡ。以同聚物加尾的方法将ｃＤＮＡ克隆 粒ｐＧＥＭ ３Ｚｆ中，经ＡＩＸ平板筛选，限制性内切酶分析和Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的核酸探针检测，共获得插入外源片段大小在０．６－４．８ｋｂ的阳性克隆７５个，初步构建了Ｆ４８Ｅ８株 相似文献
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以３０％～６０％硫酸铵饱和度分级沉淀、ＤＥＡＥ ＳepharoseＣＬ－６Ｂ、ＳephadexＧ－２００、Ｐhenyl ＳepharoseＣＬ－４Ｂ和羟基磷灰石层析纯化了小麦５－氨基酮戊酸脱水酶（ＡＬＡＤ）,其在pＨ８．５时比活为３１Ｕ．mg＾－１蛋白;酶纯化了９１倍,得率５％,酶亚基分子质量约５２ku,全酶分子质量约３３０ku,表明酶由６个亚基组成;酶的等电点为４．８,在４００nm有吸收峰,最适反应温度４５℃,Ｍg＾３＋激活酶,Ｚn＾ 相似文献
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蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体研制 总被引：2，自引：0，他引：2
用蚕豆萎蔫病毒提纯病毒粒子免疫ＢＡＬ Ｂ／ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,用纯化的ＢＢＷＶ病毒对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经三次有稀释法克隆,成功获得了２株ＢＢＷＶ特异性单克隆抗体的细胞株,分别命名为４Ｄ１１,３Ｇ１２．２株单抗腹水间接ＥＬＩＳＡ效价高达１：６４００００,抗体类型均为ＩｇＧ１,经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析表明,２株单抗均是针对ＢＢＷＶ ４４．７ｋＤ的外壳蛋白 相似文献
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蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体研制 总被引：11，自引：3，他引：11
用蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）提纯病毒粒子免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,用纯化的ＢＢＷＶ病毒对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经三次有限稀释法克隆,成功获得２株ＢＢ－ＷＶ特异性单克隆抗体的细胞株,分别命名为４Ｄ１１,３Ｇ１２．２株单抗腹水间接ＥＬＩＳＡ效价高达１∶６４００００,抗体类型均为ＩｇＧ１,经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ分析表明,２株单抗均是针对ＢＢＷＶ４４．７ｋＤ的外壳蛋白大亚基的特异性抗体．单抗抗原结合位点分析表明４Ｄ１１和３Ｇ１２两单抗作用于同一抗原决定簇 相似文献
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纤维素酶制备工艺的研究 总被引：6，自引：0，他引：6
将绿色木霉变异菌株４１３１的发酵液通过（ＮＨ４）２ＳＯ４盐析等一系列工艺步骤制得纤维粗酶,其比活力为０．２８ｕ／ｍｇ。粗酶经过Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５柱层析纯化,纯化后酶比活力为１．３６ｕ／ｍｇ,回收率为４１．６％。将上述纯化的纤维素酶再经过ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－２５柱层析分离,得到了纤维素酶纯化组合组分,其比活力为７．２８ｕ／ｍｇ,回收率为３２．８％。 相似文献
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以３０％ ～６０％ 硫酸铵饱和度分级沉淀、ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－６Ｂ、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００、Ｐｈｅｎｙｌ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－４Ｂ 和羟基磷灰石层析纯化了小麦５－氨基酮戊酸脱水酶（ＡＬＡＤ）,其在ｐＨ ８．５ 时比活为３１ Ｕ·ｍ ｇ－ １蛋白;酶纯化了９１ 倍,得率５％ ,酶亚基分子质量约５２ ｋｕ,全酶分子质量约３３０ ｋｕ,表明酶由６ 个亚基组成;酶的等电点为４．８,在４００ ｎｍ有吸收峰,最适反应温度４５℃,Ｍｇ２＋ 激活酶,Ｚｎ２＋ 和磷酸吡哆醛抑制酶。纯化的ＡＬＡＤ浓缩后,－ ２０℃下在０．１ ｍ ｏｌ·Ｌ－ １,ｐＨ ８．５ 的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ,内含５０％ 的甘油,５ ｍ ｍ ｏｌ·Ｌ－ １的巯基乙醇和ＭｇＣｌ２ 中黑暗贮藏３０ ｄ 酶活不损失 相似文献
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传染性囊病病毒CJ801VP2基因cDNA的序列分析 总被引：3，自引：0，他引：3
用ＲＴ－ＰＣＲ从传染性囊病病毒ＣＪ８０１的第１４代囊毒中扩增编码ＶＰ２蛋白的ｃＤＮＡ基因片断，长度为１５００ｂｐ，，并对该片断进行了ＤＮＡ序列分析。结果表明，ＣＪ８０１与ＩＢＤＶ标准Ⅰ型毒株５２／７０，ＳＴＣ和Ｃｕｌ的同源性最高，分别为９７．４％，９７．６％和９６．９％，与变异株，Ａ，Ｅ，ＧＬＳ的同源性稍低，分别为９６．５％，９６．３和９６．７％。 相似文献
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MDV感染鸡羽毛根病毒抗原和DNA的动态检测 总被引：2，自引：0，他引：2
１０羽１４日龄鸡分别以马立克氏病毒（ＭＤＶ）ＢＪ－１株接毒，采集羽毛根作为ＭＤＶ琼扩抗原和ＭＤＶＤＮＡｄｏｔ－ｂｌｏｔ杂交的动态检测样品。接毒后第１０ｄ至第８周的检测结果显示，鸡羽毛根ＭＤＶ琼扩抗原及ＭＤＶＤＮＡ可分别在接毒后第１４ｄ（３７．５％，３／８）和第１２ｄ（３３．３％，３／９）检出；接毒后第１７ｄ至第５周，鸡羽毛根ＭＤＶ琼扩抗原的阳性检出率均大于８０％；第６，７和８周时，则分别降至６６．７％（４／６），５０％（３／６）和４０％（２／５）。而ＭＤＶＤＮＡ的检测，除１只鸡直到第４周才呈阳性外，其余在接毒后第１４ｄ至第８周中均保持１００％的阳性检出率。 相似文献
10.
建立健康鸵鸟（Ｓｔｒｕｔｈｉｏｃａｍｅｌｕｓ）的血清全套生化参数,采用日本岛津ＣＬ ７２００型全自动生化分析仪,对３０只１～６月龄健康鸵鸟３８项血清生化参数进行测定．结果如下：（１）血清蛋白参数／ｇ·Ｌ－１：ＴＰ３１．８２,ＡＬＢ１５．４１,ＧＬＯ１６．１８（ＡＬＢ／ＧＬＯ０．９５）,Ａｐｏ Ａ１０．１２,Ａｐｏ Ｂ０．１４（Ａｐｏ Ａ１／Ａｐｏ Ｂ０．８０）;（２）血清酶参数／ｕ·Ｌ－１：ＡＬＴ１４．３,ＡＳＴ４５６．８（ＡＬＴ／ＡＳＴ０．３８）,ＧＧＴ３．４,ＬＤＨ１６０３．１,ＣＫ３９３６．８,ＣＫ ＭＢ１４３０．８,ＡＭＹ３４１５．１,ＡＫＰ５７１．７,ＨＢＤＨ３７３．３;（３）血清糖、蛋白质、脂类及其代谢产物参数／ｍｍｏｌ·Ｌ－１：ＧＬＵ９．４１,ＴＲＩ１．９７,ＢＵＮ０．９４,ＬＤＬ２．１９,ＨＤＬ１．５４,ＣＨＯ３．５８（ＨＤＬ／ＣＨＯ０．４１）;ＣＲＥ１２．６５μｍｏｌ·Ｌ－１（ＢＵＮ／ＣＲＥ０．０６３）,ＵＡ５０５．２４μｍｏｌ·Ｌ－１,ＴＢＡ３７．１μｍｏｌ·Ｌ－１,ＴＢＩＬ５．３２μｍｏｌ·Ｌ－１,ＤＢＩＬ３．２１μｍｏｌ·Ｌ－１,ＩＢＩＬ２．０８μｍｏｌ·Ｌ－１,ＴＴＴ４．１２ｕ;（? 相似文献
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为了在原核系统中高效表达兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60,应用RT-PCR方法从兔出血症病毒(RHDV)西北分离株YL中克隆出了衣壳蛋白VP60基因并测序,结果显示,YL株VP60基因全长1740 bp,GC含量为55.3%,已在GenBank中注册(登录号为DQ530363),VP60基因与中国RHDV最早期分离株WX84的VP60基因核苷酸序列同源性为93.0%,氨基酸序列同源性为95.8%。构建成功YL株VP60基因原核表达载体VP60-pET32a,转化到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中。1 mmol/L IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测结果显示,VP60融合蛋白分子质量约为75 ku,其表达量占总菌体蛋白的39.8%。Western blot检测结果表明,VP60融合蛋白可以和RHDV抗血清发生特异反应。本研究结果显示,兔出血症病毒在干旱半干旱条件下的遗传变异和免疫学特征无较大变化。 相似文献
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人工感染ＲＨＤＶ－ＮＪ株病死兔肝经－５０℃反复冻融,氯仿处理,ＰＥＧ沉淀、差速离心,Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ柱层析得纯化病毒,纯化ＲＨＤＶ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＣｕＣｌ２负染色后,切取主要结构多肽ＶＰ１（６４．５ＫＤ）凝胶带,除去ＣｕＣｌ２和ＳＤＳ获得ＶＰ１,高效液相色谱鉴定只有一个蛋白峰,Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔｔｉｎｇ,ＨＡ和ＨＩ结果显示纯化ＶＰ１具有良好的抗原表位稳定性。无母源抗体的３月龄兔１ 相似文献
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对人工感染兔出血症病毒的淋巴－网状器官进行组织病理学、超微结构及免疫组织化学的动态研究。结果表明；（１）各淋巴－网状器官出现网状细胞、巨噬细胞及浆细胞反应性增生的免疫应答反应及淋巴细胞损伤性变化，主要表现为淋巴滤泡萎缩、出血及局灶性淋巴细胞或网状细胞的坏死。（２）各淋巴－网状细胞出现程度不同的细胞病理效应（ＣＰＥ），尤以胸腺和圆小囊较明显，初期表现为线粒体肿胀和内质网空泡化，进入濒死期时，表现为淋巴－网状细胞的坏死。（３）该病毒对淋巴－网状细胞有亲嗜性，证明病毒可直接侵害淋巴－网状器官，引起免疫缺陷，从而促使本病的发生。 相似文献
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对5例健康对照兔及25例实验感染RHDV的不同发病阶段病兔用生物素—亲和素免疫酶组化(BA)技术和常规病理学方法进行研究。结果表明RHDV是侵害多种组织细胞的泛嗜性病毒,但其主侵器官是肝脏,主要靶细胞是肝细胞及血管内皮细胞。感染初期RHDV首先在宿主细胞核内出现,随着病情发展在核内增殖、聚集,至疾病严重期核内感染强度达到高峰,濒死期略有下降。疾病后期,核内的RHDV颗粒通过破损的核膜或核崩解向细胞浆扩散。但只要核的轮廓尚存,核内RHDV的密度始终高于胞浆。本病的主要病理变化为急性坏死性肝炎,诸多器官出血、弥漫性血管内凝血,后期发展为急性败血症。疾病的实质是RHDV损伤肝细胞引起的病毒性肝炎。出血是重要的病理变化之一,它是血管内皮损伤、DIC和其它多种因素致使毛细血管壁通透性增强的反映,属于继发性病变。本文对RHDV在宿主细胞内的定性、动态变化,以及各器官组织的病理形态学变化及临床症状作了详细描写。 相似文献
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为建立用于兔出血症病毒2型(RHDV2)的快速检测方法,根据GenBank已公布的RHDV和RHDV2 VP60基因,设计合成2对特异性引物和10条末端重叠引物,通过重叠PCR 人工合成RHDV2 VP60基因中保守区片段,构建重组质粒,并以其为模板,经过反应条件优化、敏感性试验、特异性试验和35份样品检测应用,初步建立RHDV2 RT-PCR检测方法。实验成功合成RHDV2 VP60基因的435 bp保守片段并构建了pMD-19T-RHDV2重组质粒, 初步建立的RHDV2 RT-PCR方法具有良好的特异性和敏感性,RHDV2的检测限度可达到230个拷贝的靶基因片段,检测RHDV、pGM-T-EBHSV(已构建)、兔巴氏杆菌、兔源大肠埃希菌和沙门氏菌均无特异性扩增,样品检测结果显示样品中RHDV2核酸阴性。该研究为中国及时进行RHDV2的防控提供技术储备。 相似文献
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兔出血症病毒套式PCR检测方法的建立 总被引：2，自引：0，他引：2
根据GenBank登录的兔出血症病毒的VP60基因序列，设计了2对引物，建立了检测兔出血症病毒的套式PCR检测方法．先用外引物扩增一段389bp的DNA片断，继而用内引物以扩增产物为模板进行第2次扩增（即套式PCR），以提高结果的准确性，避免一次性PCR的假阳性结果．用该方法对12份RHD样本进行检测，检出率为100％． 相似文献
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为避免细胞外转录步骤,使RHDV感染性克隆的转录和病毒拯救过程一步化,试验通过PCR反应在RHDV cDNA序列的5′端添加T7启动子核心序列,3′端添加具有自身切割功能的核酶核心序列.然后,将RHDV基因组的不同cDNA片段装配到pTVT转录载体中,构建了含有RHDV全长cDNA序列的重组质粒pTVT-RHDV.在转染能稳定表达T7RNA聚合酶的BHK细胞后,将收获的细胞培养物感染MA104细胞.分别用逆转录PCR、间接免疫荧光检测以及一步生长曲线等方法对拯救病毒进行了鉴定.结果表明,试验成功拯救出了RHDV,优化了RHDV感染性克隆的构建过程. 相似文献
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为探讨圆小囊在免体全身抗感染免疫中的功能作用，采用组织病理学及免疫组织化学方法，对比观察了2日龄、1月龄及2月龄实验免感染RHDV后圆小囊的病理变化，同时采用ELISA方法对实验兔的血清及肝、肾、脾中的RHDV含量进行了测定，重点对实验兔圆小囊黏膜上皮内淋巴细胞(IEL)进行了统计比较，结果显示：2月龄以内兔人工感染RHDV后，临症表现、剖检及组织病理学观察均未见异常。血清及RHDV的靶器官肝、脾、肾中均未检测出RHDV抗原。2月龄以上兔感染RHDV后，无论从临床症状，还是大体剖检，组织病理学观察，均出现了明显的病理学改变，而且感染后血清RHDV抗原检测呈阳性反应。圆小囊、肝、脾、肾等组织器官都呈现RHDV免疫组化强阳性反应。2月龄以内的乳兔及仔兔感染RHDV后，圆小囊虽未出现明显的形态结构改变，免疫组化染色也未见RHDV抗原阳性反应物，但IEL明显增多，2日龄兔IEL由1．2％增加到4．2％；1月龄兔的IEL由10．1％增加到26．1％。1月龄仔兔还表现出固有层中淋巴细胞明显增多。 相似文献
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周学权 《北京林业大学学报》1989,11(3):46-53
随油松种子萌发的进程,种子内核酸总量、DNA,RNA和蛋白质含量发生不同程度的消长,胚蛋白组分的变化尤为明显,其中低等电点(pH4.3～5.2)区域的酸性蛋白质不断增加和累积;与此相反,高等电点(pH6.5～8.0)低分子量(4.3×10~4D以下)区域的碱性蛋白质逐渐降解、消失,用PAS反应证明它们是一组分子量各异的糖蛋白。种胚内的这些在不同时期出现和消失的蛋白质都具有萌发时期的特征性,它们可能对调节胚的生长和幼苗的形态建成有重要作用。 相似文献