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1.
用微量补体结合试验对感染熊脑炎病毒而死亡的熊的实质脏器,熊脑炎腺病毒(BA-1株)的犬肾细胞培养物、试验感染犬、豚鼠急性发病期的肝浸液、腹水、血液进行抗原诊断;对6份采自临床健康熊血清和试验感染犬、豚鼠恢复期血清进行抗体诊断。结果表明,本法简便省时,特异性强,可用于熊病毒性脑炎的抗原、抗体的特异性诊断及流行病学调查。 相似文献
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犬瘟热荧光抗体技术的应用研究 总被引：16，自引：1，他引：15
用硫酸铵盐析法和蔗糖梯度离心法，从犬瘟热病毒人工感染犬的肝，脾中浓度提纯犬瘟热病毒，以其免疫家兔，制备兔抗犬瘟热病毒免疫血清，再经硫酸铵沉淀与ＱＡＥ－葡聚糖凝胶Ａ５０层析提取ＩｇＧ，于４℃低速搅拌标记异硫氰酸荧光素，制成兔抗犬瘟热病毒抗原荧光抗体。用上述荧光抗体检测２１只犬瘟热病毒人工感染犬和３５只自然感染犬的１１６份白细胞，抗原阳性１０９份，而健康犬，传染性肝炎犬，犬细小病毒肠炎犬的３７份血液白 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2016,(23)
为了保证外调藏系种羊不感染疫病及无疫病病原传播,对筛选出的准备调运的藏系种羊进行疫病的血清学调查,试验分别采用布鲁氏菌试管凝集试验、小反刍兽疫病毒抗体直接竞争ELISA方法、口蹄疫病毒非结构蛋白抗体单克隆抗体阻断ELISA方法和口蹄疫O型液相阻断ELISA方法对藏系绵羊30份血清样品进行了布鲁氏菌、小反刍兽疫、口蹄疫自然感染和疫苗免疫的血清学抗体检测。结果表明:所有被检血清中均未检出布鲁氏菌和自然感染口蹄疫病毒抗体阳性血清。小反刍兽疫和口蹄疫疫苗免疫抗体水平检测显示,小反刍兽疫免疫抗体阳性血清30份,阳性率为100%;口蹄疫免疫抗体阳性血清28份、可疑血清1份、阴性血清1份,阳性率为93.33%,阳性血清免疫抗体效价均大于1∶128(保护率大于99.00%),可疑血清免疫抗体效价1∶90(保护率大于50.00%),阴性血清免疫抗体效价小于1∶2(不保护)。说明此次海北州筛选的藏系绵羊种羊未感染上述疫病,且疫苗免疫抗体效价水平较好,适合作为外调种羊。 相似文献
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将狂犬病病毒(RV)糖蛋白(G蛋白)中和抗原表位串联表达的重组蛋白作为抗原,建立了检测RV中和抗体的间接ELISA技术。结果表明,最佳抗原包被量为2μg/孔,被检血清最佳稀释倍数为1:200。该方法与快速荧光灶抑制试验(RFFIT)的阳性符合率为88%,阴性符合率为96%。特异性试验表明,该抗原不与犬腺病毒I型、犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬副流感病毒和犬冠状病毒阳性血清发生交叉反应,具有良好的特异性。板内和板间重复性试验的平均变异系数分别为2.7%和4.2%,具有良好的重复性,为动物RV中和抗体检测提供了简单快捷的检测方法。 相似文献
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本研究建立了检测狂犬病病毒抗原的夹心间接斑点酶联免疫吸附试验(SI-Dot-ELISA).本法检出狂犬病病毒抗原的最低浓度为:0.01IU/mL的标准抗原,1:100000 (相当于20 LD_(50))的狂犬病病毒CVS株和鹿8202株的鼠脑悬液,1:400(相当于7906TCID_(50)/mL)的狂犬病病毒SAG株的细胞培养物.对多种健康动物的组织、健康细胞培养物以及犬瘟热病毒、犬腺病毒等检测均为阴性.用SI—Dot—ELISA、夹心间接ELISA(SI—ELISA)和小鼠脑内接种3种方法,检测了388份材料,检出的阳性份数分别为173、171和179,经统计学处理,3种方法在狂犬病病毒抗原的检测上,可以相互代替.甲醛灭活病毒不影响本方法的检测,而加入氢氧化铝胶后的病毒悬液则不能用本法检测.本法适用于狂犬病的诊断、流行病学调查、疫苗效价的测定和实验研究中病毒抗原的测定. 相似文献
7.
《中国预防兽医学报》2015,(8)
为建立H3N2亚型犬流感病毒(CIV)血清学检测方法,本研究利用H3N2亚型CIV重组核蛋白(r NP)作为检测抗原,通过优化反应条件,建立了检测CIV核蛋白血清抗体的间接ELISA方法。通过检测10份SPF犬血清样品确定阴阳性临界值为0.288。该方法检测犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬副流感毒、犬腺病毒Ⅱ型、狂犬病病毒、犬弓形虫、犬弓首蛔虫、犬复孔绦虫的阳性血清均为阴性,具有良好的特异性,但与H1N1、H3N8和H9N2亚型CIV有交叉反应。该方法检测H3N2 CIV血清抗体的灵敏度为血凝抑制试验(HI)的3~12.5倍;而且其批内批间变异系数为1.85%~6.57%,重复性良好。通过对H3N2 CIV攻毒犬血清进行分析,表明该检测方法具有滞后性,检测到CIV抗体的时间晚于HI试验。利用本研究建立的方法和以H3N2 CIV为诊断抗原的HI检测方法对450份血清样品进行检测,结果显示该方法对血清样品具有初筛作用,两者阳性符合率为58.3%,阴性符合率为100%。本研究可以结合其它血清学方法为CIV流行病学调查进行快速、高效的检测。 相似文献
8.
用从病犬分离的犬传染性肝炎病毒(ICHV)免疫BALB/C 小鼠,取其脾细胞与 SP_2/O 骨髓瘤细胞融合,通过 HI 试验筛选出4株分泌抗 ICHV 单克隆抗体的杂交瘤细胞株(C_2B_5、C_4B_8、D_4E_4、G_(10)C_(10))。HI 试验和斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)进行特异性鉴定表明:4株单抗与鸡新城疫病毒(NDV)、牛腺病毒(BAV)、禽腺病毒(Oet株)、犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)均无反应,仅与 ICHV 苗德株反应。杂交瘤细胞株在液氮中保存3个月复苏,仍可分泌特异性抗体。 相似文献
9.
首次应用原代和传代犬肾细胞从临床疑似犬传染性肝炎(ICH)和狐狸脑炎(FE)的犬、狐病料中分离获得4株腺病毒。经形态学、理化学、生物学等系统鉴定,证明为犬1型腺病毒(CAV-1),即犬传染性肝炎病毒ICHV)和狐狸脑炎病毒(FEV).以往对 ICH 犬肝测不出HA 效价的原因,是因为其中含有大量不耐热的非特异 HI 物和可与完整病毒竞争红细胞 HA 受体的单价游离血凝素.通过加热和加犬2型腺病毒(CAV-2)免疫血清的方法,可检出其中的 CAV-1血凝素而确定 ICH 诊断.用 ICH 犬肝中的游离血凝素免疫 ICH 易感犬,可使其产生抗 CAV-1HI抗体,获得 ICH 免疫.研究了用于检测 ICH 犬血清、腹水和肝脏样品的处理方法,首先建立了 ICH 微量补反诊断法;在对 ICH 犬肝 HA 特性研究的基础上,应用新鲜或醛化人0型红细胞和犬抗 CAV-1与 CAV-2血清,又研究成既可用于临床诊断又可用于抗体调查的微量血凝诊断法.进行了 CAV-1和 CAV-2弱毒苗的复制和实验免疫试验,证明 CAV-2弱毒复制苗对各类犬、狐均安全有效.而且对 CAV-1母源抗体有较强的抵抗力.通过回忆反应和特异淋转试验,汪明 CAV-2弱毒对 ICH 的免疫主要在于细胞免疫. 相似文献
10.
《动物医学进展》2021,42(8)
建立多房棘球绦虫粪抗原双抗体夹心ELISA检测方法,为犬感染多房棘球绦虫的早期诊断提供技术支撑。以5E10H5杂交瘤细胞株腹腔接种Balb/c鼠制备的腹水作为包被抗体,多房棘球绦虫成虫可溶性抗原免疫新西兰大白兔制备的多克隆抗体血清作为检测抗体,HRP标记的驴抗兔IgG作为二抗,建立双抗体夹心ELISA方法,检测试验犬(感染多房棘球绦虫)和阴性对照犬犬粪。结果显示,多房棘球绦虫成虫可溶性抗原具有良好的抗原性并能产生高效价抗体;对该方法的灵敏度进行检测,阳性粪样稀释至1∶10 000时仍显示为阳性;在感染动态分析中,该方法最早可在犬感染72 h后,最迟6 d后检测到多房棘球绦虫粪抗原。表明建立的方法可用于诊断犬多房棘球绦虫感染,为后期研制犬多房棘球绦虫粪抗原双抗体夹心ELISA检测试剂盒奠定了基础。 相似文献
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传染性支气管炎病毒(M41株)HI试验抗原的特异性和敏感性试验 总被引：1，自引：0，他引：1
采用本研究室制备的3批传染性支气管炎病毒(IBV,M41株)HI试验抗原,分别对100份和80份不同鸡血清进行IBV HI抗体检测,同时用IBV ELISA抗体检测试剂盒进行检测,比较两种不同方法检测的特异性和敏感性。结果显示,特异性试验中80份SPF鸡血清,自制抗原检测均为阴性,IBV ELISA检测79份为阴性,10份其他鸡病血清,两种方法检测9份均为阴性,10份IBV阳性血清两种方法检测均为阳性;敏感性试验中,74份已知IB疫苗免疫或IBV M41株感染鸡血清IBV HI检测72份为阳性,阳性检出率为97.3%(72/74),IBV ELISA检测74份均为阳性,阳性检出率为100%(74/74),SPF鸡血清及其他鸡病血清,两种方法检测均为阴性,两种检测方法总符合率为97.5%,差异不显著(P0.05)。试验结果证明,本研究室自制抗原具有良好的特异性,特异性为100%,抗原同时具有良好的敏感性,但IBV ELISA方法的敏感性要高于IBV HI方法。 相似文献
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犬瘟热重组N蛋白抗原间接ELISA方法的建立及应用 总被引：2，自引：0，他引：2
本研究以纯化的犬瘟热病毒（CDV）重组N蛋白为诊断抗原,建立了犬瘟热病毒抗体检测的间接ELISA诊断方法,将其命名为rN-CDVELISA。确定最佳抗原包被量为0．167μg/孔,待检血清最佳稀释倍数为1：100,其作用时间为45min,羊抗犬酶标抗体稀释倍数为1：2000,作用时间为60min,S／P值≥0．208者判为阳性,S／P值≤0．16者判为阴性,介于两者之间者判为可疑。该抗原不与犬细小病毒、犬传染性肝炎、犬副粘病毒、犬波特氏杆菌等4种疾病的阳性血清反应,具有良好的特异性;批内、批间重复试验,变异系数均小于15％,具有良好的重复性;检测血清样品96份,与进口诊断试剂盒的符合率为97．1％。本研究为现地免疫犬群抗体检测和进行CDV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。 相似文献
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本法建立的检测犬传染性肝炎病毒(ICHV)抗体的Dot—ELISA方法适用于流行病学调查时大量样品的检测。本法不与犬细小病毒阳性血清、犬瘟热病毒阳性血清交叉反应;与血清中和试验的阳性符合率为90.5％(19/21);有良好的重复性。是一种特异、敏感、简单、快速的检测方法。 相似文献
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本研究用表达的西尼罗河病毒(WNV)囊膜蛋白E结构域III蛋白作为包被抗原,单抗8F4A4作为竞争检测抗体,初步建立了能够对乙型脑炎病毒(JEV)和WNV进行鉴别诊断的竞争ELISA方法。优化的最佳抗原包被浓度为530ng/mL,单抗的最佳稀释倍数为1:8000,待检血清的最佳稀释倍数为1:10。通过对56份阴性样品进行检测确定了该方法的临界值为30%,以此为判定标准对临床220份血清进行检测,结果均为阴性。此方法的建立弥补了商品化试剂盒不能区分JEV和WNV感染的缺陷,为我国西尼罗河病毒病的流行病学调查提供了一种有效的抗体检测方法。 相似文献
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间接ELISA检测犬细小病毒病血清抗体方法的建立 总被引：8，自引：0，他引：8
用犬肾细胞增殖犬细小病毒,经纯化﹑标化作为包被抗原,建立检测犬细小病毒抗体的间接ELISA方法。结果表明:抗原最佳包被浓度5μg/mL;血清最佳稀释度1:40,反应时间45min;酶标抗体最佳稀释度1:2000,反应时间45min;S/P≥0.240判为阳性,≤0.190判为阴性,介于二者之间为可疑。该抗原不与犬瘟热﹑犬传染性肝炎﹑犬冠状病毒病﹑猫泛白细胞减少症病原阳性血清反应;批内重复试验变异系数小于10%,批间重复试验变异系数小于15%;对20份免疫犬血清进行检测,阳性检出率为85%,明显高于血凝抑制试验(65%),符合率为80%。试验结果表明建立的间接ELISA检测犬细小病毒抗体方法特异、灵敏、可重复性好。 相似文献
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《畜牧与兽医》2017,(1):65-70
为检测弓形虫循环抗原,以实现弓形虫急性感染的早期诊断,本研究建立了基于ABC(avidin biotin-peroxidase complex)放大系统的双抗体夹心ELISA方法。通过制备弓形虫排泄分泌抗原(ESA)并免疫动物,经3种抗原的筛选以获得抗循环抗原(CAg)的单抗,以方阵滴定法确定最佳多抗包被浓度和单抗工作浓度,利用夹心法和ABC放大系统建立检测弓形虫循环抗原的夹心ABC-ELISA方法,用该方法对人工感染犬血清和其他阳性血清样本进行检测以确定该方法的检出时间和准确性,并应用于临床样品的检测。结果:获得了3株针对不同抗原表位的单克隆抗体,并对CAg有较高特异性。双抗体夹心ABC-ELISA反应条件:兔多抗包被浓度为3.7μg/mL,生物素标记3A5、3E5和10F5-3单抗在混合工作液中的浓度分别为0.1、0.13和0.12μg/mL。该ELISA方法对ESA最低检测限为11.9 ng/mL,并与隐孢子虫早期感染牛血清、血吸虫尾蚴早期感染牛血清、艾美耳球虫早期感染鸡血清、犬瘟热急性感染早期血清、犬细小病毒急性感染血清无交叉反应。用该ELISA方法检测人工感染的犬,于感染后2 d血清即显示阳性,该方法能明显区分标准阳性血清和阴性血清。用该方法检测68份猪临床血样(其中包括2份标准阳性血清),检测结果与Nest-PCR结果一致。表明该双抗体夹心ABC-ELISA方法特异性强、敏感性高,可用于弓形虫急性感染的早期或活动期的诊断。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2017,(1)
为了建立区分猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染抗体和灭活疫苗免疫抗体的诊断方法,试验以重组表达蛋白NSP7为抗原,建立检测PRRSV抗体的NSP7-ELISA方法,并对最适反应条件进行确定,然后对猪瘟病毒、猪口蹄疫病毒、猪圆环病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒阳性血清和采自长春市的150份血样样品进行检测。结果表明:NSP7-ELISA最佳工作条件为NSP7抗原的最适包被浓度2.0μg/m L,血清稀释度1∶40,酶标抗体的工作浓度1∶5 000,以5%脱脂奶粉封闭过夜;猪瘟病毒等5种猪常见病毒感染阳性血清的检测结果均为阴性;在150份血清样本检测中,敏感性、特异性和符合率分别为88.1%(37/42)、90.7%(98/108)、90.0%(135/150)。说明建立的方法具有良好的特异性和敏感性,可用于区分PRRSV感染抗体和灭活疫苗免疫抗体。 相似文献
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《中国奶牛》2020,(7)
为了确诊新疆某规模化奶牛场犊牛腹泻疾病病原,剖检4头腹泻犊牛采集其脏器以及血清样品,再采集另外6头腹泻犊牛血清样品,对脏器样品进行细菌的分离鉴定,采用ELISA的方法对血清样品进行病毒性腹泻-黏膜病抗原检测,对轮状病毒、冠状病毒和细小病毒进行抗体检测,对抗体阳性样品采用PCR方法进一步进行确诊。结果发现,4头份脏器样品均检测出沙门氏菌、大肠杆菌,10份血清样品中均未检测出病毒性腹泻-黏膜病病毒抗原、轮状病毒和冠状病毒抗体,8份血清样品中检测出细小病毒抗体,7份血清样品中检测出细小病毒DNA。结果表明,该牛场犊牛腹泻主要由沙门氏菌、大肠杆菌和细小病毒混合感染引起。本试验结果可为该场犊牛腹泻诊治提供参考。 相似文献
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1病毒中和试验康复猪和隐性感染猪均能产生特异性抗体。抗体检查有多种血清学方法,其中病毒中和试验最适合。材料有标准抗原,用猪传染性脑脊髓炎（PTEV）在单层细胞上增殖后,反复冻融三次,零下20℃冻存备用。标准阳性血清,用PTEV纯化抗原免疫血清抗体阴性的健康猪,采血、分离血清备用。标准阴性血清与其他阴性血清的制备方法相同,还有96孔微量细胞培养板、微量移液器、温箱等。将血清置于56℃水浴中灭活30分钟。 相似文献