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家蚕病原性微孢子虫孢子表面蛋白的选择性分离与总蛋白比较分析 总被引：4，自引：2，他引：2
选择性分离了Ｎｏｓｅｍａｂｏｍｂｙｃｉｓ孢子表面蛋白和总蛋白，采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测发现，孢子表面蛋白由分子量不同的３种亚基（３２０００、２６０００、２４５００Ｄａ）组成，其总蛋白至少包括２５个条带。同时将从养蚕生产中收集到的两种微粒子ＭＡ－１和ＭＤ－１以及从野外昆虫收集到的微孢子虫Ｐｈａ－Ｍ和Ｈａ－Ｍ与Ｎ．ｂｏｍｂｙｃｉｓ进行了比较，发现不同微孢子虫间蛋白组成有差异。 相似文献
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微粒子感染家蚕后血液蛋白质和氨基酸组成变化研究 总被引：1，自引：0，他引：1
本报道家蚕微粒子孢子（Ｎｏｓｅｍａ ｂｏｍｂｙｃｉｓ）添食家蚕（Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ）在蚕体血液里所引起的蛋白质和氨基酸变化。以正常微粒子孢子、四川大孢子和蒸馏水分别添食四至龄起蚕使蚕体感染微孢子后,在一定时间间隔内取血进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,观察到感染微孢子的蚕血有大分子蛋白出现,在电泳图上分离明显。对感染微粒子的家蚕进行氨基酸分析研究,与对照比较,毒性大的正常种Ｎｏｓｅｍａ ｂｏｍｂｙｃｉｓ 相似文献
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中国广东家蚕微粒子孢子在Antheraea eucalypti细胞系的感染增殖 总被引：5，自引：0，他引：5
将中国广东的Ｎｏｓｅｍａ ｂｏｍｂｙｃｉｓ ＣＧＳ,用０２ｍｏｌ／ＬＫＯＨ 处理后,接种感染Ａ．ｅｕｃａｌｙｐｔｉ 细胞系。孢子的发芽率达８７％ ,在Ａ．ｅｕｃａｌｙｐｔｉ 细胞初期感染率为２７ ％ 。发育各阶段具２ 核,可观察到短极丝孢子和二次感染体形成,孢子芽母细胞按二分裂形成２ 个双核的孢子芽,具典型 Ｎｏｓｅｍａ 属特征。Ｎｏｓｅｍａｂｏｍｂｙｃｉｓ ＣＧＳ 生物学特性、血清学类型与日本Ｎｏｓｅｍａ ｂｏｍｂｙｃｉｓ ＮＩＳ００１ 大致相同,但孢子大小、裂殖体的形态、在Ａ．ｅｕｃａｌｙｐｔｉ 细胞寄生的细胞感染率、每个细胞的产孢数,２ 种微孢子虫却有差异。 相似文献
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家蚕微孢子虫孢子DNA的提取、克隆及部分DNA序列分析 总被引：3，自引：0，他引：3
报道家蚕微孢子虫（Ｎｏｓｅｍａｂｏｍｂｙｃｉｓ简称Ｎ．ｂ）孢子ＤＮＡ的提取、克隆及部分ＤＮＡ序列测定的结果。采用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ将孢子破碎，用苯酚一氯仿法提取孢子的ＤＮＡ。将Ｎ．ｂ孢子ＤＮＡ与ｐＴＺ１８Ｒ质粒重组，转化于大肠杆菌ＤＨ５，获得４个阳性克隆株：ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ１，插入片段为１ｋｂ；ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ２，为１．２ｋｂ；ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ３为１．８ｋｂ及ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ４为１．９ｋｂ，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，证实插入的ＤＮＡ片段为家蚕Ｎ．ｂ孢子所特有。与ＭＧ１（Ｎｏｓｅｍａｓｐ．），蓖麻蚕微孢子虫、蓝萤叶甲微孢子虫及蚕卵的ＤＮＡ均无同源性。用双脱氧链终止法测定４个克隆株插入片段的部分ＤＮＡ的序列，经检索尚未发现同源性的基因序列。讨论了ＰＣＲ技术诊断家蚕微孢子虫孢子与近缘种的问题。 相似文献
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家蚕微孢子虫孢子DNA的提取、克隆及部分DNA序列分析 总被引：3，自引：3，他引：0
报道家蚕微孢子虫（Ｎｏｓｅｍａｂｏｍｂｙｃｉｓ简称Ｎ．ｂ）孢子ＤＮＡ的提取、克隆及部分ＤＮＡ序列测定的结果。采用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ将孢子破碎，用苯酚一氯仿法提取孢子的ＤＮＡ。将Ｎ．ｂ孢子ＤＮＡ与ｐＴＺ１８Ｒ质粒重组，转化于大肠杆菌ＤＨ５，获得４个阳性克隆株：ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ１，插入片段为１ｋｂ；ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ２，为１．２ｋｂ；ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ３为１．８ｋｂ及ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ４为１．９ｋｂ，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，证实插入的ＤＮＡ片段为家蚕Ｎ．ｂ孢子所特有。与ＭＧ１（Ｎｏｓｅｍａｓｐ．），蓖麻蚕微孢子虫、蓝萤叶甲微孢子虫及蚕卵的ＤＮＡ均无同源性。用双脱氧链终止法测定４个克隆株插入片段的部分ＤＮＡ的序列，经检索尚未发现同源性的基因序列。讨论了ＰＣＲ技术诊断家蚕微孢子虫孢子与近缘种的问题。 相似文献
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利用石蜡切片一步银染法对１４例马立克氏病鸡肿瘤细胞核仁组成区相关嗜银蛋白的数目、形态及分布进行研究。结果表明，ＭＤ肿瘤细胞中有２种形态的Ａｇ－ＮＯＲｓ，一种为团块状较大的Ａｇ－ＮＯＲｓ，生个肿瘤细胞平均为１．５８个／细胞；一种为较小的散在分布的Ａｇ－ＮＯＲｓ，平均为５．８１个／细胞。每人肿瘤细胞拥有７．３７个Ａｇ＝ＮＯＲｓ，ＭＤ鸡肿瘤细胞中Ａｇ－ＮＯＲｓ的数量、形态特征一其分化程序和ＤＮＡ含量有关 相似文献
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桑尺蠖和丝棉木金星尺蠖的微孢子虫对家蚕病原性和胚种传染性研究 总被引：3，自引：1，他引：2
从桑尺蠖（ＨｅｍｅｒｏｐｈｉｌａａｔｒｉｌｉｎｅａｔａＢｕｔｌｅｒ）中分离的微孢子虫（简称桑尺蠖微孢子虫），形态为长卵圆形，大小为３．５～４．１×１．６～１．９μｍ。从丝棉木金星尺蠖（ＣａｌｏｓｐｉｌｏｓｓｕｓｐｅｃｔａＷａｒｒｅｎ）中分离的微孢子虫（简称丝棉木金星尺蠖微孢子虫），形状为卵圆形，大小为３．２～３．７×１．６～２．１μｍ。两种微孢子虫均能感染寄生家蚕的主要组织器官，引起蚕儿发病，但致病力要比家蚕微孢子虫（Ｎｏｓｅｍａｂｏｍｂｙｃｉｓ）弱，且能经卵传染给下一代，其胚种传染率要比家蚕微孢子虫低。 相似文献
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bcl-2在鸡马立氏克氏病肿瘤中的表达 总被引：1，自引：0，他引：1
用来克亨 Ｓ Ｐ Ｆ鸡复制马立克氏病（ Ｍａｒｅｋ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ， Ｍ Ｄ）肿瘤模型，取肿瘤和相应正常组织，液氮保存。 Ａ Ｇ Ｐ Ｃ（ Ａｃｉｄ Ｇｕａｎｉｄｉｎｉｕｍ Ｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ Ｐｈｅｎｏｌ Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ ）法提取组织总 Ｒ Ｎ Ａ（ Ｔ Ｒ Ｎ Ａ），紫外测定其浓度，甲醛变性胶电泳观察其纯度。将一个含鸡 ｂｃｌ２ １．２ ｋｂ 片段的质粒（ Ｐ Ｔ Ｔ Ｂ Ｃ１），经转化扩增，提取质粒 Ｄ Ｎ Ａ，限制性内切酶（ Ｒ Ｅ）消化，回收纯化ｂｃｌ２片段，放射性 α３２ Ｐ标记，制成探针。通过 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 分子交杂检测 Ｍ Ｄ 肿瘤组织中ｂｃｌ２ 的表达，并与相应的正常组织比较。结果：①鸡 Ｍ Ｄ 肿瘤组织和相应正常组织中均有 ｂｃｌ２ 的表达；② Ｍ Ｄ 肿瘤组织中ｂｃｌ２ 的表达显著高于相应的正常组织。结合已进行的凋亡研究表明，ｂｃｌ２ 表达产物通过阻遏细胞凋亡促进 Ｍ Ｄ 淋巴瘤的形成。 相似文献
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本研究采用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ、免疫组织化学方法、病理组织学方法对鸡眼区相关淋巴组织在鸡新城疫（ Ｎｅｗ ｃａｓｔｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅ， Ｎ Ｄ）疫苗点眼免疫后的局部体液免疫应答进行了研究。研究发现， Ｌａｓｏｔａ 系 Ｎ Ｄ 疫苗点眼免疫后鸡眼区相关淋巴组织（ Ｈｅａｄａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｌｙｍ ｐｈｏｉｄ Ｔｉｓｓｕｅ， Ｈ Ａ Ｌ Ｔ）对 Ｎ Ｄ 疫苗可产生高效的局部体液免疫应答：①免疫组泪液和血清中 Ｎ Ｄ Ｖ特异性 Ｉｇ Ａ、 Ｉｇ Ｍ 抗体及哈氏腺（ Ｈａｒｄｅｒｉａｎ Ｇｉａｎｄ， Ｈ Ｇ）中 Ｉｇ Ａ、 Ｉｇ Ｍ 型浆细胞出现较对照组早，且抗体滴度及浆细胞数量均极显著高于对照组（ Ｐ＜ ０．０１）。免疫组泪液和血清中 Ｎ Ｄ Ｖ特异性 Ｉｇ Ｇ 抗体滴度及哈氏腺中 Ｉｇ Ｇ 型浆细胞数量也均极显著高于对照组（ Ｐ＜ ０．０１），且哈氏腺中 Ｉｇ Ｇ 型浆细胞的出现早于对照组；②点眼免疫后泪液中 Ｎ Ｄ Ｖ特异性 Ｉｇ Ａ、 Ｉｇ Ｍ抗体出现较血清中的早，且抗体滴度也显著高于血清中（ Ｐ＜ ０．０５）；③ Ｌａｓｏｔａ 系 Ｎ Ｄ苗点眼免疫后可使结膜相关淋巴组织的形成和发育明显提前，免疫组结膜相关淋巴组织中的淋巴滤泡数量极显著高于对照组（ Ｐ＜ ０． 相似文献
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新城疫病毒F48E9株HN基因的克隆与酶切分析 总被引：9，自引：0，他引：9
为深入探讨新城疫病毒（ＮＤＶ）的结构与功能的关系，扩增和克隆了Ｆ４８Ｅ９株ＮＤＶ的ＨＮ基因。首先以提取的Ｆ４８Ｅ９株ＮＤＶ基因组ＲＮＡ为模板逆转录合成第一链ｃＤＮＡ，然后用ＨＮ基因特异性引物作ＰＣＲ扩增ＨＮｃＤＮＡ，结果得到１条分子量约１．８ｋｂ的ＤＮＡ带，与ＮＤＶＨＮ基因的大小一致。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交进一步证实其为ＨＮ特异性ｃＤＮＡ。随后采用平端连接法将其克隆到ｐＳＶ·Ｓｐｏｒｔｌ质粒中，应用限制性内切酶ＥｃｏＲＩ、ＳｃａⅠ、ＭｌｕⅠ、ＡｐａⅠ、ＰｓｔⅠ、和ＳｍａⅠ对ＮＤＶＦ４８Ｅ９株ＨＮｃＤＮＡ重组质粒作单酶或双酶切，结果表明，ＮＤＶＦ４８Ｅ９株ＨＮ基因较ＨｉｔｃｈｎｅｒＢ１株的ＨＮ基因缺少１个ＭｌｕⅠ位点（７０５ｂｐ左右），多１个ＰｓｔⅠ位点（８０２ｂｐ左右）。 相似文献
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从家蚕蛾中分离的微孢子虫MZ_1(Nosema sp.)对家蚕的病原性研究 总被引：2，自引：1，他引：1
从养蚕生产的蚕蛾中分离到一种小型微孢子虫 ,暂名MZ1,其形状为卵圆形 ,大小为 2 49± 0 10 μm×1 32± 0 12 μm。寄生家蚕的大多数组织器官 ,在蚕体内的生殖发育圈与N .bombycis相似。对家蚕的致病力弱 ,ID50为每条蚕 172 5 0粒孢子 ,能在蚕体内经胚种传染给下一代。MZ1具有Nosema属的分类特征 ,初步定为Nosemasp .。 相似文献
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微粒子病家蚕消化道内肠球菌的分布 总被引：2，自引：1，他引：1
从健康家要、感染微粒子病家蚕,以及感染细菌性肠道病家蚕的消化道分离了200株肠球菌,并进行了数值分类学鉴定,以探讨家蚕消化道中肠球菌的生态学分布和家蚕微孢子与肠球菌的相互关系。研究结果表明:与健康蚕相比,4龄或5龄起蚕添食微孢子的微粒子病家蚕消化道内,肠球菌的数量分别增加5.5×10~5倍和0.74×10~2倍;菌种数从6个分别下降为3个和4个;生化表型数从27个分别下降为13个和14个;在菌种分布上,Ent.avium的分布频率从健康蚕的56％分别下降至20%和38%,而Ent.faecium的分布频率从健康蚕的2％分别上升至40％和16%;分离菌株共有59个生化表型。 相似文献
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两种微孢子虫孢子表面蛋白及对家蚕侵染性的比较研究 总被引：11，自引：6，他引：5
对来自家蚕的内网虫属样微孢子虫和家蚕微孢子虫的形态、表面蛋白及侵染性进行了比较研究。内网虫属样微孢子虫孢子显著小于家蚕微孢子虫 ,孢囊中孢子数为 8～ 32个 ,只侵染中肠组织 ,对家蚕无胚胎传染性。SDS UreaPAGE和 2D PAGE图谱显示两种孢子表面蛋白有明显差异。在SDS UreaPAGE中 ,内网虫属样微孢子虫的主要表面蛋白为 2 2kD ,而家蚕微孢子虫为 4 5kD。 2D PAGE显示 ,当上样量为 12 0 μg时 ,内网虫属样微孢子虫孢子表面蛋白斑点有 330多个 ,而家蚕微孢子虫孢子只有 16 0多个 ,其中仅有 10多个相同或疑似蛋白点。家蚕微孢子虫的主要表面蛋白点约有 2 0个 ,以中性偏酸的小分子居多 (<18kD ,pI 5 .4～ 7.2 ) ;内网虫属样微孢子虫有 30多个 ,分布较分散。根据两种孢子都能感染家蚕的特点 ,认为相同或疑似蛋白与是否能够感染有关 ,而大量差异蛋白与对家蚕的感染程度有关。两孢子表面蛋白中的主要蛋白均为差异蛋白 ,可能是孢子表面的结构蛋白。 相似文献
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家蚕微粒子孢子单克隆抗体的研制及其在检测上的初步应用 总被引：4，自引：2，他引：2
将家蚕微粒子Nosema bombycis孢子免疫的BALB/c小鼠的脾细胞和FO细胞融合,经克隆筛选获得6株能稳定分泌抗N.bombycis孢子表面抗原的单克隆抗体细胞株(Nb_(1-6))。其中Nb_(1-2)和Nb4分泌的抗体属于IgM,Nb_3,Nb_5和Nb_6分泌的分别为IgG_2b、IgG和IgG_3。特异性检查结果表明,除Nb_4和Nb_6对柞蚕微粒子孢子有交叉凝集反应外,其余均对家蚕N.bombycisJ孢子具特异性。杂交瘤细胞培养上清液对N.bombycis孢子的凝集效价以Nb_1为最高,达1:256,由此细胞株诱发的腹水效价高达1:5000。建立了以普通聚苯乙烯酶标板为载体,完整的N.bombycis孢子为抗原的LEISA测定方法,最低检测量为700个孢子。 相似文献
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家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)侵染草地贪夜蛾卵巢细胞(Sf21)体系的建立 总被引：3，自引：0，他引：3
家蚕微孢子虫(Nosemabombycis,简称N.b)经KOH处理后,接种于草地贪夜蛾卵巢细胞(Sf21),建立家蚕微孢子感染增殖体系,同时,对孢子与宿主细胞在感染增殖过程中的形态变化进行了跟踪观察。KOH处理的孢子发芽率约为67%,Sf21细胞的初期感染率约为4.3%,接种24h内,细胞感染率变化不明显,但随后逐渐增加,到接种后的第7天达76.9%。接种后第12天起,细胞内充满不同发育阶段的孢子,并可见大量的胞外游动孢子。随后,大量细胞破裂,孢子逸出后,破裂的细胞内出现大量囊泡,且有合胞体(巨型多核融合细胞)出现。另外,将感染孢子的家蚕中肠组织和丝腺组织用胰蛋白酶处理后直接接种Sf21细胞,不经发芽处理,细胞也能感染。 相似文献