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1.
A procedure has been developed for introducing exogenous DNA into mouse eggs by injection of chromosome fragments. Chromosome fragments were dissected from human metaphase spreads and microinjected into the pronuclei of fertilized mouse eggs. Many of the injected eggs subsequently exhibited normal pre- and postimplantation development. Embryos obtained from eggs injected with centromeric fragments retained human centromeric DNA as demonstrated by in situ hybridization analysis. From eggs injected with noncentromeric fragments, a mouse was obtained whose tail tissue exhibited the presence of human DNA. This procedure should facilitate incorporation of very large (more than 10 megabases) DNA fragments into cells and embryos without the need for cloned sequences. 相似文献
2.
Mapping the Drosophila genome with yeast artificial chromosomes 总被引：20，自引：0，他引：20
The ability to clone large fragments of DNA in yeast artificial chromosomes (YAC's) has created the possibility of obtaining global physical maps of complex genomes. For this application to be feasible, most sequences in complex genomes must be able to be cloned in YAC's, and most clones must be genetically stable and colinear with the genomic sequences from which they originated (that is, not liable to undergo rearrangement). These requirements have been met with a YAC library containing DNA fragments from Drosophila melanogaster ranging in size up to several hundred kilobase pairs. Preliminary characterization of the Drosophila YAC library was carried out by in situ hybridization of random clones and analysis of clones containing known sequences. The results suggest that most euchromatic sequences can be cloned. The library also contains clones in which the inserted DNA is derived from the centromeric heterochromatin. The locations of 58 clones collectively representing about 8 percent of the euchromatic genome are presented. 相似文献
3.
Gresham D Ruderfer DM Pratt SC Schacherer J Dunham MJ Botstein D Kruglyak L 《Science (New York, N.Y.)》2006,311(5769):1932-1936
A central challenge of genomics is to detect, simply and inexpensively, all differences in sequence among the genomes of individual members of a species. We devised a system to detect all single-nucleotide differences between genomes with the use of data from a single hybridization to a whole-genome DNA microarray. This allowed us to detect a variety of spontaneous single-base pair substitutions, insertions, and deletions, and most (>90%) of the approximately 30,000 known single-nucleotide polymorphisms between two Saccharomyces cerevisiae strains. We applied this approach to elucidate the genetic basis of phenotypic variants and to identify the small number of single-base pair changes accumulated during experimental evolution of yeast. 相似文献
4.
Isolation of mutants of an animal virus in bacteria 总被引：128，自引：0，他引：128
Mutants of animal viruses can be isolated in bacteria by recombinant DNA methods. Since no viral functions are required for propagation of recombinants in bacteria, viral mutants with lethal changes in cis- or trans-acting elements can be isolated, as well as partially or conditionally defective mutants. In the cases of viruses with small DNA genomes, such as the tumorigenic simian virus 40 (SV40), the entire viral DNA can be inserted into the bacterial plasmid pBR322 and cloned in Escherichia coli. Recombinant plasmids with a single copy of SV40 DNA cause morphological transformation of mouse cells in culture with the same efficiency as SV40 DNA isolated from virus-infected monkey cells, but the recombinant DNA is noninfectious and replicates poorly in permissive cells. However, SV40 DNA excised from the plasmid replicates as well as authentic viral DNA and is fully infectious. SV40 mutants with small deletions or base substitutions have been isolated by in vitro site-specific or random local mutagenesis of recombinant DNA followed by cloning in E. coli. Many of the mutants thus isolated are defective in specific viral functions. 相似文献
5.
Fine structure genetic analysis of a beta-globin promoter 总被引：120，自引：0，他引：120
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7.
用200条随机引物对满天星试管正常苗和玻璃苗进行了RAPD分析研究,结果表明:200条随机引物中,有23条引物的扩增产物DNA片段表现出明显的多态性,其中每个引物对不同供试样品扩增出现的DNA谱带数少则5条,多达13条,分布在200～2 000 bp.不同引物扩增出的DNA片段谱带不同,差异较大,选出的23条引物对14个供试样品共扩增出206条DNA谱带,经聚类分析,14个供试样品可分为2类或4类,可直观准确地区分满天星试管正常苗和玻璃苗之间的差异. 相似文献
8.
长片段水稻细菌人工染色体DNA的亚克隆文库的构建 总被引：2，自引：0，他引：2
利用超声波振断法将水稻细菌人工染色体 (BAC)基因组文库———Nipponbare库中的一个BAC克隆 (E5 0 )振断 ,产生许多大小不同的DNA随机片段 ,回收其中 1 7～ 3 5kb的片段 ,并将这些随机片段克隆入质粒载体pUC18,构建了适合于鸟枪法测序的亚克隆BAC文库 相似文献
9.
大酸枣与酸枣、枣亲缘关系的RAPD分析 总被引：1，自引：0，他引：1
利用RAPD分子标记技术对大酸枣、酸枣及枣等11份种质材料进行了亲缘关系和遗传多样性检测,并采用离差平方和法进行聚类分析。结果表明,16条引物共获得115条谱带,其中多态性带84条,占总扩增谱带的73.04%。表明RAPD技术能较好地用于大酸枣、酸枣及枣亲缘关系的研究。从聚类分析图得,在等值线λ=15处,可将供试材料分为3类群:第1类包括无核小枣、金丝小枣、圆铃枣、冬枣4个枣品种;第2类包括大酸枣、s4、s5;第3类是由s1、s2s、3组成的酸枣群;表明大酸枣的分类地位处于供试酸枣和枣品种之间,推测大酸枣可能为供试酸枣与枣品种的中间类型。从欧氏距离上看出,大酸枣与供试酸枣的平均欧氏距离大于与枣品种间的平均欧氏距离,表明大酸枣与供试枣品种间亲缘关系较近。 相似文献
10.
反向PCR克隆转基因水稻的外源基因旁侧序列 总被引：20，自引：0，他引：20
以反向PCR（IPCR）为基础建立了适合于处理大量材料的克隆转基因水稻中外源基因旁侧序称的技术体系，该方法中用小量法提取转基因水稻总DNA；总DNA用10倍过量的限制性内切酶在50μL反应体积中进行过夜酶切；酶切片段在20μL体积中进行自连接，之后进行套式PCR（nested-PCR)扩增旁侧序列。在套式PCR结合了热启动PCR和降落了PCR技术以增强PCR反应的特异性。用这种方法，本实验室在一周内克隆了35个转基因水稻株系中外源基因的旁侧序列，长度在300－750bp之，PCR产物的特异性用Southern杂交进行了证明，实验结果表明这个方法具有快速、稳定和高效的优点。 相似文献
11.
【目的】验证基于CRISPR/Cas9系统构建的靶向编辑加工番茄(Solanum lycopersicum) eIF4E1基因载体的有效性,为CRISPR/Cas9系统在培育PVY抗性植株中的应用提供技术支持。【方法】构建靶向编辑番茄真核翻译起始因子elF4E1基因的CRISPR/Cas9系统表达载体,用农杆菌渗透法瞬时转化番茄植株,PCR扩增已转化植株靶位点周围DNA序列后用HaeⅢ进行酶切,回收未切开的条带与pGEM-T载体连接后进行单克隆测序。【结果】对测得的9个克隆序列进行比对分析,在PAM (protospacer adjacent motifs)上游的6~8 bp的碱基处均发生突变,并且都为单碱基的替换,导致多肽链中单个氨基酸的替换。【结论】利用CRISPR/Cas9基因组编辑系统构建的载体能够特异性地靶向加工番茄eIF4E1基因,为利用CRISPR/Cas9系统敲除eIF4E1基因,获得抗PVY病毒的番茄育种材料奠定了基础。 相似文献
12.
以碱加热裂解法从山西农业大学污水直接和间接排放处理池自然水样中分离细菌总DNA ,以细菌 16SrRNA基因特异性引物扩增 16SrRNA基因片段。采用T -A克隆系统克隆分子量为 1339bp的PCR产物 ,构建了rDNA亚克隆文库。用三种识别六碱基的限制性内切酶两两组合消化重组质粒。共分析了两个处理池自然水样各 30个rDNA重组质粒 ,分别发现 4种和 8种细菌rDNA基因型。各基因型频率的分布变化比较大 ,最高和最低的频率分别为 0 2 5和 0 0 1。部分基因型频率间差异显著 ,遗传多样性指数分别为 0 4和 0 9。 相似文献
13.
水貂自咬症SCAR标记的筛选 总被引：1，自引：0，他引：1
采用随机扩增多态DNA(RAPD)技术对健康和自咬水貂群体进行检测,并在此基础上进行了RAPD向序列特异性扩增(SCAR)标记的转化。从100个RAPD随机引物中筛选出5个重复性好的引物。通过对引物(A1)的扩增能够在两群体中找到差异标记(HA-400)和共有标记(SA-500),对其进行克隆、测序,并根据测序结果设计两对SCAR引物(SHA-400和SSA-500)。SHA-400和SSA-500在健康和自咬群体中均有扩增。其中,SHA-400在两个群体扩增频率分别为82.5%和22.5%,差异极显著(P0.001);SSA-500在两群体的扩增频率为87.5%和97.5%,差异不显著(P0.05)。结果表明:HA-400可初步作为区分健康和患病水貂群体的分子遗传标记。 相似文献
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口蹄疫病毒P1+2A基因真核表达载体的构建 总被引：4，自引：4，他引：4
通过RT-PCR方法获得了口蹄疫病毒O型,编号为OF3毒的P1+2A区的目的基因,并将其克隆到克隆载体pMD18-T上,再根据表达载体pQE-Trisystem的特性及酶切位点设计合适的表达引物.由表达引物通过PCR技术从克隆载体上扩增出带有特定酶切位点的目的片段,再对载体和目的片段进行酶切处理,处理后由T4 DNA连接酶将二者连接.通过PCR及酶切鉴定,结果证明口蹄疫病毒目的基因片段已被正确克隆到表达载体pQE-Trisystem上. 相似文献
15.
已知许多植物抗病基因的蛋白质产物具有保守的结构域 ,如NBS、LRR、TM等。根据烟草的N基因、亚麻的L6基因和拟南芥的RPS 2基因的保守序列设计了 1对简并引物 ,并以应县小黑豆基因组DNA为模板 ,PCR扩增获得 16个不同的RGA片段 ,大小在 470～5 45bp ,且不同程度地含有抗病基因的保守序列 ,如GGVGKTT、GSRII、GLPL等。与已知大豆、棉花RGA进行比较 ,发现该试验获得的大豆RGA和用相同引物扩增获得的棉花RGA核酸序列以及相应的氨基酸序列之间同源性较低 ,与已经克隆的大豆RGA及其氨基酸序列之间相似性较高。在分子水平揭示了大豆及棉花RGA的起源及其进化。 相似文献
16.
根据已发表的IL-18蛋白cDNA序列保守区设计一对特异性引物,应用RT-PCR技术从ConA活化的牛外周血单核细胞中扩增到编码牛IL-18蛋白基因,其大小为582 bp。将该基因克隆到pMD18-T载体中,经序列测定表明该基因与gengbank上发表的牛白细胞介素-18基因序列同源性为98%。将该基因从重组pMD-gIL-18质粒中亚克隆到表达载体pET-32 a（＋）质粒中,构建原核表达重组质粒,经酶切和PCR鉴定后表明构建的重组质粒为阳性。 相似文献
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猪胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白基因（0MP-1）的克隆、表达及其ELISA方法的建立 总被引：2，自引：0，他引：2
猪传染性胸膜肺炎由猪胸膜肺炎放线杆菌（APP）引起,是猪最重要的呼吸道传染病之一。通过筛选APP3～8kb随机基因组文库,获得1株阳性克隆。测序拯救质粒得到其DNA序列,通过BLAST分析确定此片段为APP外膜蛋白基因,预计成熟蛋白质的分子量为48．766kD。根据序列设计特异性引物,用PCR扩增该基因,分子克隆表达该外膜蛋白。Western blot结果表明,该蛋白与APP康复期血清发生反应。纯化该重组蛋白,并将其作为抗原包被ELISA酶标板,对已知阳性血清、阴性血清和临床送检血清样品进行ELISA检测,为最终建立APPELISA检测方法奠定了基础。 相似文献
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牛干扰素-γ基因的克隆与真核表达载体的构建 总被引：1，自引：0，他引：1
根据Genebank中已发表的INF-γ蛋白cDNA序列保守区设计一对特异性引物,应用RT-PCR技术从Con A活化的牛外周血单核细胞中扩增到编码牛INF-γ蛋白基因,其大小为510 bp左右。将该基因克隆到pMD18-T载体中,测序结果与Genebank上发表的INF-γ基因序列进行比较,其同源性为99.8%。将该基因从重组pMD18T-IFN质粒中克隆到表达载体pcDNA3.1(+)质粒中,构建真核表达重组质粒,经酶切和PCR鉴定后表明构建的重组质粒为阳性。 相似文献
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应用RAPD技术对5种麻黄亲缘关系进行了分析.从100条引物中筛选出18条重复性好,多态性高的随机引物.18条引物共扩增出103条带,其中多态性带为89条,占总扩增带的87.5%,平均每条引物扩增出4.9条多态性带.对这103条带进行聚类分析,结果表明:5个麻黄种间遗传差异明显,具有丰富的遗传多样性;膜果麻黄与其他4种药用麻黄的差异较大;木贼麻黄和斑子麻黄相对独立;草麻黄与中麻黄遗传距离较近,具有较为相似的遗传关系,这与传统的植物分类学结果一致,说明RAPD标记适用于麻黄植物的遗传多样性研究. 相似文献
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用50个随机引物对苹果梨及其11个变异单系进行RAPD分析．研究结果表明：50个随机引物中，有19个引物的扩增产物DNA片段表现出明显的多态性，其中每个引物对不同苹果梨变异单系扩增出现的DNA片段数目，少则2条，多达14条，平均为7条，DNA片段的长度为390bp～2000bp，并且不同的引物扩增出的DNA片段谱带不同，差异较大． 相似文献