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1.
根据GenBank数据库中的RH株弓形虫表面抗原1(SAG1)基因序列设计1对引物,应用PCR技术从弓形虫GJS株速殖子基因组DNA中扩增编码SAG1的基因片段.PCR产物经纯化、酶切后定向插入pcDNA3.1(+)真核表达载体,转化至大肠杆菌DH5α,经酶切及PCR鉴定后测序,并进行序列分析.结果表明:从弓形虫GJS株基因组DNA中扩增出1 008 bp的特异SAG1片段,大小与预测值相符,与已知的SAG1基因核苷酸序列(GenBank登录号:S76248)的ORF和氨基酸序列的同源性均为99%. 相似文献
2.
【目的】研究奶牛乳腺炎源大肠杆菌中耶尔森菌HPI携带情况及其与O血清型的关系,并对部分菌株的相关基因序列进行分析。【方法】从中国北京、内蒙古、甘肃、四川、重庆、云南、贵州等7个省市部分地区1 260份临床型和隐性奶牛乳腺炎奶样中分离得到190株大肠杆菌,对分离菌株进行耶尔森菌强毒力岛核心区irp2基因、fyuA基因及HPI毒力岛在大肠杆菌染色体中插入位置的鉴定,分析HPI毒力岛的携带情况及其与分离菌株O血清型之间的关系。【结果】190株大肠杆菌分离株中,irp2基因阳性率为26.31%（50/190）,fyuA基因阳性率为18.94%（36/190）。50株HPI+分离株中检出asn_tRNA_intB 基因32株,阳性率为64%（32/50）。本试验克隆的irp2基因(273 bp）、fyuA基因(1 071 bp）、asn_tRNA_intB基因(1 512 bp）均与已发表序列高度同源,同源性分别在97.1%、98.2%、97.2%以上,且其HPI毒力岛大多位于大肠杆菌染色体的asn_tRNA位点上。【结论】耶尔森菌HPI在奶牛乳腺炎源大肠杆菌中广泛流行分布,但也存在差异,而不同血清型菌株携带HPI的倾向性可能只与特定的血清型有一定的关系。 相似文献
3.
提取禽多杀性巴氏杆菌分离株Pm27基因组DNA,参考GenBank中Pm70株ompW基因序列设计引物,应用PCR技术扩增了细菌ompW基因,将扩增片段克隆到pMD18-T载体后测序。生物信息学分析表明,该基因编码区长度为615bp,编码204个氨基酸;氨基酸序列与参考株Pm70 OmpW蛋白的同源性最高,达98%;与睡眠嗜血杆菌的同源性77%,与琥珀酸产生菌的同源性为69.3%,与霍乱弧菌、大肠杆菌、耶尔森菌的同源性为50%左右。OmpW蛋白前21个氨基酸残基为信号肽序列,潜在的糖基化位点位于第122位氨基酸残基。 相似文献
4.
采集新疆奶牛隐性乳腺炎乳样,经分离、鉴定,从中得到金黄色葡萄球菌,参考GenBank中发表的FnbpA基因序列,用Oligo 6.0软件设计一对特异性引物。提取分离株中的基因组DNA,经PCR扩增得到1 654 bp的目的片段FnbpA,将其插入PMD18-T克隆载体中构建PMD18-FnbpA重组质粒,将其转入到大肠杆菌DH5α中,并进行测序分析。结果表明,克隆的FnbpA基因片段全长1 654 bp,共编码314个氨基酸。分析表明,FnbpA蛋白基因潜在的蛋白质抗原决定簇有17个,抗原性很强,与16株FnbpA基因标准序列的同源性为77.1%~100%,本研究所克隆的FnbpA基因与AM990992株亲缘性最近。 相似文献
5.
根据GenBank中已发表的传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因,设计并合成了1对引物,采用RT-PCR技术扩增鸡传染性支气管炎病毒河南分离株(HN0501)S1基因,并进行克隆和测序.结果表明,所克隆的片段大小为1739 bp,包含S1基因和部分S2基因,S蛋白切割识别位点序列为RRSRR.序列比较分析发现,IBV HN0501株S1基因与澳大利亚N1株、吉林JAAS株S1基因核苷酸同源性分别为99.6%,99.8%,氨基酸同源性均为99.3%,而与其它支气管炎病毒株核苷酸同源性为66.4%~85.2%.通过IBV S1基因系统进化分析,结果发现HN0501株与N1株、JAAS株的亲缘关系近,而与其它支气管炎病毒株的亲缘关系均较远.进一步证实IBVHN0501株为IBV肾型株. 相似文献
6.
[目的]探索大肠杆菌导致仔貉腹泻的发病机理。[方法]对分离鉴定的大肠杆菌进行了血清型鉴定,采用PCR方法检测HPI毒力岛基因irp2和fyuA,扩增产物进行序列测定。[结果]分离到2株貉源大肠杆菌,血清型分别为O23和O20,2株菌均检测到HPI毒力岛irp2基因(301bp)和fyuA基因(953bp);2株菌irp2基因与GenBank中的大肠杆菌irp2基因的同源性为98.5%～99.2%,2株菌间irp2基因同源性为99.3%;2株菌fyuA基因与GenBank中的fyuA基因序列的同源性为98.9%～100%,2株菌间fyuA基因同源性为98.9%。[结论]本试验结果为大肠杆菌导致仔貉腹泻的发病机理提供了科学的实验数据,为今后该疾病的预防、诊断和治疗提供了重要参考。 相似文献
7.
将PCR方法扩增出的犊牛腹泻大肠杆菌Ler、eaeA、irp2和fyuA基因片段产物进行胶回收,连接到pMD18-T Vector上转化DH5α感受态细胞后送TaKaRa公司测序。结果表明犊牛腹泻大肠杆菌Ler、eaeA、irp2和fyuA基因片段的PCR扩增产物分别是196 bp、552 bp、301 bp、953 bp。用DNAStar软件对犊牛腹泻大肠杆菌Ler、eaeA、irp2和fyuA基因片段序列与GenBank中报道的相应参考菌株各基因片段进行核苷酸同源性比较分析,同源性高达88.3%~100%,说明上述4个基因片段具有较高的同源保守性。 相似文献
8.
从北京凉水河床底泥中分离得到一株能在含450 mg/L CdCl2的LB平板正常生长的高抗镉细菌,编号为KCd1。16S rDNA序列分析结果显示,该菌株与Bacillus cereusATCC 14579T的序列同源性达99%;结合脂肪酸测定与生理生化测定结果,确定该菌株在分类上属于Bacillus cereus。根据GenBank中已发表的抗镉细菌cadA序列设计了巢式引物,以菌株KCd1基因组DNA为模板,扩增得到约500 bp的PCR产物,将该PCR产物克隆于pGEM T-Easy载体,测序结果显示其大小为468 bp,与已报道的Staphylococcus haemolyticus的cadA基因对应序列相似性达到99%,由此可知本实验所获得到468 bp基因片段为cadA基因的一段保守序列。该菌株cadA全长基因的获取工作还有待于进一步展开。 相似文献
9.
为克隆并分析新城疫病毒ND-xx08株 HN 基因,将其分离、纯化、培养,提取其病毒的基因组RNA,RT-PCR扩增获得与HN基因预期大小一致的DNA片段,克隆到pMD18-T载体,经EcoR I和Hind III进行双酶切鉴定和测序鉴定.ND-xx08 HN基因的序列长度为1 716 bp,共编码571个氨基酸.与已发表的24株 NDV HN序列的同源性分析表明,其核苷酸序列的同源性在80.0%～98.4%,氨基酸同源性在87.2%～98.2%.研究结果表明,ND-xx08具有强毒株的特性. 相似文献
10.
马巴贝斯虫18S rRNA基因吉林省分离株的序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
为分析马巴贝斯虫吉林省分离株的18S rRNA基因序列，根据马巴贝斯虫18S rRNA基因序列设计1对引物，对吉林省的马匹血液基因组DNA进行PCR扩增，PCR产物进行克隆、测序，扩增出大小为435bp的马巴贝斯虫18S rRNA基因片段．序列分析显示，马巴贝斯虫吉林省分离株与南非株同源性最高，为98．4％． 相似文献
11.
JIN Wen-jie ZHENG Zhi-ming ZHANG Yong-zhi QIN Ai-jian SHAO Hong-xia LIU Yue-long WANG Jiao WANG Qian-qian 《中国农业科学(英文版)》2008,7(12)
216 avian pathogenic Escherichia coli (APEC) isolates were obtained from poultry with colibacillosis in different areas of China. Among them, 195 were serotyped as O78, O88, and O93. Thirteen virulence-associated genes, including fimC, iucD, iss, tsh, fyuA, irp2, eaeA, hlyE, colV, papC, stx2f, vat, and astA, were submitted to PCR amplification. The fimC gene was the most prevalent with a detection rate of 93.6%, followed by iucD (70.8%), iss (58.8%), and tsh (51.4%) in APEC isolates. The detection rate of high pathogenicity islands (HPI)-associatedfyuA and irp2 genes were both 44.9%, with no LEE (the locus of enterocyte effacement) island-associated gene eaeA detected. In terms of distribution patterns of the 13 virulence-associated genes, 5 isolates harborbed 10 genes, 19 isolates contained only fimC gene, and only 4 isolates had no virulence-associated gene detected. Different correlations of the virulence-associated genes with O serotypes were also investigated and 50% O78 isolates had a gene distribution patterns of fimC+iucD+irp2+fyuA+iss+colV+tsh+. 相似文献
12.
Wen-jie JIN Zhi-ming ZHENG Yong-zhi ZHANG Ai-jian QIN Hong-xia SHAO Yue-long LIU Jiao WANG Qian-qian WANG 《中国农业科学(英文版)》2008,7(12):1511-1515
216 avian pathogenic Escherichia coli （APEC） isolates were obtained from poultry with colibacillosis in different areas of China. Among them, 195 were serotyped as 078, 088, and 093. Thirteen virulence-associated genes, including fimC, iucD, iss, tsh, fyuA, irp2, eaeA, hlyE, colV, papC, stx2f, vat, and astA, were submitted to PCR amplification. The fimC gene was the most prevalent with a detection rate of 93.6%, followed by iucD （70.8%）, iss （58.8%）, and tsh （51.4%） in APEC isolates. The detection rate of high pathogenicity islands （HPI）-associatedfyuA and irp2 genes were both 44.9%, with no LEE （the locus of enterocyte effacement） island-associated gene eaeA detected. In terms of distribution patterns of the 13 virulence-associated genes, 5 isolates harborbed 10 genes, 19 isolates contained onlyfimC gene, and only 4 isolates had no virulence-associated gene detected. Different correlations of the virulence-associated genes with O serotypes were also investigated and 50% 078 isolates had a gene distribution patterns of fimC^＋iucD^＋irp2^＋fyuA^＋iss^＋colV^＋tsh^＋. 相似文献
13.
为了探究内皮源IL-8对猪血管内皮细胞其他相关细胞因子表达的影响,解析IL-8在内皮细胞中作用,利用siRNA干扰技术对猪血管内皮细胞（VEC）中IL-8基因进行沉默,于干扰后不同时间收集细胞及上清,应用荧光定量PCR技术和ELISA检测VEC中各细胞因子的变化.结果显示,在mRNA水平上,促炎因子IL-6和促内皮生长因子（VEGF）在12h上调显著,且在4 h VEGF显著上调;ICAM-1和VCAM-1在4h显著上调,其中ICAM-1在48 h极显著下调,72 h又显著上调;巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）几个时间段均极显著高于对照组.蛋白水平上,VEGF除48 h外均显著高于对照组,M-CSF在4h后均显著低于对照组.以上数据表明,内皮源IL-8变化可能影响VEC增殖、迁移以及对造血干细胞分化. 相似文献
14.
运输应激对刀鲚生理生化指标和HPI轴基因表达影响及甘草甜素的作用 总被引：3，自引：0，他引：3
以刀鲚(Coilia nasus)为研究对象,运用荧光定量和相关生化测定方法,研究运输应激对下丘脑-垂体-肾间组织轴(HPI)基因表达和肝脏氧化指标的影响;同时采用浸泡的方式研究甘草甜素(glycyrrhizin,GL)对以上指标的调控作用。结果显示:运输后,脑中促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)基因、阿黑皮素原(POMC)基因和硬骨鱼紧张肽(UI)基因的表达水平显著降低;头肾中皮质醇受体(GR)基因的表达水平运输2 h明显下降,4 h时表达水平最低,8 h显著升高。运输应激可以明显降低肝脏过氧化氢酶(CAT)的活性,显著提高肝脏丙二醛(MDA)的水平,而对谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和脂质过氧化物(LPO)无显著影响。添加甘草甜素6 h后头肾GR基因的表达水平降低,脑中CRH和POMC基因的表达水平显著升高,但是脑中UI基因的表达水平无明显变化。此外,添加甘草甜素对肝脏CAT、MDA、GSH-PX和LPO无显著影响。以上结果表明,运输应激调控HPI轴的基因表达发生了不同程度的变化,而且降低了机体的抗氧化能力,使刀鲚处于氧化应激状态中。GL也可以影响HPI轴的基因表达,但不能有效缓解刀鲚的运输应激引发的氧化应激。 相似文献
15.
根据已知植物抗病基因编码的蛋白质NBS-LRR保守结构设计了6对特异简并引物,对20份抗小麦白粉病野生二粒小麦的基因组DNA进行抗病基因同源序列克隆,共获得22条抗病基因同源序列(Resistance gene ana-logs,RGAs)。同源性比较发现,这22条RGAs均属于NBS-LRR类抗病基因类似序列,与已知R基因相应区段的氨基酸序列一致性为6.1%~99.6%。同时,利用MEGA 3.1将这22条序列划分为9类。本研究在野生二粒小麦中获得的RGAs既可进一步用于筛选野生二粒小麦的抗病候选基因,同时也可以作为分子标记,用于二粒系小麦遗传图谱的构建。该研究表明R基因同源克隆技术有望成为野生二粒小麦R基因克隆和基因组研究的重要手段。 相似文献
16.
仔猪大肠杆菌性腹泻的病原检测与免疫防制 总被引：2，自引：1，他引：1
以江苏姜曲海种猪场的仔猪腹泻病症为研究对象,研究合成了检测肠毒素(ST1、ST2、LT1)、菌毛(K88、K99、987P、F41)以及耶尔森氏菌强毒力岛(high pathogenicity island,HPI)核心基因的特异性引物,用PCR方法对产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenicE.coli,ETEC)和HPI+大肠杆菌进行检测,并对致病性大肠杆菌的免疫防治进行了研究.结果表明:该猪场62.5%的病例存在HPI+大肠杆菌感染,12.5%的病例存在HPI+大肠杆菌及ETEC感染,仅有5%的病例与ETEC感染相关.取分离鉴定的2株大肠杆菌制备灭活抗原,并以氢氧化铝胶为佐剂免疫接种母猪,结果表明,其所产仔猪的腹泻发病率为15.2%,保护率高于仔猪大肠杆菌三价灭活疫苗. 相似文献
17.
利用Ａｕｓ３７３／ＩＲ３６／／Ｂａｌｉｌａ和Ａｕｓ３７３／ＩＲ３６／／秋光２个三交Ｆ１群体对秋稻品种Ａｕｓ３７３的广亲和性进行了遗传分析，发现这两个群体内不同个体的小穗育性有着明显的分离，呈单峰连续分布。小穗育性的高低与稃尖色之间存在连锁关系。用Ａｕｓ３７３／ＩＲ３６／／Ｂａｌｉｌａ群体构建第６染色体的ＲＦＬＰ框架图，并对亲和性基因进行了定位。在第６染色体上发现有２个来自Ａｕｓ３７３区段对小穗育性有直接贡献，其联合效应可以解释总变异的３８．４％。其中位于Ｇ２００和Ｃ基因之间的可能就是Ｓｎ５，位于Ｇ１２２和Ｇ３２９之间的可能是另一个亲和性基因。 相似文献
18.
PCV2感染猪血管内皮细胞相关免疫调节分子的表达变化 总被引：1，自引：1，他引：0
将猪圆环病毒2型(PCV2)接种猪血管内皮细胞(VEC),于接种后不同时间收集细胞及上清,利用实时荧光定量PCR和ELISA技术分析VEC相关免疫调节分子表达变化。与对照组相比,PCV2感染后血管内皮生长因子(VEGF)、IL-6与巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的mRNA水平变化趋势基本一致,VEGF和M-CSF在感染后12h显著上调,IL-6与M-CSF在48h显著下调;MCP-1和IL-8在感染后4h和48h均显著上调,且IL-8在24h时上调显著,72h下调显著。蛋白水平上,VEGF在4h显著下降,24h显著增高;IL-8在4h和24h显著上升。以上结果表明,PCV2体外感染导致VEC免疫调节功能分子表达异常,其炎性趋化、黏附能力以及对树突状细胞(DC)的分化、成熟等免疫调节功能可能受到影响。 相似文献
19.
兔病毒性出血症弥漫性血管内凝血动态研究 总被引：1，自引：0，他引：1
对兔出血症的凝血象和组织病理学变化进行了动态研究。结果表明：兔出血症伴有弥漫性血管内凝血（ＤＩＣ）病理过程，并呈动态发展规律。凝血象检测发现：感染后６ｈ凝血酶原时间（ＰＴ）、白陶土部分凝血活酶时间（ＫＰＴＴ）缩短或正常，为高凝期，该期短，很快进入低凝期。感染后１８ｈＰＴ、ＫＰＴＴ显著延长，死前更明显。血小板数（ＰＣ）呈渐进性降低，纤维蛋白（原）降解产物（ＦＤＰ）在感染后６ｈ显著增加（Ｐ＜０．０１），感染后１８ｈ达高峰值。组织病理学观察表明：肺的病变严重而且有规律，感染后１２ｈ肺的微血栓检出率最高，同时在心、肝、肾、脑等器官也见微血栓。感染后２４ｈ或死兔的肺出血严重，血栓少见，表现为纤溶亢进的特征性变化。此外，患出血症的兔血管壁早期损伤明显，先于高凝期，可能是ＤＩＣ的启动因素之一。 相似文献