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Bloom综合症(Bloom's syndrome)是人类一种少见的常染色体隐性遗传疾病,BLM基因突变导致这种疾病的发生,患者染色体极不稳定,是多种癌症的易患体,其致病机理不清楚.该研究在优化诱导表达温度、时间、IPTG质量浓度、pH值、培养基种类以及培养基成分的基础上,建立了BLM642-1290重组蛋白表达、分离和纯化方法.最优表达务件为IPTG 0.45 mmol/L,诱导温度18℃,诱导表达时间20 h,pH值7.0.在LB培养基中添加终质量浓度为5 mmol/L的EDTA能够增加蛋白的表达量.该实验所建立的方法为进一步开展Bloom综合症的研究奠定了基础. 相似文献
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研究了培养温度、培养时间、培养基pH值以及异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-D-galacto-side,IPTG)浓度等不同条件对鸡毒霉形体黏附素截短蛋白在大肠杆菌中表达量的影响。经SDS-PAGE分析表明:诱导温度为28℃、诱导时间为9 h、培养基pH值为7.0、IPTG浓度为0.010 mmol/L时目的蛋白在细菌裂解沉淀和上清液中均最大量表达,分别达到30%和17%左右。上清液经GST.Bind Resin亲和层析分离纯化后,洗脱产物中pMGAⅣ融合蛋白纯度高达95%。Western-blot分析表明,该蛋白可被鸡毒霉形体阳性血清识别,具有较好的免疫学活性。 相似文献
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用构建的人基质蛋白酶-2（MMP-2）类血红素结构域原核表达载体PET25b—PEX转化大肠杆菌BL21（DE3），筛选阳性菌落LB液体培养基培养，异丙基-β—D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达产生的表达蛋白，大小约29kD，与预期大小相符。设置不同的IPTG诱导终浓度，诱导时间，诱导时菌液OD值和LB液体培养基的pH值，SDS-PAGE电泳和软件分析发现，当IPTG浓度为0．7mmol／L，诱导4h，诱导时菌液OD值为0．7时，实验能获得最高的PEX蛋白表达；5L大规模培养时，LB培养基pH值为7．5时，可获得较高的重组PEX蛋白表达。 相似文献
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利用 IPTG 作为诱导剂进行鸡β 防御素 3 基因重组蛋白的表达,探讨工程化生产的可能性。分别对影响重组蛋白表达的因素（IPTG浓度、诱导时机、诱导时间、诱导温度和溶氧量）进行优化,最终得到最佳的IPTG诱导条件： IPTG的终浓度为0.6 mmol/L，诱导起始吸光度A600为0.6，最适溶氧量为150 mL 三角瓶装50 mL培养基，且在 33 ℃ 下诱导4 h 重组蛋白表达量达到最大。该方法为工程化生产提供良好的试验依据。 相似文献
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嗜水气单胞菌与迟顿爱德华氏菌二联外膜蛋白的表达及其初步免疫原性 总被引：1，自引：0，他引：1
在构建鳗鲡病原性嗜水气单胞菌与爱德华氏菌二联外膜蛋白重组表达载体的基础上,采用不同的诱导剂(IPTG)浓度、诱导温度、诱导时间和诱导时菌液浓度对重组表达载体的表达条件进行探讨。结果表明,不同诱导剂(IPTG)浓度、诱导温度、诱导时间和诱导时菌液浓度对该载体的表达无明显影响。在菌液浓度D600nm=0.8时,采用0.25mmol/L的IPTG经16℃诱导培养过夜后表达。表达产物采用KTApurifier-100蛋白质纯化仪,结合His标签柱亲和层析后获得分子质量87.1ku的高纯度蛋白。蛋白经透析复性后免疫鳗鲡以初步研究其免疫原性。结果表明,免疫后第28天,重组蛋白不同剂量注射组的鳗鲡血清中抗体效价均显著高于PBS注射对照组,初步表明该重组表达蛋白具有良好的免疫原性。 相似文献
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[目的]研究拟南芥AtXCD1蛋白的原核表达.[方法]构建XCD1原核表达载体,根据NCBI基因序列设计引物,并以PCR扩增得到大量目的片段XCD1,将XCD1连接到原核表达载体pET-32a＋,并对重组质粒进行测序鉴定,将重组质粒转化至大肠杆菌原核表达菌株BL21（DE3）,对蛋白表达条件：诱导时间、诱导温度和IPTG浓度等进行优化.IPTG诱导表达获得目的蛋白,对蛋白表达条件：诱导时间、诱导温度和IPTG浓度等进行优化.[结果]XCD1序列全长为1 242bp,与PCR产物大小一致.蛋白XCD1-pET-32a＋较适表达条件为在30℃0.1 mmol/L的IPTG诱导1.5h.[结论]该结果为进一步蛋白纯化及酶活测定试验奠定了基础. 相似文献
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[目的]构建缬氨酸转氨酶基因(avtA)的大肠杆菌工程菌,并优化其表达条件。[方法]将avtA基因插入到载体pET32a中,构建表达质粒pET32a-avtA,通过纸层析检测酶活性,SDS-PAGE凝胶电泳检测目的蛋白,并通过考察培养基中蛋白胨浓度、IPTG诱导浓度和诱导时间来优化其表达条件。[结果]成功构建了缬氨酸转氨酶基因的大肠杆菌工程菌,其最佳表达条件为:培养基中蛋白胨浓度为12g/L,IPTG浓度为0.4 mmol/L,诱导时间为8 h。[结论]缬氨酸转氨酶工程菌具有良好的应用前景。 相似文献
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3种鱼群个体间距的计算方法比较 总被引：2，自引：0，他引：2
对实验室水族箱中的鱼群空间分布状态进行录像,采用质心法、线段法和三点折线法计算个体间距离。结果表明,由3种方法计算获得的个体间距值均随着群体的个体尾数的增加而趋近于0.5～2倍体长(BL)的范围内。线段法与三点折线法的计算结果基本相同,而质心法的计算结果的精度低于其它两种方法。在间距大于0.2 BL时,三点折线法计算得到的个体间距的频率分布普遍高于线段法,计算结果更准确。同时线段法和三点质心法所获得的个体间距在0.6～0.8 BL范围内的频率达到最大,该范围为鱼类偏好的距离范围。 相似文献
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Bloom syndrome, characterized by a predisposition to cancer, is caused by mutation of the RecQ DNA helicase gene BLM. The precise function of BLM remains unclear. Previous research suggested that Drosophila BLM functions in the repair of DNA double-strand breaks. Most double-strand breaks in flies are repaired by homologous recombination through the synthesis-dependent strand-annealing pathway. Here, we demonstrate that Drosophila BLM mutants are severely impaired in their ability to carry out repair DNA synthesis during synthesis-dependent strand annealing. Consequently, repair in the mutants is completed by error-prone pathways that create large deletions. These results suggest a model in which BLM maintains genomic stability by promoting efficient repair DNA synthesis and thereby prevents double-strand break repair by less precise pathways. 相似文献
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砷硒胁迫对小麦毒性效应及预测模型研究 总被引：2，自引：1，他引：1
为阐明含氧阴离子型类金属As-Se的联合毒性及其相互作用,以小麦(TriticumaestivumL.)作为模式植物,溶液体系为毒性测试介质,以小麦相对根伸长为毒性终点,系统考察了As、Se单独和复合情况下对小麦的毒性效应,并构建兼具机理性与普适性的模型来预测和评估As-Se的生态毒性效应和风险。结果表明:As、Se单独作用于小麦时,二者都具毒性,基于自由离子活度的EC50值分别为2.88μmol L-1和43.51μmol L-1,说明As的毒性远大于Se。在As-Se混合体系中,不论是何种剂量表达形式(溶解浓度和自由离子活度剂量),一种阴离子金属的存在都会影响另一种阴离子金属的植物毒性。利用传统浓度加和及独立作用(CA/IA)模型分析和预测As-Se联合毒性作用时,两种模型均高估了其联合毒性,表明As-Se联合作用于小麦时表现为强烈的拮抗作用。进一步将As-Se交互作用纳入在内,构建的阴离子型金属生物配体模型(BLM),可以很好地解释并预测As-Se混合物的交互作用及毒性,拟合度达到0.90,As、Se和生物配体的络合平衡常数分别为logKAsBL=3.28和logKSeBL=1.93。研究表明:BLM框架可拓展应用于含氧阴离子型类金属的毒性预测,为含氧阴离子型类金属联合毒性的精确预测与风险评估提供有效手段。 相似文献
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Enhanced tumor formation in mice heterozygous for Blm mutation 总被引：1，自引：0，他引：1
Goss KH Risinger MA Kordich JJ Sanz MM Straughen JE Slovek LE Capobianco AJ German J Boivin GP Groden J 《Science (New York, N.Y.)》2002,297(5589):2051-2053
Persons with the autosomal recessive disorder Bloom syndrome are predisposed to cancers of many types due to loss-of-function mutations in the BLM gene, which encodes a recQ-like helicase. Here we show that mice heterozygous for a targeted null mutation of Blm, the murine homolog of BLM, develop lymphoma earlier than wild-type littermates in response to challenge with murine leukemia virus and develop twice the number of intestinal tumors when crossed with mice carrying a mutation in the Apc tumor suppressor. These observations indicate that Blm is a modifier of tumor formation in the mouse and that Blm haploinsufficiency is associated with tumor predisposition, a finding with important implications for cancer risk in humans. 相似文献
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玉米热激蛋白70基因对温度胁迫的响应 总被引：3，自引：0，他引：3
利用RT-PCR技术从玉米自交系H21叶片中克隆获得一热激蛋白70(HSP70)基因的完整开放阅读框,全长1 737 bp,编码578个氨基酸,命名为ZmHSP70。编码的氨基酸与其他作物比对分析表明,ZmHSP70与高粱中一推测的蛋白(SbHSP70,XP_002465635)同源性最高,达95%,与水稻中一推测的蛋白(OsHSP70,EAY89062)同源性达87%。半定量RT-PCR的结果表明,该基因明显受42℃热激诱导表达,热激2 h其表达量达最大值;4℃冷胁迫也能诱导ZmHSP70表达量增加,冷胁迫4 h,其表达量达最大值。ZmHSP70是一个受温度诱导的热激蛋白。 相似文献
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二色补血草硫氧还蛋白过氧化物酶基因LbTPx的克隆及其表达 总被引：1，自引：0，他引：1
从二色补血草(Limonium bicolor)cDNA文库中分离出一个新的硫氧还蛋白过氧化物酶基因(LbTPx)全长cDNA序列.基因全长1016 bp,其中:5'非翻译区146 bp,3'非翻译区69 bp,开放读码框(ORF)801 bp,共编 码266个氨基酸;编码蛋白的分子质量为47.99× 10-24... 相似文献
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【目的】克隆番茄（Solanum lycopersicum）抗病品种吉美08二氢黄酮醇4-还原酶（dihydroflavonol 4-reductase,DFR）基因,并分析枯萎病菌尖孢镰刀菌番茄专化型（Fol4287）诱导下其在番茄不同组织中的表达模式,为深入研究SlDFR基因在番茄抗病过程中的调控机制提供理论依据。【方法】采用同源克隆技术从番茄中克隆SlDFR基因cDNA全长序列,并进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测番茄根、茎、叶中SlDFR基因在枯萎病菌诱导下的表达模式。【结果】从番茄抗病栽培品种吉美08中克隆得到SlDFR基因,cDNA序列全长1659 bp,包含1个1149 bp的开放阅读框（ORF）,编码379个氨基酸。SlDFR蛋白的相对分子质量为42.43 kD,等电点（pI）为6.08,是一个亲水的、稳定的酸性蛋白,亚细胞定位在高尔基体上,无信号肽和跨膜结构域,有38个磷酸化位点,其中,丝氨酸18个,苏氨酸15个,酪氨酸5个。SlDFR蛋白的二级结构中α-螺旋占37.73%,延伸链占13.98%,无规则卷曲占40.69%。系统发育进化树分析结果表明,SlDFR蛋白序列与同属茄科马铃薯（Solanum pennellii）亲缘关系较近,其次为黑果枸杞（Lycium ruthenicum）。qRT-PCR分析结果显示,SlDFR基因在番茄叶中表达量最高,在根中表达量最低。SlDFR基因在番茄根、茎、叶中表达量受番茄枯萎病菌诱导,均呈现不同程度上调,其中,在根中表达量变化最大,在叶中表达量变化较小,推测SlDFR基因的表达量与番茄枯萎病菌胁迫响应有关,且番茄根部类黄酮的合成为重要胁迫响应途径。【结论】SlDFR基因表达量受Fol4287的诱导,可能参与番茄枯萎病胁迫响应过程,且对番茄枯萎病菌的响应在番茄根部更强烈,并通过调控番茄根部黄酮类物质的合成提高根系分泌物的抑菌活性从而增强番茄对枯萎病的抗性。 相似文献
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目的:探索羟基喜树碱对乳腺癌细胞MCF-7细胞信号转导相关基因金属蛋白酶组织抑制剂-3(TIMP-3)表达的影响,寻找羟基喜树碱(HCPT)在乳腺癌治疗中的潜在新靶点.方法:分别采用Q-PCR,Western-blot和免疫细胞化学等方法验证不同剂量组HCPT诱导MCF-7细胞的TIMP-3表达特征.结果:不同质量浓度的HCPT均可在mRNA水平和蛋白水平诱导MCF-7细胞的TIMP-3表达上调,且具有统计学意义,与前期的基因芯片研究结果相符合;实验同时观察了HCPT对细胞侵袭迁移能力的影响,结果亦显示HCPT可在TIMP-3表达上调的同时抑制细胞侵袭迁移能力.结论:HCPT可诱导乳腺癌细胞的TIMP-3上调表达,抑制细胞侵袭能力. 相似文献
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TRAIL与5-FU联合诱导白血病细胞凋亡的分子机理研究 总被引：1，自引：1，他引：0
用凋亡诱导配体（TRAIL）及5-氟尿嘧啶（5-FU）联合刺激Jurkat细胞36h,以诱导细胞凋亡;用流式细胞术和MTS比色法检测细胞存活率,计算细胞凋亡率;用免疫印迹（western b-lotting）检测p53的表达和胱天肽酶-3、胱天肽酶-8的变化。结果表明：5-FU能有效增加TRAIL诱导的Jurkat细胞凋亡,并伴随p53表达增加及胱天肽酶-3和胱天肽酶-8的活性增加,提示TRAIL和5-FU联合诱导的T淋巴白血病细胞凋亡的分子机制与p53及胱天肽酶-3、胱天肽酶-8有关,为TRAIL和5-FU联合用于治疗白血病提供理论依据。 相似文献
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【目的】分析BnMAPK1组织特异性表达特征,探究其在损伤和病原菌胁迫下的特征及参加的信号途径。【方法】在电子克隆的基础上,克隆BnMAPK1的启动子序列。利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测BnMAPK1的诱导表达特征。【结果】从甘蓝型油菜中克隆了MAPK1的启动子序列,发现它含有多个激素响应元件和逆境胁迫响应元件。还发现植物激素茉莉酸甲酯（MeJA）、水杨酸（SA）、脱落酸（ABA）和过氧化氢（H2O2）,及损伤（wound）和核盘菌（sclerotinia sclerotiorum）均能在转录水平上激活BnMAPK1。甘蓝型油菜在损伤和接种核菌盘后,JA信号途径标志基因PDF1.2的表达量被诱导上升,而SA信号途径标志基因PR-1被抑制,推测甘蓝型油菜可能是通过茉莉酸（jasmonic acid,JA）信号途径响应损伤和病原菌入侵。【结论】甘蓝型油菜MAPK1受多种植物激素和胁迫的诱导,并且其启动子中含有多个激素响应元件和逆境胁迫响应元件,可能MAPK1在植物体抵抗外界多种胁迫中起重要作用,并且甘蓝型油菜可能是通过JA信号途径对损伤和病原菌入侵做出响应。 相似文献