鸡毒霉形体黏附素截短蛋白表达条件的优化     

高俊伟  毕丁仁  胡思顺  彭秀丽 《华中农业大学学报》2007,26(4):514-518

研究了培养温度、培养时间、培养基pH值以及异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-D-galacto-side,IPTG)浓度等不同条件对鸡毒霉形体黏附素截短蛋白在大肠杆菌中表达量的影响。经SDS-PAGE分析表明:诱导温度为28℃、诱导时间为9 h、培养基pH值为7.0、IPTG浓度为0.010 mmol/L时目的蛋白在细菌裂解沉淀和上清液中均最大量表达,分别达到30%和17%左右。上清液经GST.Bind Resin亲和层析分离纯化后,洗脱产物中pMGAⅣ融合蛋白纯度高达95%。Western-blot分析表明,该蛋白可被鸡毒霉形体阳性血清识别,具有较好的免疫学活性。  相似文献   

鸡毒霉形体黏附蛋白与鸡胚不同组织黏附特异性的研究     

彭秀丽  高俊伟  胡思顺  胡福利  毕丁仁 《农业生物技术学报》2008,16(5)

利用pGEX融合蛋白表达系统,将鸡毒霉形体黏附蛋白（pMGA）在大肠杆菌BL21中表达,经 GST·Bind Resin 纯化,用蛋白酶Thrombin切掉GST标签,获得纯度为96%的pMGA,Western-blot鉴定具有良好的免疫学活性。通过间接免疫荧光组织化学法（IFA）来检测pMGA与SPF鸡胚的气管、心脏、肝脏、肺脏、肾脏、腺胃、十二指肠、法氏囊、胸腺和脾脏等组织的特异性结合情况,结果表明,除脾脏外,其余组织与pMGA之间能产生特异性结合,说明这些组织中存在pMGA的受体蛋白。这为进一步研究pMGA的受体提供理论依据。  相似文献   

鸡胚组织膜蛋白与鸡毒霉形体黏附蛋白的结合分析     

彭秀丽  高俊伟  胡思顺  胡福利  毕丁仁 《畜牧兽医学报》2008,39(12)

利用pGEX融合蛋白表达系统,将鸡毒霉形体黏附蛋白（pMGA）与GST的编码序列在大肠杆菌BL21中进行融合表达,经GST·BindResin纯化,GST—pMGA的纯度达96％。用蛋白酶Thrombin切掉GST标签,获得纯度为96％的pMGA,经Western—blot鉴定具有良好的免疫学活性。通过差速离心法提取SPF鸡胚的气管、心脏、肝脏、肺脏、肾脏、腺胃、十二指肠、法氏囊、胸腺和脾脏等组织膜蛋白,采用斑点酶联免疫吸附试验（Dot—ELISA）检测各组织膜蛋白与pMGA的结合。结果表明：除脾脏外,其余组织的膜蛋白与pMGA之间存在特异性结合,说明这些组织膜蛋白中存在pMGA的受体蛋白。经SDS-PAGE分析发现,除脾脏外,其余9种组织的膜蛋白中均含有一条相对分子质量约为30ku的主带,受体的相对分子质量可能为30ku,可为深入研究pMGA的受体蛋白提供资料。  相似文献   

大口径毛细管气相色谱法测定嗪草酮原药含量研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

秦金平  徐董育  高俊伟  徐艳莉 《河南农业科学》2009,(5)

采用自制的SE-30大口径毛细管柱,以邻苯二甲酸二丁酯为内标物,不分流进样,FID检测,建立了测定嗪草酮原药的色谱分析方法。结果表明,在所选择的色谱条件下,嗪草酮和内标物在6.0min内很好地分离;嗪草酮与内标物质量比与它们的峰面积比有良好的线性关系,相关系数为0.9999;样品加标回收率为99.1%~100.4%;相对标准偏差为0.079%。  相似文献   

大口径毛细管气相色谱法测定三唑酮原药     

秦金平  徐董育  高俊伟  徐艳莉 《安徽农业科学》2008,36(26)

[目的]建立以邻苯二甲酸二戊酯为内标物,用大口径毛细管气相色谱测定三唑酮原药的方法。[方法]以自制的大口径SE-30毛细管柱分离,火焰离子化检测器测定。用保留时间定性,内标法定量。[结果]结果表明,在所选择的色谱条件下,三唑酮和内标物在10min内很好地分离;三唑酮与内标物质量浓度比与它们的峰面积比有良好的线性关系,相关系数为0.999 9;样品加标回收率为99.7%~100.4%,相对标准偏差为0.053%。[结论]该方法操作简便、快速、准确,适合在工厂推广。  相似文献   

地克珠利、氨丙啉与左旋咪唑联合使用对Eimeria tenella的效力试验   总被引：2，自引：0，他引：2  

聂奎  颜焰  高俊伟  廖申权  刘应良 《中国兽医寄生虫病》2006,14(1):1-4

目的研究地克珠利与氨丙啉、左旋咪唑的联合抗球虫效果。方法应用均匀设计法对地克珠利、氨丙啉和左旋咪唑的各6个不同剂量进行优化配伍,试验设立6个药物试验组,并设药物对照组、感染不给药组和不感染不给药组。除不感染不给药组外,其余全部试验鸡每只接种E.tenella孢子化卵囊1×105个,以抗球虫指数(AC I)判定药物的疗效。结果地克珠利5 mg/kg+氨丙啉240 mg/kg+左旋咪唑1.5 mg/kg组的雏鸡存活率为100%,相对增重率97.5%,病变值15.5,其AC I 181.97;而地克珠利2 mg/kg组的AC I仅为79.35;其余各组AC I均在150~170之间。结论本试验中以地克珠利5 mg/kg+氨丙啉240 mg/kg+左旋咪唑1.5 mg/kg为最佳抗球虫药物组。  相似文献   

鸭MHCⅡα融合蛋白表达条件的优化     

张舒婕  邓干臻  龚炎长  俸艳萍  杨庆磊  高俊伟  彭秀丽 《华中农业大学学报》2008,27(1):71-74

构建了鸭MHCⅡα的融合表达载体PET-28a,对融合蛋白在大肠杆菌中表达量的影响因素进行了研究.SDS-PAGE分析表明,诱导温度22℃,时间3 h,IPTG浓度0.05 mmol/L,OD600m值0.45,通气量90%和pH 7.2时MHCⅡα融合蛋白的表达量最高,占菌体总蛋白的23.4%,比优化前提高了16.7%.蛋白经纯化后纯度可达90%.Western blot分析表明,该蛋白可被鼠抗鸭MHCⅡα阳性血清识别,具有较好的免疫学活性.  相似文献