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1.
《畜牧与兽医》2014,(8):67-71
根据沙门菌的invA基因、弗氏枸橼酸杆菌的ldh基因、奇异变形杆菌的ureR基因和迟缓爱德华菌的fimA基因的保守序列,分别设计合成4对特异性引物和4个Taqman探针,通过对PCR反应体系的优化,并对该方法的特异性、敏感性进行评估,建立了一种能同时检测沙门菌、弗氏枸橼酸杆菌、奇异变形杆菌、迟缓爱德华菌的四重荧光定量PCR快速检测方法。该方法可特异性的检测到4种目标菌株的单一模版及混合模板,未发现不同成分间的交叉反应,最低检出限均为103cfu/mL;对22种非目标病原菌进行检测均为阴性。本研究建立的四重荧光定量PCR检测方法灵敏度高、特异性强,可用于上述4种致病菌的同时快速检测。 相似文献
2.
用PCR技术检测动物产品中沙门氏菌的研究 总被引：12，自引：0，他引：12
用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测沙门氏菌，结果表明，对各种不同血清型的沙门氏菌和已知被该菌污染的鱼粉和动物产品的肉汤培养物均检出阳性，而其他的枸橼酸杆菌、奇异变形杆菌，大肠艾希氏杆菌、缓慢爱德华氏菌和嗜水气单胞菌等非沙门氏菌类，均为阴性。证明本方法特异性高且有灵敏、快速等特点，适用于口岸检疫进出境动物产品快速、准确验放的需要。 相似文献
3.
为了同时快速准确的检测产单核细胞李斯特菌以及是否为有毒力的产单核细胞李斯特菌,根据相关文献报道的四重PCR方法,针对该菌的种特异性基因inl A基因进行引物设计,扩增片段大小为800bp,结果应用该PCR法可特异性的扩增出目的基因片段,与GenBank上发表的序列同源性为97.3%。同时通过对毒力基因inlB,inlC和inlJ的检测用来判断菌株的相关毒力。而同一属的其他菌种无害李斯特菌(L.innocua),韦氏李斯特菌(L.welshimeri)均无特异条带,嗜水气单胞菌(J-1),产气荚膜梭菌(C57-13),大肠埃希菌(ATCC 25922),鼠伤寒沙门菌(C79-32),金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)结果均为阴性。对临床上送检的23份样品进行四重PCR方法检测并同时与国家标准GB/T22429-2008食品中单核细胞增生李斯特氏菌的快速筛选检验中使用的检测方法进行比对,两种检测方法的结果完全符合,均检测出7份阳性样品。并且四重PCR法表明这7份阳性样品中的产单核细胞李斯特菌均携带有3种毒力因子(inlB,inlC和inlJ),因此该四重PCR法可用于快速鉴定是否是有毒力的产单核细胞李斯特菌,为有效预防控制产单核细胞李斯特菌污染提供技术支撑。 相似文献
4.
《中国预防兽医学报》2020,(6)
本研究设计了一种基于沙门氏菌毒力基因侵袭蛋白A(invA)的特异性肽核酸(PNA)探针,在前期优化条件的基础上,建立并评估了沙门氏菌肽核酸荧光原位杂交(PNA-FISH)的检测方法。特异性试验结果显示,该方法的Sal-invA探针除对目标菌杂交呈阳性外,与12株常见的非目标菌杂交均为阴性,特异性强;灵敏度试验结果显示,该方法对沙门氏菌的检测限为10~5cfu/mL,而荧光定量PCR方法和细菌分离培养法对沙门氏菌的最低检测限分别为10~2cfu/mL和10~5cfu/mL,PNA-FISH方法的灵敏度与分离培养方法相近。人工污染沙门氏菌的生肉制品,增菌培养后经上述3种方法检测的最低检测限均可达到100cfu/mL。对83份生鲜肉经增菌培养后,用上述3种方法检测。结果显示,该方法与细菌分离培养方法和荧光定量PCR方法的符合率均达到98.8%。表明,增菌培养是提高该PNA-FISH检测方法灵敏性的重要步骤。本研究建立的检测沙门氏菌的PNA-FISH方法快速、准确、灵敏,适合用于临床肉制品的检测。 相似文献
5.
本研究针对沙门氏菌invA基因的保守序列,设计特异的LUX^TM荧光标记引物,通过优化反应奈件和参数,建立可快速检测沙门氏菌的LUX^TM荧光PCR检测方法。结果显示,该方法高度敏感,其对纯菌的检测低限达到10^2cfu／mL,经6h增菌培养后检测,对样品液的检测低限达到1cfu／mL;特异性强,测试的全部13株沙门氏菌标准和参考菌株均呈阳性反应,测试的全部27株非目标菌均呈阴性反应;重复性好,定量检测批内和批间的变异系数均小于2％。应用本方法检测食品样品240份,结果检出阳性4份,与TaqMan荧光PCR和SN标准检测结果完全一致。本方法可在8h内完成对样品中沙门氏菌的检测,其检测的快速性、敏感性和特异性与TaqMan荧光PCR技术相当,且检测成本较低。 相似文献
6.
2007—2009年,应用荧光定量PCR方法对1669份分批采自屠宰场和冻肉库的动物产品增菌后进行沙门氏菌检测,共检出沙门氏菌阳性169份,总阳性检出率为10.13%;其中冻肉库检测样品264份,沙门氏菌阳性55份,鸡肉检出率为25.93%,猪肉检出率为11.76%,鸭肉检出率为30.95%,羊肉检测出率为15.38%,牛肉检出率为12.5%;屠宰场检测1405份猪肝,沙门氏菌阳性114份,阳性检出率为8.11%。结果表明,屠宰场和冻肉库的动物产品都有不同程度的沙门氏菌污染。 相似文献
7.
猪源人兽共患病不仅威胁公共卫生安全,还威胁生猪养殖业的健康发展;其中消化道传播是其主要的传播途径。为及时鉴定出经消化道传播的病原体,本试验建立了猪源大肠杆菌、沙门菌、单增李斯特菌和志贺菌的四重荧光定量PCR和戊型肝炎病毒荧光定量PCR检测方法,并优化反应体系和条件,实现5种病原体的同时检测;并利用荧光定量PCR与普通PCR对117份猪临床样品(病变组织、粪便和肌肉等)进行对比检测。结果显示,建立的荧光定量PCR能够在1.5 h内完成对大肠杆菌、沙门菌、单增李斯特菌、志贺菌和戊型肝炎病毒5种病原体的特异性检测,与其他常见细菌和病毒无交叉反应,检测极限值可达5个拷贝,标准曲线相关系数均不低于0.997,线性范围涵盖1×101～1×109,批内和批间变异系数(CV)均低于3.16%。建立的荧光定量PCR与普通PCR方法检测结果的符合率达到95.73%～100%,具有较好的一致性。117份临床样品中大肠杆菌、沙门菌、单增李斯特菌、志贺菌和戊型肝炎病毒各自的阳性率分别为31.62%、17.95%、6.84%、5.13%和11.11%。结果表明,本试验所... 相似文献
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目的建立一种能同时检测沙门氏菌和大肠杆菌O157:H7的双重荧光PCR方法,应用于动物源性食品的快速检验。方法根据沙门氏菌invA基因和大肠杆菌O157:H7 RFBE基因的保守序列,设计引物和探针,通过优化反应条件,建立可同时检测沙门氏菌和大肠杆菌O157:H7的双重荧光PCR方法,应用于动物源性食品的检验,并与miniVIDAS快速初筛方法和SN标准方法进行比较。结果本研究建立的双重荧光PCR方法可同时快速检测沙门氏菌和大肠杆菌O157:H7,对纯菌的检测灵敏度均低于10CFU/双重荧光PCR反应体系。应用本方法检测36株标准/参考菌株,结果只有9株目的菌标准/参考菌株出现特异性扩增,其余27株非目的菌均呈阴性反应。定量检测重复性试验结果,批内和批间的变异系数均小于2%。应用本方法检测人工染菌样品,结果与miniVIDAS和SN方法检测结果一致,但检测时间比miniVIDAS快了3倍,比SN标准快了10多倍。结论本研究建立的双重荧光PCR方法具有快速、灵敏、特异、重复性好的优点,可在8小时内完成样品沙门氏菌和大肠杆菌O157:H7的检验。 相似文献
10.
目的了解新疆石河子地区动物性食品中单核细胞增生李斯特氏菌(LM)污染状况。方法在石河子地区选取5个具有代表性动物性食品零售点,对最常食用的生鲜猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉、冻鸡肉、冻虾和冻带鱼8类动物性食品进行随机采样,采用病原分离培养和PCR法对样品中的单核细胞增生李斯特氏菌进行检测。结果检测8类249份食品样品,细菌分离鉴定阳性样品12份,平均阳性率4.82%;PCR法检测阳性样品36份,平均阳性率为14.46%。结论石河子动物性食品中LM的污染比较普遍,尤以冻鸡肉和冻虾LM污染较重,新鲜猪肉、牛肉和羊肉LM污染程度较轻。 相似文献
11.
2010年,辽宁铁岭某种鸡孵化场出现孵化率低、死淘率高的现象。通过对送检病死鸡胚进行病原检测,最终检测出5株革兰阴性杆菌和3种病毒,其中禽波氏杆菌和奇异变形杆菌的检出率分别为76．44％、61.36％,两者混合感染率达51．83％,而其他病原菌（大肠杆菌、沙门菌、绿脓杆菌）和病毒（AI,V、REV、CIAV）的检出率均较低。采用1对根据病原菌23SrRNA基因的共同保守序列设计的引物,以及根据临床常见致病菌16s～23SrRNA基因间隔序列（ISR）两端的16S及23SrRNA保守序列而设计的通用引物分别对分离菌进行PCR扩增。并分别测定所得片段的DNA序列。结果显示,所得DNA片段分别与GenBank中收录的登录号为HM545299的禽波氏杆菌和登录号为AY993943的奇异变形杆菌的相应核苷酸序列同源性达99．5％和98．7％。本研究最终确定禽波氏杆菌和奇异变形杆菌的混合感染是引起该场疫情发生的主要原因。 相似文献
12.
在沙门菌检测过程中,奇异变形杆菌经常作为一种假阳性菌而出现。为提高沙门菌分离鉴定的准确性,我们制备了奇异变形杆菌的多克隆抗血清。抗血清经protein G抗体纯化柱纯化,与奇异变形杆菌混合后,在扫描电镜下观察二者的相互作用,分析该抗体是否能够在体外特异性的裂解奇异变形杆菌。经扫描电镜分析,制备的多克隆抗体在2h后将奇异变形杆菌裂解。同时,将纯化的抗体分别添加到氯化镁孔雀绿肉汤（MM）和亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）中分析对奇异变形杆菌的抑菌效果。在实际应用中,针对临床的100多份样本,进行改进方法与常规方法的比较,结果显示,改进的方法能够有效排除因奇异变形杆菌带来的假阳性干扰,明显提高了沙门菌分离鉴定的准确性。 相似文献
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兰州市肉与肉制品微生物污染状况的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
目的：了解兰州市定点屠宰场生猪屠宰加工产品的卫生质量以及肉与肉制品致病菌污染状况。方法：2003-2006年,应用国标法对2个定点生猪屠宰场300份生猪胴体样品进行了菌落总数、大肠菌群和沙门氏菌检验;采用随机采样法对兰州市不同酒店和超市的生猪肉、牛肉、羊肉、禽肉100份,熟肉制品1 200份进行了常见致病菌的检验。结果：生猪胴体体表和肉样沙门氏菌检出率分别为7.5%和14%;生肉检出致病菌阳性20份,总检出率为20%;熟肉制品检出致病菌阳性39份,阳性率为3.25%。生肉中以猪肉致病菌阳性率最高,为20%。结论：兰州市生猪胴体的卫生质量急需提高,屠宰生产加工水平亟待改善。 相似文献
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Dead-in-shell chicken embryos from two commercial hatcheries in Anambra State of Nigeria were investigated for isolation of aerobic bacteria. For this purpose, 79 pooled samples containing 632 dead-in-shell chicken embryos were cultured. From these samples, 23 isolates of Escherichia coli and 25 isolates of Staphylococcus aureus were recorded. Other bacterial species isolated included Micrococcus sp. (fifteen isolates), Klebsiella sp. (thirteen isolates), Pseudomonas sp. (nine isolates), and Proteus sp. (seven isolates). Salmonella, Streptococcus, and Mycoplasma spp. could not be isolated. A high incidence of pathogenic strains of bacteria from dead-in-shell chicken embryos was observed. This suggests that the isolates may have contributed to the embryonic mortality and reduced hatchability recorded in the farms investigated. 相似文献
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Stepień-Pyśniak D 《Polish journal of veterinary sciences》2010,13(3):507-513
The aim of this study was to analyse the qualitative composition of Gram-negative microbes, mainly of the family Enterobacteriaceae, including pathogenic bacteria such as Salmonella, in the albumens and yolks and on the shells of hens' eggs, depending on their source and on the temperature and duration of their storage. A total of 375 table eggs were studied, from a large-scale poultry farm, a small-scale poultry farm and a supermarket. Each group was divided into 5 subgroups according to the temperature and duration of their storage during the study. Two serotypes of bacteria of the genus Salmonella were identified: S. Enteritidis and S. Arizonae. Strains of Salmonella spp. were also isolated. Apart from Salmonella and Escherichia coli, among the most frequently isolated bacteria of the family Enterobacteriaceae were Enterobacter spp., Klebsiella spp. and Citrobacter freundii. Qualitative analysis of the bacterial microflora of the eggs also showed the presence of other Gram negative bacteria, including Acinetobacter spp., Pseudomonas spp., Tatumella ptyseos, Providencia stuartii, Serratia liquefaciens, Flavimonas oryzihabitans, Vibrio metschnikovii, Leclercia adecarboxylata, Kluyvera spp., Rahnella aquatilis, Proteus mirabilis, and Achromobacter spp. The study demonstrated that the conditions applied, i.e., the temperature and duration of storage, did not significantly influence the prevalence of particular species of Gram-negative bacteria in the eggs. However, based on the analysis of contamination of eggs with Salmonella depending on their source, it can be concluded that the system in which the hens are housed affects the risk of contamination of eggs with these pathogens. 相似文献
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Prevalence, numbers and antimicrobial susceptibilities of Salmonella serovars and Campylobacter spp. in retail poultry in Phnom Penh, Cambodia 总被引：1，自引：0，他引：1
Lay KS Vuthy Y Song P Phol K Sarthou JL 《The Journal of veterinary medical science / the Japanese Society of Veterinary Science》2011,73(3):325-329
Salmonella and Campylobacter are common bacterial pathogens associated with human gastro-enteritis; and raw poultry is considered to be an important source of these bacteria. To evaluate whether the Salmonella serovars and Campylobacter spp. bacteria could be monitored for the purpose of microbial presence, enumeration and antimicrobial resistance in raw poultry, 152 poultry carcasses were randomly selected from 10 markets in retail outlets of Phnom Penh during March 2006 to February 2007. The majority of poultry samples was contaminated by Salmonella serovars (88.2%) and Campylobacter spp. (80.9%). A very high contamination of Salmonella was found at 3-4 log?? CFU/g for 22.4% of samples and of Campylobacter at 7-8 log?? CFU/g for 1.3% of samples. Fifty nine different Salmonella serovars contaminated 134 poultry carcasses; five most prevalent serovars covered 29.1% of serovars isolates (Anatum, Typhimurium, Corvallis, Stanley and Enteritidis). Three Campylobacter species contaminating 123 raw poultry were Campylobacter jejuni (50.0%), Campylobacter coli (29.0%) and Campylobacter lari (21.0%). High antibiotic resistance percentages were found among Salmonella serovars and Campylobacter spp. isolates. This study revealed that raw poultry at the retail outlets in Phnom Penh markets are contaminated with high prevalences of food-borne pathogens, and communicating the importance of minimizing this risk in reducing human infections. 相似文献
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多重荧光PCR检测水产品致病菌方法的建立与应用研究 总被引：1，自引：0，他引：1
根据沙门氏菌invA基因、副溶血性弧菌toxR基因和大肠杆菌O157：H7 RFBE基因的保守序列,设计引物和探针,通过优化反应体系,测定其灵敏度和特异性,建立了可同时检测上述三种致病菌的多重实时荧光PCR方法。该方法对纯茵的检测灵敏度均低于1O cfu／PCR反应体系。人工染菌样品经6h增菌,检测的灵敏度可低于10c... 相似文献
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根据沙门菌invH基因序列设计1对引物,对9株沙门菌和4株常见病原菌进行PCR扩增,并将扩增出的in-vH基因进行克隆及序列分析,应用生物信息学方法预测invH蛋白的T细胞抗原表位。结果表明,9株沙门菌PCR均扩增出519bp的特异条带,4株非沙门菌均无特异带扩增;核苷酸序列分析证实,3株鼠伤寒沙门菌之间同源性为99.8%,与鸡白痢和鸡肠炎沙门菌之间的核苷酸序列同源性为98.6%,3株猪伤寒沙门菌和3株鸡源性沙门菌同源性较低,且不在同一支系统进化树上;invH蛋白有5个重复率最高的T淋巴细胞受体识别的抗原表位。 相似文献
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川渝地区奶牛隐性乳房炎调查和主要病原菌分离鉴定及药敏试验 总被引：2，自引：0，他引：2
用LMT法对川渝地区134头泌乳奶牛的491个乳区进行隐性乳房炎发病情况调查,并对阳性乳样进行主要病原菌的分离鉴定及药敏试验。结果显示,被检奶牛患隐性乳房炎头阳性率为70.90%,乳区阳性率为35.64%,175份阳性乳样的细菌检出率为90.86%,病原菌单独感染率为10.69%,混合感染率为89.31%;共分离到金黄色葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌3种主要病原菌134株,其中金黄色葡萄球菌93株,占分离菌株的69.40%,链球菌34株,占25.37%,大肠杆菌7株,占5.23%;主要病原菌对呋喃妥因、新生霉素、头孢菌素类和喹诺酮类药物敏感性较好,对大多数抗菌药物产生不同程度的耐药性,对青霉素和链霉素则完全不敏感,耐药程度接近100%。 相似文献