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【目的】从表达M2e-EYFP融合蛋白转基因柔嫩艾美耳球虫的稳定性,及其在环境中的传播能力、竞争能力和存活能力方面,分析转基因球虫对生态环境的潜在风险。【方法】稳定性试验包括:转基因球虫感染非靶动物,观察临床症状和卵囊产出情况;转基因球虫继代繁殖,检测荧光率;转基因球虫与毒害艾美耳球虫混合感染,PCR检测卵囊中的外源基因。传播能力试验主要是分析感染鸡和不感染同居鸡的卵囊产量和荧光率。竞争性试验则是用不同混合比例的2种球虫感染鸡,检测卵囊产量和荧光率;存活能力试验是用不同处理方式的卵囊感染鸡,检测卵囊是否产出以分析卵囊存活能力。【结果】转基因球虫不感染小鼠和家鸽,与野生型柔嫩艾美耳球虫宿主特异性相同;连续繁殖传17代后外源基因稳定表达。与毒害艾美耳球虫混合寄生时在异种球虫体内未检测出外源基因。传播能力试验中,46d攻毒时转基因球虫感染与不感染同居组的卵囊产量差异不显著,但与不感染对照组相比均显著减少,且1∶1感染和不感染同居组卵囊荧光率检测结果维持在51.6%67.9%。竟争性试验中,攻毒时各比例感染组卵囊产量均极显著少于不感染攻毒对照组,荧光率检测结果各比例组变化幅动不大,且1∶1组哨兵鸡卵囊荧光率检测结果为41.2%61%。存活能力试验,转基因球虫与野生型球虫在夏季室温条件下均不能存活90d,且与其他不同方式处理的卵囊外界存活时间接近。【结论】说明转基因球虫具有良好的稳定性,在环境中的传播能力、竞争能力和存活能力未呈现显著优于野生球虫的趋势。 相似文献
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<正>羊球虫病是由艾美科艾美耳属球虫寄生于羊肠道所引起的一种疾病,主要危害羔羊,表现为食欲下降、腹泻或粪便不成形、生长迟缓,严重时贫血甚至死亡。一、病原特征羊球虫为单宿主寄生性原虫,只需要经过一个宿主就能完成整个发育过程。病羊体内的球虫卵囊经粪便排到体外,形成孢子化卵囊,污染圈舍。孢子化卵囊被羊吞食后,在胃液、胆汁和胰蛋白酶作用下,子孢子逸出并侵入肠道上皮细胞,进行多世代裂殖生殖, 相似文献
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<正>弓形虫病是由顶器门、真球虫目、肉孢子虫科、弓形虫属的龚地弓形虫引起的一种人兽共患的寄生性原虫病。弓形虫病呈世界性分布,在人、家养动物和野生动物中广泛传播,据估计全球有超过1/3的人口感染弓形虫。大多数温血动物都可以成为弓形虫的中间宿主,中间宿主感染弓形虫的主要途径为经口感染:(1)食用了被孢子化卵囊污染的饮水和食物;(2)食用了含有组织包囊的生肉(Dubey,2004)。 相似文献
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《河南农业大学学报》2014,(6)
为了建立检测果蔬表面人源卡耶坦环孢子虫(Cyclospora cayetanensis)卵囊的方法,分别用50,500个环孢子虫卵囊对环孢子虫卵囊阴性的新鲜果蔬进行人工污染,并设置阴性对照;使用含有0.1%Alconox,0.1%雕牌,0.1%立白、0.1%白猫的4种洗涤液和去离子水,在摇床中洗脱样品;然后,反复离心3次收集卵囊并提取卵囊DNA;最后,基于环孢子虫18S rRNA基因位点对卵囊DNA样品进行巢式PCR扩增.结果表明,卵囊污染吸附最佳时间为24 h,样品洗脱最佳时间为30 min.其中,只用去离子水时,生菜、西葫芦、黄瓜、西瓜、甜瓜和草莓的检测敏感性可达到50个卵囊,而西红柿可达到500个卵囊;当用不同洗涤剂时,各样品的检测敏感性均可达到50个卵囊.不同洗涤剂之间检测敏感性无显著差异.该研究初步建立检测水果、蔬菜污染环孢子虫卵囊的技术,采用此方法可特异、敏感、快速的检测果蔬表面环孢子虫卵囊,为食源性环孢子虫病暴发溯源提供技术支持. 相似文献
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[目的]探索以蔗糖溶液作为介质分离纯化隐孢子虫卵囊的最佳条件。[方法]以隐孢子虫感染阳性奶牛粪样为材料,设计5个蔗糖浓度、3个离心时间和3个离心速度进行隐孢子虫卵裳的分离纯化。[结果]蔗糖浓度为1：2．0和1：2．5时,分离出的卵囊总数极显著大于其他3组（P〈0．01）,其中1：2．5组卵囊平均数最大;不同离心时间分离出的卵囊总数在数量上差异均不显著（P〉0．05）,其中离心20min时卵囊平均数最大;不同离心速度分离出的卵囊总数的比较表明,3000r／min得到的卵囊数量最多。[结论]蔗糖浓度为1：2．5、离心速度为3000r／min、离心时间为20min是隐孢子虫卵囊分离纯化的最佳条件。 相似文献
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二、肉孢子虫肉孢子虫属(Sarcocystis)是Lankester于1882年建立的,此属有很多种。中间宿主主要为草食兽,其次为其他哺乳动物(包括人)、爬虫类和禽类,终宿主主要为肉食兽和掠禽,人也可作为某些肉孢子虫的终宿主并出现症状。命名问题肉孢子虫的生活史一直到1972年才初步摸清。在此之前,肉孢子虫都是根据肉囊寄生的宿主不同、囊壁结构和缓 相似文献
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从哺乳仔猪的腹泻粪样中分离出等孢球虫卵囊,感染仔猪建立球虫纯种株.通过卵囊形态结构观察与18S rRNA PCR鉴定,鉴定该球虫分离株为猪等孢球虫.将6只24日龄断奶仔猪分为2组,分别感染4×102和104个孢子化卵囊,观察仔猪的临床表现及虫株的潜伏期、显露期和卵囊产量.结果表明,感染4×102个卵囊后仔猪未出现腹泻症状,感染104个卵囊后仔猪出现腹泻且持续6 d.感染4×102个孢子化卵囊时,潜隐期为5 d,显露期为7 d,每个卵囊产出5.72×103个卵囊;感染104个孢子化卵囊时,潜隐期为5 d,显露期18 d,每个卵囊产出6.41×102个卵囊.由此可见,该株猪等孢球虫对仔猪具有致病性,可用于构建猪等孢球虫病动物模型及其疾病学研究. 相似文献
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目的为组成1个遗传变异较大的大型艾美尔球虫株作为早熟选育的背景。方法从河北省无极县、河北省张家口市、浙江省舟山市、江苏省南京市、四川省乐山市、云南省昆明市6个不同地区的兔场采集兔粪,收集卵囊,培养至孢子化。根据大型艾美尔球虫的形态特征,采用改进的琼脂板法单卵囊分离技术将混合兔球虫种分离开,单卵囊接种无球虫兔,当有大量卵囊排出时分别收集不同地理株的卵囊,孵化后接种无球虫兔,1×10~4卵囊/只,在接种后6～16 d的排卵期间,每天収粪、计数,并记录每只兔的排卵量。结果单卵囊接种的成功率为88.9%;用1×10~4个卵囊接种无球虫兔后,不同地理株的卵囊产量,张家口株最多,依次为无极株、南京株、乐山株、昆明株,舟山株最少。结论单卵囊分离的成功率较高,不同地理株排卵量不同。 相似文献
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【目的】掌握鸵鸟隐孢子虫病的流行范围和流行动态，以及研究鸵鸟源隐孢子虫的生物学特性。【方法】应用饱和蔗糖溶液漂浮法检查鸵鸟新鲜粪样404份，详细观察、测量卵囊形态大小；收集纯化阳性样品中的隐孢子虫卵囊，分别人工经口感染幼鸵鸟、雏鸡和小白鼠并利用组织病理学试验技术研究其生物学特性。【结果】检测到阳性样品10份，总阳性率为2.48% (10/404)，且感染率与鸵鸟日龄有一定的关系。其卵囊平均大小为5.43×4.38μm（4.0～6.0×3.7～5.0μm）,形状指数1.24（长/宽）,（n=50）。分离到的卵囊能成功感染雏鸡和幼鸵鸟，但不能感染小白鼠。受试雏鸡具有明显的呼吸道症状，而幼龄鸵鸟呼吸道症状较轻微。此外，在两种动物体内的排卵囊规律差别较大，在鸵鸟体内出现多个排卵囊高峰。虫体主要寄生于雏鸡和幼鸵鸟的泄殖腔和法氏囊，引起法氏囊萎缩、微绒毛大量脱落等病理变化。【结论】根据其卵囊形态、宿主范围和虫体寄生部位等生物学特性，结合文献报道，笔者在国内发现并初步鉴定出鸵鸟源隐孢子虫为贝氏隐孢子虫（Cryptosporidium baileyi）。 相似文献
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鸡柔嫩艾美耳球虫西宁株的分离与鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]鉴定鸡柔嫩艾美耳球虫西宁株。[方法]采用单卵囊分离技术从西宁当地鸡粪便中获得1株纯种球虫,经鸡体传代增殖,对该虫体的寄生部位、潜伏期、孢子化时间、形态结构等指标进行观察和测定。[结果]该虫株寄生于鸡的盲肠,卵形指数为1．22,最短孢子化时间为18h,潜伏期为114h。卵囊为卵圆形,卵囊壁光滑,呈黄绿色,孢子化卵囊未见卵膜孔和卵囊残体;孢子化卵囊平均为20．08μm×16．55μm。孢子囊纺锤形,有一斯氏体,其平均大小为8．65μm×4．90μm。综合鉴定该球虫为柔嫩艾美耳球虫,并暂命名为柔嫩史美耳球虫西宁株。[结论]该研究为进一步研究球虫的致病性和药物效应奠定了基础。 相似文献
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虽然球虫激发宿主产生的保护性免疫应答机制已有很多相关研究,但是保护记忆性免疫应答机制这一关键点常常被忽视。高效保护记忆性免疫应答是球虫感染宿主和球虫病疫苗设计的基础。本研究对该领域50年的相关研究进行系统性回顾和分析,提出开发高效球虫疫苗的设想和评估候选球虫病疫苗产生高效免疫保护的新策略,该设想和新策略基于产生高效保护性记忆免疫应答的三大关键点,即产生免疫水平的阈值、效应部位以及时间。结果表明:1)球虫病活卵囊疫苗与球虫重组蛋白疫苗、DNA疫苗、以病毒或细菌为载体的球虫病活载体疫苗免疫鸡群激发宿主产生的免疫应答存在本质区别,活卵囊疫苗免疫过的鸡对球虫的感染处于“Primed”免疫状态(即免疫系统可快速高效地识别球虫百余个抗原,抵抗球虫再次感染的能力更高。),而非活卵囊疫苗对球虫的感染仍处于“Naive”状态(即免疫系统仅能识别特定的1个或几个球虫抗原,抵抗球虫再次感染的能力较弱。)。这也是目前研发的基于一个或几个抗原的球虫“死”疫苗效果不佳的根本原因。2)高效的保护性记忆免疫应答的主要机制是多种效应机制协同发挥作用,如肠道微环境中的组织常驻记忆细胞(Tissue resident memory cells,TRM)、循环的效应记忆细胞(Effector memory T cells,TEM)、中心记忆性T细胞(Central memory T cell,TCM),尤其是TRM的量和质起关键作用。在疫苗设计中可以将抗原靶向可激发宿主产生针对鸡球虫高效保护性记忆免疫应答的重要部位—肠道。3)抑制球虫早期裂殖生殖是记忆性免疫应答抵抗球虫感染最重要的特征,为评估高效球虫疫苗提供了新思路。综上,对鸡球虫感染过程中产生高效免疫保护的机制有清晰的认识和理解,是实现基于免疫学理论的球虫病科学防控的基础。 相似文献
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应用蔗糖密度梯度离心法纯化贝氏隐孢子虫卵囊,冰浴超声波破碎、反复冻融卵囊,低温离心获得贝氏隐孢子虫卵囊蛋白质抗原.免疫产蛋鸡,6次免疫后获得高免特异性卵黄抗体IgY.制备辣根过氧化物酶(HRP)标记免抗鸡IgG,其最佳工作浓度为1:4 000～1:6 000,贝氏隐孢子虫卵囊抗原包被浓度8.15 mg·L-1,4℃包被过夜(≥10 h);1×106mg·L-1 BSA-PBST稀释卵黄,建立了检测抗贝氏隐孢子虫特异性卵黄抗体的间接ELISA方法. 相似文献
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[目的]确定单卵囊分离获得的鸡球虫种类.[方法]采用生物学方法,测定该鸡球虫寄生部位、最短孢子化时间、潜伏期、孢子化卵囊和孢子囊大小等生物学特征.[结果]该鸡球虫主要寄生于十二指肠,卵囊呈卵圆形,囊壁光滑分为2层,囊内有1～3个折光性颗粒,未见卵囊残体;测100个孢子化卵囊大小为(13 ～22) μm×(11 ～ 16) μm,平均为16.96 μm×12.96 μm,形状指数1.31;测60个孢子囊大小为(8～ 13) μm×(5～8) μm,平均11.22 μm ×6.83 μm;最短孢子化时间为17 h,潜伏期为99 h.[结论]根据该鸡球虫的生物学特征及参考国内外文献,鉴定该鸡球虫为堆形艾美耳球虫(Eimeria acervulina). 相似文献
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为了解宠物豚鼠隐孢子虫感染情况,用饱和蔗糖溶液漂浮法对郑州某宠物市场55份豚鼠粪便和免疫抑制后的30只豚鼠新鲜粪便样本进行检查。结果发现,隐孢子虫总感染率分别为12.7%和80%,卵囊呈近圆形,卵囊大小为5.3μm×4.7μm〔(5.0～5.5)μm×(4.4～4.9)μm〕,卵囊指数为1.11。基于18SrRNA基因位点,对调查中发现的7个隐孢子虫分离株进行PCR扩增,PCR-RFLP和测序结果显示,7个分离株均为维瑞隐孢子虫。宠物豚鼠隐孢子虫感染较为普遍,感染虫种是维瑞隐孢子虫,且豚鼠在免疫抑制后,其隐孢子虫感染率显著增高。 相似文献
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正1球虫病球虫病是由多种艾美尔球虫寄生在羊肠道的一种原虫病,以下痢、便血和生长发育停滞为本病特征。球虫的卵囊呈椭圆形、圆形或卵圆形,卵壁有两层,外层叫保护膜,内层是由大配子在发育过程中形成的小颗粒构成,原生质呈颗粒状。球虫主要分布在肠壁上皮细胞内生长发育,分裂繁殖,最后形成的卵囊随粪便排出体外。在外界,卵囊发育成 相似文献
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鹌鹑隐孢子虫流行病学调查及动物感染试验 总被引：10，自引：0，他引：10
为掌握畜禽隐孢子虫病在河南省的流行动态,作者于2003年用饱和蔗糖溶液漂浮法检查了郑州、焦作2市7个鹌鹑养殖场429份粪便样品,结果有5个鹌鹑场隐孢子虫感染为阳性,根据卵囊形态初步鉴定1种为贝氏隐孢子虫(Cryptosporidium baileyi),另1种为火鸡隐孢子虫(Cryptosporidium meleagridis);总阳性率为14．69％(63／429),其中感染贝氏隐孢子虫的阳性率4．66％(20／429),火鸡隐孢子虫的阳性率为10．02％(43／429),并分别用2种卵囊试验感染鹌鹑和雏鸡研究其致病性,观察了2种隐孢子虫在鹌鹑体内的排卵囊规律,以及火鸡隐孢子虫在免疫抑制雏鸡和非免疫抑制雏鸡体内的排卵囊规律。 相似文献