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1.
以罗非鱼脑组织为材料,研究了乙酰胆碱酯酶的分离纯化方法、性质及杀虫剂对酶的抑制作用。结果表明,当脑组织的TritonX-100抽提物采用(NH4)2SO4分级盐析、Sephadex G-100凝胶过滤和DEAE-纤维素DE23离子交换柱层析的分离纯化步骤后,可获得纯化的乙酰胆碱酯酶,酶的比活力达到20.628U.mg-1, 纯化倍数139,回收率22.1%。酶作用最适温度为35～40℃,最适pH为7.5～8.0,对碘化硫代乙酰胆碱的Km值为0.183mmol.L-1,有过量底物抑制现象,最佳底物浓度为6mmol.L-1。被测4种农药中,有机磷类杀虫剂对罗非鱼脑AChE的抑制能力高于氨基甲酸酯类,抑制能力分别为：敌敌畏 > 辛硫磷 > 三唑磷 > 灭多威, 4种杀虫剂对罗非鱼脑AChE的I50值均小于5μg.mL-1。 相似文献
2.
以罗非鱼肠为原料,采用超声波辅助提取技术、电泳技术和层析技术等对罗非鱼肠道蛋白酶进行研究,结果表明:将鱼肠匀浆经超声波提取的粗酶液,用30%～70%的硫酸铵盐进行盐析、HitrapTM Q FF阴离子交换柱纯化及Sephadex G-100凝胶柱分离纯化,得到罗非鱼肠蛋白酶纯品,其比活为335U/mg,得率为32.8%;SDS-PAGE电泳为单一蛋白酶带,分子量为28ku。该酶最适pH为8.0～8.5,在pH7.0～9.0的条件下稳定;最适温度为37～42℃,热稳定性好;该酶的Km值和Vmax值分别为0.605g/L和9.407μg/min。金属离子Ag+、Pb2+对蛋白酶有完全抑制作用,Na+、K+对该酶无抑制作用。丝氨酸蛋白酶抑制剂能完全抑制该酶活性,胃蛋白酶抑制剂和脲素对该酶有一定抑制作用,EDTA没有明显抑制作用,DTT能激活该酶活性,该酶为丝氨酸蛋白酶。 相似文献
3.
本研究探讨了反应温度、pH、金属离子(Zn~(2+)、Mg~(2+)、Cu~(2+)、Fe~(3+)、Al~(3+)和Ca~(2+))对南极磷虾粗酶液中蛋白酶活性的影响,研究了苯甲基磺酰氟(PMSF)、EDTA·2Na、碘乙酰胺(IAM)和甲苯磺酰–苯丙氨酸氯甲基酮(TPCK)对蛋白酶活性的抑制效果。结果显示,南极磷虾粗酶液中蛋白酶的最适反应温度为40℃;最适反应pH值为8.0;当金属离子浓度为0.5 mmol/L时,Zn~(2+)、Mg~(2+)、Cu~(2+)、Fe~(3+)和Al~(3+)金属离子对蛋白酶酶活的抑制率分别为55.02%、55.02%、35.39%、20.67%和41.12%,而Ca~(2+)离子对蛋白酶活有明显的促进作用;PMSF和EDTA·2Na对蛋白酶酶活具有较为显著的抑制作用,PMSF的浓度为8.0 mmol/L时,抑制率为60%;EDTA·2Na浓度为0.6 mmol/L时,抑制率为86.67%;IAM在低浓度时有一定的抑制作用;TPCK低浓度时抑制效果不明显,浓度升高时有一定的抑制作用。在5~30℃的温度范围内,随着温度升高,EDTA·2Na对蛋白酶酶活的抑制效果逐渐增加。本研究阐明了影响南极磷虾粗酶液蛋白酶酶活的因素,开发了针对南极磷虾粗酶液中蛋白酶活性的抑制剂,为南极磷虾在食品领域的开发利用提供了基础理论数据。 相似文献
4.
测定了Ca2+、Cu2+、Zn2+、Mn2+及SDS、EDTA不同浓度对日本对虾、克氏原螯虾、凡纳滨对虾肌肉组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响及其肌肉、鳃、肝胰腺组织中SOD活性的差异,并利用电泳技术研究了组织同工酶.结果发现.除Ca2+对日本对虾肌肉组织中SOD活性稍有抑制作用.Ca2+、Cu2+、Zn2+、Mn2+4种金属离子对3种虾肌肉组织中SOD活性则是低浓度起促进作用,高浓度具有明显的抑制作用,但抑制程度不同.除EDTA对凡纳滨对虾微有促进作用.SDS、EDTA具明显抑制作用.SOD在肌肉、鳃中差异不明显,与肝胰腺差异显著;肝胰腺中SOD表现出种属差异性.电泳结果表明,在这3种虾不同组织中SOD的条带数和电泳迁移速率明显不同.同工酶经乙醇一氯仿和H2O2处理后活性染色法表现出的电泳带主要为Cu.Zn-SOD. 相似文献
5.
超氧化物歧化酶(SOD)是清除生物体内超氧阴离子自由基的一种重要抗氧化酶。根据翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)Cu/Zn-SOD基因序列(Gen Bank登录号:KJ558392.1)设计表达引物,扩增获得截去信号肽后的一段460 bp的序列,序列经过鉴定后,构建了重组表达质粒p ET-30a+Sc Cu/Zn-SOD,并将该质粒转入到BL21(DE3)中,用IPTG诱导进行表达。经过优化表达条件得到可溶的Sc Cu/Zn-SOD重组蛋白(rScCu/Zn-SOD),纯化重组蛋白后测定rScCu/Zn-SOD的浓度和酶活性。结果发现在20℃和37℃条件下均能够诱导Sc Cu/ZnSOD的表达。37℃时重组蛋白主要以包涵体形式存在。降低诱导温度和补充Cu~(2+)/Zn~(2+)可提高rScCu/Zn-SOD的表达量。在20℃、0.5 mmol/L IPTG条件下,添加0.5 mmol/L CuSO_4和0.1 mmol/L ZnCl_2于培养基中,重组蛋白的表达量明显升高。纯化后的重组蛋白浓度为0.14 mg/m L,酶活力为108.5 U/mg。rScCu/Zn-SOD最适温度为37℃,最适pH为7.0,可耐受5%浓度的SDS蛋白质变性剂。 相似文献
6.
金乌贼肌肉中三甲胺脱甲基酶的分离纯化及酶学性质 总被引：1，自引：1，他引：0
为了提取纯化金乌贼肌肉中的三甲胺脱甲基酶(TMAOase),本研究采用含有0.1 mol/L NaCl、pH 7.0、浓度为20 mmol/L的三羟甲基氨基甲烷(Tris)-醋酸缓冲液提取粗酶液,经透析、浓缩处理后,通过DEAE-52阴离子交换柱层析和Sephacryl S-300柱层析得到了纯化的TMAOase,并对其酶学性质进行了研究。结果显示,经Sephacryl S-300柱层析的TMAOase相比粗酶纯化了209.54倍;粗酶和纯化酶的最适温度分别为55和50°C,当温度高于最适温度时,酶活性开始出现显著下降,粗酶在80°C仍残留21.9%的活性;而纯化酶在80°C时,几乎检测不到酶活;粗酶和纯化酶的最适p H均为7.0,中性条件下表现稳定,在酸性和碱性条件下稳定性下降,p H为9.0时,粗酶残留60.7%的活性,而纯化酶的活性仅为20.5%。以双倒数作图法(Lineweaver-Burk法)测得纯化的TMAOase的Km值为22.8 mmol/L;经SDS-PAGE电泳分析,测得其分子量为21.3 ku;在化学物质中,柠檬酸和CaCl_2对酶活性具有显著的促进作用,H_2O_2和Na_2S对TMAOase活性有显著抑制作用。 相似文献
7.
采用Tris-HCl缓冲液抽提、Sephadex G-100凝胶过滤层析、DEAE-Sepharose F.F.阴离子交换层析和SDS-PAGE等方法,分离和纯化了凡纳滨对虾蛋白酶,研究了其生化特性.试验结果表明,该蛋白酶粗提物经层析后,得到聚丙烯酰胺凝胶电泳纯的一酶组分.该蛋白酶的比活力从128.35 U/mg增至1835.65 U/mg,提高了14.3倍,产率达31.9%.SDS-PAGE显示该蛋白酶只含一条谱带,相对分子量为25 kD.以酪蛋白为底物,该酶的最适pH为7.0,最适温度为60 ℃, 在50 ℃以下,比较稳定,放置1 h后活性仍超过60%,而超过50 ℃时蛋白酶活性急剧下降,60 ℃放置1 h后,酶活性只残留4.7%.10 mmol/L EDTA、Fe~(2+)、Ba~(2+)和Zn~(2+)对该蛋白酶有较强的抑制作用,抑制率分别为84%、53%、43%和38%,10 mmol/L Mg~(2+)和Cu~(2+)对蛋白酶活性有轻微抑制作用,而10 mmol/L Ca2+能显著促进蛋白酶活性,据此推测凡纳滨对虾蛋白酶可能为一种金属蛋白酶. 相似文献
8.
研究全氟辛烷磺酸类物质(PFOS)暴露对剑尾鱼肝脏Cu/Zn-SOD及相关应激基因表达的影响,探讨筛选导致体内氧化应激反应的敏感生物标志物,并首次克隆和分析剑尾鱼Cu/Zn-SOD的cDNA全序列。实验将剑尾鱼随机分为5组,包括对照组和3.5、7.0、14.0和28.0mg/L等4个PFOS实验暴露组,同时设置平行组。定量测定了24 h、48 h、96 h和14 d肝脏组织中的Cu/Zn-SOD、HSP70-1、HSP70-2和GST mRNA表达水平的变化,成功克隆包含794 bp核苷酸和编码154个氨基酸的剑尾鱼Cu/Zn-SOD的cDNA全序列。通过与其他相关鱼类Cu/Zn-SOD的核苷酸序列和氨基酸序列相似性比较发现,核苷酸和氨基酸序列相似性分别达到77%~83%和79%~88%。高浓度PFOS暴露后,剑尾鱼肝脏中与应激相关的各种基因发生不同程度的变化。通过RT-PCR技术检测Cu/Zn-SOD mRNA表达在剂量效应上不显著,Cu/Zn-SOD mRNA表达和SOD活性之间并没有相关性,推断是其他类型的SOD基因在PFOS暴露下发挥更为重要的作用。随着暴露时间的持续延长,Cu/Zn-SOD基因的转录水平变化趋势与SOD活性变化及HSP70-1 mRNA表达相一致,表明HSP70通过提高剑尾鱼体内SOD水平以保护机体免受氧化损伤。HSP70-2 mRNA水平比HSP70-1 mRNA表达更加敏感。HSP70-2变化趋势与Cu/Zn-SOD mRNA表达相关性不强,其相关机制有待进一步研究。G ST mRNA表达呈不断上升趋势,这与Nrf2信号传导途径有关,也可能是机体在应对PFOS进入鱼体后的一种防御措施。剑尾鱼在体实验表明,PFOS能够诱导肝脏氧化应激反应,GST mRNA和HSP70-2 mRNA表达可以作为PFOS暴露的敏感生物标志物。 相似文献
9.
对盐藻细胞反复冻融和超声波破碎获得超氧化物歧化酶粗酶液,再经丙酮沉淀、70℃热处理、DEAE-52柱层析获得纯化超氧化物歧化酶,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,检测出1条超氧化物歧化酶谱带。该纯化超氧化物歧化酶在紫外光区的吸收峰波长259 nm和可见光区的吸收峰波长671 nm与报道的Cu/Zn-SOD基本一致,并且它对H2O2和KCN均敏感,说明盐藻中的超氧化物歧化酶为Cu/Zn-SOD类型。 相似文献
10.
尼罗罗非鱼淀粉酶性质的初步研究 总被引：5，自引：0，他引：5
研究了尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)肝脏淀粉酶的基本性质及金属离子对该鱼淀粉酶活性的影响。结果表明:罗非鱼淀粉酶活力的最适pH是6.5,最适底物浓度是2%。研究金属离子对该鱼淀粉酶活力影响,一价金属离子K+、Li+、Na+对酶活力影响较小;二价金属离子Cu2+对酶活力具有抑制作用,Zn2+对酶活力无明显影响;三价金属离子Al3+对酶活力具有抑制作用,但效果不是很强烈,Fe3+对酶活力具有明显的激活作用;碱土金属Mg2+、Ca2+对淀粉酶活性有激活作用,而Ba2+对酶具有抑制作用;重金属离子Cd2+、Pb2+有明显的抑制作用。 相似文献