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1.
为研究日本血吸虫凋亡蛋白抑制因子（inhibitor of apoptosis protein of Schistosoma japonicum,SjIAP）重组蛋白诱导BALB/c小鼠的免疫保护效果,利用PCR技术扩增SjIAP基因,构建重组表达质粒pET-28a（＋）-SjIAP,诱导表达重组SjIAP蛋白,并利用重组蛋白制备兔源多克隆抗体血清。然后,选用SjIAP重组蛋白免疫BALB/c小鼠,利用ELISA检测免疫小鼠血清中的特异性抗体水平,以及免疫小鼠脾脏淋巴细胞在SjIAP重组蛋白刺激后产生的细胞因子水平。强化免疫后,将小鼠进行血吸虫尾蚴攻虫试验,感染38 d,进行剖杀,计算虫体减虫率及肝脏减卵率。Western blot结果表明本研究制备的兔源多抗血清能特异性识别SjIAP重组蛋白。ELISA检测表明免疫SjIAP重组蛋白可诱导较高水平的IgG及IgG亚型（IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3）抗体和IFN-γ、IL-2及IL-4细胞因子。动物试验表明,免疫SjIAP重组蛋白的小鼠与PBS组相比分别获得了31.5%的减虫率和37.2%的肝脏减卵率。免疫SjIAP重组蛋白能诱导小鼠获得一定减虫和减卵保护效果,提示血吸虫凋亡蛋白抑制因子可作为抗血吸虫病的疫苗候选分子。 相似文献
2.
为研究日本血吸虫(Schistosoma japonnicum)幼虫巨大致死基因(Lethal giant larvae)的生物学功能,本研究应用荧光定量RT-PCR分析SjLgL基因在S.japonnicum不同发育阶段的表达情况,构建重组表达质粒pET-SjLgL进行诱导表达,对重组蛋白进行western blot鉴定;重组蛋白刺激免疫动物进行免疫保护试验,检测IL-4、IL-10、TNF-α和IFN-γ的变化.结果表明,SjLgL基因在S.japonnicum不同发育时期均有表达,成虫期略高于童虫,雄虫高于雌虫.Western blot鉴定结果显示,该重组蛋白具有良好的抗原性.免疫保护试验结果表明,免疫小鼠分别获得了22.34％的减虫率和55.49％的肝脏减卵率.血清学检测结果显示重组蛋白免疫小鼠后产生了特异性IgG抗体.细胞因子检测结果表明,重组蛋白刺激免疫动物主要诱发产生Th1型的免疫应答.本实验结果表明该重组蛋白在小鼠体内可诱导产生部分免疫保护效果. 相似文献
3.
《家畜生态学报》2021,42(7)
为了分析牦牛日本血吸虫Sjp38MAPK重组蛋白的免疫效果,试验采用RT-PCR方法克隆出牦牛日本血吸虫Sjp38MAPK基因,构建重组表达载体pET-30a(+)-Sjp38MAPK,转化到BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,采用SDS-PAGE和Western-blot方法检测其蛋白的表达情况。结果表明,获得约为55 ku的重组蛋白rSjp38MAPK,表达的重组蛋白Sjp38MAPK能被感染日本血吸虫的阳性血清识别,具有免疫原性。用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠后,以临床分离的日本血吸虫尾蚴腹部贴片攻毒,发现重组蛋白免疫组能降低小鼠的减虫率和肝脏减卵率,可诱导产生特异IgG抗体,具有较好免疫保护效果。这为进一步研究Sjp38MAPK蛋白功能及研制基因疫苗奠定基础。 相似文献
4.
《中国动物传染病学报》2016,(3)
本研究利用PCR技术扩增到日本血吸虫C1q BP基因,构建了重组表达质粒p ET-32a(+)-Sj C1q BP,并在大肠杆菌中进行表达。将重组蛋白免疫小鼠评估其免疫保护效果,采用Western blot检测其免疫原性,ELISA检测其特异性抗体水平,应用补体溶血试验分析重组蛋白对补体溶血的抑制效果。结果显示日本血吸虫C1q BP基因含729 bp的编码序列,在大肠杆菌中BL21(DE3)中表达后,用His-Bind亲和层析纯化可获得50 k Da的重组蛋白r Sj C1q BP。应用重组蛋白r Sj C1q BP免疫BALB/c小鼠可产生较高水平的特异性Ig G抗体,诱导36.08%的减虫率和43.45%的肝脏减卵率;补体溶血试验结果表明该重组蛋白能够抑制补体溶血。本研究结果为进一步研究日本血吸虫Sj C1q BP的生物学功能奠定了基础。 相似文献
5.
为研究日本血吸虫丝氨酸-苏氨酸蛋白磷酸酶（SjPP）的免疫功能，构建了原核表达重组质粒pET28a（＋）-SjPP，转化大肠埃希氏菌BL21（DE3）进行诱导表达，并用重组蛋白进行了小鼠免疫保护试验，免疫剂量为每次20μg／只，共免疫3次。结果表明，pET28a（＋）-siPP／BL21（DE3）在0．1mmol／L IPTG诱导2h时，每1g菌体可产生17．8mg以包涵体形式存在的重组蛋白；重组蛋白免疫小鼠后诱导产生了高效价的血清特异性IgG抗体，并获得了部分减虫率、肝组织减卵率和显著的粪便减卵率，具有一定的免疫保护作用。 相似文献
6.
IL-18增强日本血吸虫DNA疫苗Sj23的免疫保护效果 总被引：3，自引：0，他引：3
将小鼠IL-18基因和日本血吸虫Sj23膜蛋白基因分别插入pVAX1载体,构建真核表达质粒pVAX/mIL-18和pVAX/Sj23,联合或单独免疫小鼠,以pVAX1空载体作对照,免疫2次,间隔2周,2次免疫后4周攻击日本血吸虫尾蚴.体液和细胞免疫检测结果表明,联合免疫组能诱导小鼠产生较强的抗日本血吸虫成虫可溶性抗原(SWAP)IgG,较高水平的IFN-γ和IL-2.攻虫试验表明,联合免疫小鼠成虫减虫率和肝脏减卵率分别达41.6%和49.4%,明显高于pVAX/Sj23单独免疫组(减虫率和肝脏减卵率分别为26.5%和41.4%).以上试验结果表明,IL-18能明显增强Sj23 DNA疫苗在小鼠体内的免疫应答,并且产生较强的保护作用. 相似文献
7.
为评估SjTSP2分子作为日本血吸虫DNA疫苗候选抗原分子的潜力,本实验扩增了编码该分子的DNA片段,构建了重组真核质粒pVAX1/SjTSP2,检测其在哺乳动物细胞中表达情况后,通过基因枪轰击法免疫小鼠,应用ELISA、流式细胞术等检测重组质粒诱导的免疫反应,计算减虫减卵率,评估对小鼠日本血吸虫病的免疫保护效果。间接免疫荧光试验结果显示该质粒能在293T细胞中表达。质粒免疫小鼠诱导了显著升高的特异性IgG抗体和IFN-γ、IL-4等细胞因子。小鼠免疫保护试验结果表明,免疫组小鼠虫荷数较PBS对照组增加12.4%(P=0.368),但肝组织虫卵减少10.01%(P=0.486)。说明制备的DNA疫苗能刺激小鼠产生较强的免疫反应,但诱导的免疫保护作用并不理想,为血吸虫DNA疫苗研究提供了参考数据。 相似文献
8.
中国大陆株日本血吸虫23kD基因重组抗原的研究：重组的23kD抗原大… 总被引：4，自引：0，他引：4
把编码中国大陆株日本血吸虫２３ｋＤ抗原大亲水区多肽的ＤＮＡ片段亚克隆到ｐＧＥＸ载体上进行表达，并用重组抗原和载体ｐＧＥＸ表达蛋白分别免疫了二批ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，结果与未免疫小鼠和载体ｐＧＥＸ表达蛋白免疫小鼠相比，重组抗原免疫小鼠分别获得了５７．８０％￣７０．３０％和５２．６３％￣６２．９６％的减虫率，证明重组的日本血吸虫２３ｋＤ抗原大亲水区多肽可诱导宿主抗血吸虫攻击感染的部分保护力。 相似文献
9.
日本血吸虫多价核酸疫苗的构建及免疫保护试验 总被引：2，自引：0，他引：2
利用PCR技术获得日本血吸虫GST抗原基因,通过分子克隆技术将GST、FABP基因克隆至pVAX1载体,并将其克隆至舍有Sj23基因表达核的plRESneo栽体,构建重组质拉pVAX-GST、pVAX-GST-FABP、pIRESneo-Sj23和pIRESneo-GST-FABP-Sj23.将50只昆明小鼠随机分成5组,每组10只,分别以肌肉注射质粒pIRESneo-GST-FABP-Sjz3、plRESneo-Sj23、pVAX-GST、pVAX-GST-FABP和空白质粒plRESneo,50μg/只,免疫2次,每次间隔21 d.测定小鼠免疫前后血清抗体水平,30 d经腹部皮肤感染血吸虫尾蚴,45 d后剖杀小鼠,计数各组小鼠虫卵数及成虫数.结果表明.重组质粒pVAX-GST、plRESneo-Sj23、pVAX-GST-FABP和pIRESneo-GST-FABP-Sj23均能诱导小鼠产生特异性的IgG抗体,plRESnecrGST-FABP-Sj23免疫组所诱导的IgG水平最高;减虫率分别为26.1%、30.8%、33.2%和47.5%,减卵率分别为25.4%、45.0%、48.4%和69.8%.pIRESneo-GST-FABP-Sj23的减卵率和减虫率明显高于其他DNA疫苗.结果表明,日本血吸虫多价核酸疫苗能产生较强的免疫反应,并能获得较好的免疫保护效果. 相似文献
10.
利用PCR技术扩增日本血吸虫Sj CHGC06822 ORF全长序列,以p ET28a(+)为载体构建重组质粒,大肠杆菌表达系统进行表达,His-Ni柱层析纯化r Sj CHGC06822/His蛋白后,生物信息学分析其可能结构,Western blot分析其抗原性。利用重组蛋白免疫BALB/c小鼠评估其免疫效果,ELISA分析血清抗体亚型变化。结果显示,获得日本血吸虫Sj CHGC06822的完整ORF序列591 bp,编码192个氨基酸,序列aa37~aa72含一个EF-hand手性域结构,无信号肽及跨膜结构。获得的Sj CHGC06822/His重组蛋白具有较好的抗原性,在2次独立BALB/c小鼠实验中,与PBS对照组相比,Sj CHGC06822/His蛋白免疫组诱导小鼠获得30.36%、40.26%减虫率和30.14%、12.28%肝脏减卵率,血清Ig G抗体免疫及感染后持续增高,Ig G2a和Ig G1水平随免疫次数增高,感染后出现下降,但Ig G2a/Ig G1(1)水平持续增加。本研究成功克隆了Sj CHGC06822基因,并成功表达纯化了r Sj CHGC06822/His蛋白,且免疫原性和反应原性良好。Sj CHGC06822蛋白免疫可以诱导BALB/c小鼠产生一定的保护力,诱导宿主的免疫应答更偏向于Th1型。 相似文献
11.
本研究利用生物信息学分析了日本血吸虫(Schistosoma japonicum,sj)Glycogen synthase kinase 3(GSK3)蛋白,并对其中一个GSK3蛋白的编码cDNA进行了克隆和原核表达,制备了特异性的多克隆抗体.同时,还初步评估了重组蛋白的免疫保护效果.生物信息学分析表明在日本血吸虫数据库存在两种GSK3蛋白,且其中一个SjGSK3在日本血吸虫不同发育时期均有转录.Western blot结果表明本研究制备的抗体能特异性识别日本血吸虫SjGSK3重组蛋白,表明该重组蛋白具有良好的免疫原性.动物实验表明免疫SjGSK3重组蛋白的动物与佐剂对照组比较分别获得了平均10.6％减虫率和40.5％肝脏减卵率. 相似文献
12.
Abáné JL Oleaga A Ramajo V Casanueva P Arellano JL Hillyer GV Muro A 《Veterinary parasitology》2000,91(1-2):33-42
Two strains of mice (NMRI and C57/BL) were each immunized with a 15kDa recombinant Fasciola hepatica fatty acid binding protein (FABP) (Fh15) and challenged percutaneously with Schistosoma bovis cercariae. C57/BL mice immunized with Fh15 had significant reductions in S. bovis worm burden recoveries (72% reductions over controls). When using NMRI mice, Fh15 in Freund's adjuvant failed to induce significant protection against S. bovis. In C57/BL mice, only antibodies to the IgG2a isotype increased after the second immunization and remained high through 8 weeks of S. bovis infection. This is the first time that a heterologous recombinant molecule from F. hepatica has been used in vaccination against S. bovis, obtaining a significant reduction in the number of worms in C57/BL mice. 相似文献
13.
旋毛虫肌幼虫分泌性蛋白P49基因的克隆与表达 总被引：3，自引：0，他引：3
通过设计、合成引物，以旋毛虫RNA为模板，用RT—PCR法扩增出旋毛虫P49序列，并进行了序列测定。将P49基因亚克隆至表达载体pET—28b中，转化大肠杆菌BL21感受态细胞，经IPTG诱导表达，作SDS—PAGE及Western blot分析。结果表明，PCR法扩增出P49序列，其大小约为960bp，将构建的重组质粒pGEM—P49进行序列测定表明其与Genbank中的P49序列具有高度的同源性。成功构建了重组表达载体pET—P49；SDS—PAGR及Western blot分析表明，表达产物分子量约为38kDa，约占菌体总蛋白的7％左右，且能被感染旋毛虫猪阳性血清所识别。 相似文献
14.
东方田鼠血清筛选噬菌体展示抗原对小鼠日本血吸虫病免疫效果观察 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究利用前期研究中东方田鼠血清筛选日本血吸虫成虫噬茵体展示cDNA文库获得的10个阳性克隆中的8个噬茵体克隆单独或联合免疫BALB/c小鼠,观察对日本血吸虫病的免疫预防效果,以筛选其中具有发展成疫苗的候选抗原编码基因.研究发现与空白对照组相比,展示血吸虫锌指蛋白的1号噬茵体克隆免疫组在两次实验中分别获得了32.10%和31.25%的减虫率、61.14%和47.31%的肝脏减卵率,虫体合抱率分别由92.59%、57.39%下降到69.09%、41.03%;其它噬茵体克隆单独免疫组或联合免疫组在第一次实验中均获得了8.02%～32.72%的减虫率和40.19%～69.53%的减卵率,但在第二次实验中未能得到验证.研究结果提示,日本血吸虫环状锌指蛋白(1号克隆)编码基因在疫苗方面具有重要研究价值. 相似文献
15.
Jennifer Keiser Vincenzo Veneziano Laura Mezzino Giuseppe Cringoli 《Research in veterinary science》2010,88(1):107-143
In light of rapidly spreading triclabendazole resistance alternative fasciocidal drugs are urgently needed. Following up on promising results obtained with artemether in Fasciola hepatica infected sheep, we here report the efficacy and safety of artesunate in sheep with a natural F. hepatica infection. Artesunate was administered intravenously and intramuscularly, adverse events were monitored and drug efficacy was elucidated by means of faecal egg and worm burden reductions. A single 40 mg/kg intravenous dose of artesunate induced an egg count reduction of 68.9% and a worm burden reduction of 77.4%. Intramuscular artesunate at 40 mg/kg reduced faecal egg count and worm burden by 97.6% and 91.9%, respectively; whereas at 60 mg/kg it caused 93.2% and 87.1% reduction in faecal egg count and worm burden, respectively. Three sheep died 24-72 h post-treatment with a double dose of 40 mg/kg intramuscular artesunate, showing lethargy, sialorrhoea, reduced rumination and tremors. Egg and worm burden reductions of 93.3% and 83.9%, respectively, were calculated in the three surviving sheep. In conclusion, the interesting fasciocidal properties of artesunate in sheep warrant further investigations with an emphasis on toxicity studies. 相似文献
16.
为探索吡喹酮新制剂早期治疗血吸虫病效果,对人工感染日本血吸虫20d的小鼠皮下给药进行减虫率、肝脏减卵率统计,并在不同时间点对口服组和皮下注射吡喹酮新制剂组的未感染小鼠在给药后采集血浆,高效液相色谱法建立药时曲线。结果显示新制剂600mg/kg剂量治疗的3次试验的减虫率分别为72.88%、82.69%和56.7%,肝脏减卵率分别为81.7%、94.8%和70.7%,对感染20d期别的血吸虫有较好效果。而高效液相色谱法检测血药浓度显示,新制剂经皮下给药方式可使有效杀虫浓度(约0.3μg/mL)持续10d以上,具有缓释作用。吡喹酮新注射制剂能杀灭20d童虫,减少血吸虫病的危害,对血吸虫病的防治有较大的意义。 相似文献
17.
以筛选安氏隐孢子虫T7噬菌体展示文库获得的肌动蛋白（CA42）部分编码基因的序列设计特异性引物,扩增目的基因CA42,构建重组表达载体pET-28a-CA42,通过大肠杆菌BL21的诱导表达,产物经SDS-PAGE和Western-blotting鉴定。然后纯化重组蛋白,免疫BALB／c进行体液和细胞免疫水平的检测,并观察重组蛋白对微小隐孢子虫的交叉保护性效果。结果显示,成功构建重组原核表达质粒pET-28a-CA42,Western-blotting显示重组蛋白约为19ku,能被安氏隐孢子虫免疫小鼠的多克隆抗体识别。重组蛋白免疫BALB／c小鼠的抗体水平差异显著（P〈0．05）,CD4^＋T淋巴细胞数差异均显著,CD4^4／CD8^＋T淋巴细胞数的值与佐剂对照组和空白对照组相比差异均显著（P〈0．05）。各组小鼠经接种微小隐孢子虫卵囊后,试验组与各对照组相比卵囊减少率为32．2％,差异均显著（P〈0．05）。结果表明,成功表达了重组安氏隐孢子虫肌动蛋白,纯化的重组蛋白具有一定的免疫原性和交叉保护性。 相似文献