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鸡β-防御素-3的克隆与诱导表达 总被引：7，自引：1，他引：7
利用反转录PCR（RT—PCR）与套式PCR技术检测Gal-3基因在鸡体不同组织的分布表达。实验结果表明Gal-3基因在法氏囊、皮肤、舌头、肺脏、骨髓、气管等组织中广泛分布，在肾脏、脾脏、肝脏、胰脏等组织中没有检测到。对从鸡骨髓中扩增出来的β-防御素（Gal-3）cDNA进行克隆测序表明扩增出的cDNA碱基数为297bp，与GenBank中的Gal-3cDNA序列完全相同。核苷酸序列比较表明在同源性上，Gal-3与Gal-1、Gal-2基因核苷酸相似性分别为75％、50％，同火鸡GPV-1基因同源性最高，达9l％。体外诱导表达实验表明在气管上皮细胞中LPS与灭活卡介苗可以诱导Gal-3的表达；Gal-3在法氏囊细胞、肺上皮细胞的表达为持续性表达。 相似文献
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重组鸡抗菌肽Gallinacin-9的原核表达及其抗菌活性的鉴定 总被引：7，自引：2，他引：5
采用RT—PCR方法,从鸡舌组织中扩增到Gallinacin-9（Gal-9）基因,测序表明Gal-9为201bp,其成熟肽由67个氨基酸残基组成。进一步将克隆的Gal-9基因亚克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1的EcoR I和Sal I双酶切位点上,构建重组表达质粒pGEX—Gal-9,经序列分析鉴定确证目的基因克隆人载体的预期位点。将重组质粒转化大肠杆菌BL21,于37℃诱导培养不同时间,SDS-PAGE电泳表明该基因在大肠杆菌中高水平表达,表达的重组鸡Gab-9融合蛋白相对分子质量约为32ku。重组蛋白占菌体总蛋白的40％。表达的重组鸡Gal-9融合蛋白以包涵体的形式存在。重组蛋白经纯化后,分别以对数生长中期的大肠杆菌BL21（DE3-）株与致病性链球菌CAB株为检测菌,利用薄层平皿琼脂糖孔穴扩散法测定了重组Gal-9蛋白的抗菌活性,结果表明,重组Gal-9对这2种细菌都具有抗菌活性。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2015,(19)
为了探讨食物中毒马不同组织器官中TLR3、TLR7、TLR8和TLR9基因的表达情况,试验采用SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法检测食物中毒马和健康马(对照组)胃、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、十二指肠、盲肠和骨髓中TLRs基因的转录水平。结果表明:在食物中毒马胃、肝脏和十二指肠中的TLR3、TLR7、TLR8、TLR9基因相对表达量均显著高于对照组(P0.05),在所检测的食物中毒马的9个组织器官中(除肺脏外)TLR9基因表达量与对照组相比差异显著(P0.05)。说明食物中毒可引起马胃、肝脏和十二指肠的变化,推测TLR9基因在机体抵御食物中毒中发挥着重要作用。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2016,(13)
为了探讨甘露(聚)糖结合凝集素(Mannan-binding lectin,MBL)基因在绵羊不同组织和品种间的表达差异,试验利用实时荧光定量PCR技术分析MBL基因在绵羊8个不同组织器官和外周血白细胞中的表达差异,以及在4个品种中的表达差异。结果表明:MBL基因在绵羊心脏、体侧部皮肤、肝脏、肺脏、肾脏、小肠、脾脏、小脑及血液白细胞中具有不同程度的表达,其中肝脏中表达量最高,肺脏和脾脏中表达量次之,心脏和小肠中表达量最低。MBL基因在哈萨克羊肝脏中表达量最高,中国美利奴羊(新疆军垦型)肝脏中表达量次之,萨福克羊和湖羊肝脏中表达量最低。说明MBL基因具有组织特异性表达特征,并且在不同绵羊品种中表达存在差异,其表达量与绵羊的适应性有关。 相似文献
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为分析AMPK等酶对机体代谢的影响,采用酶联免疫分析法（ELISA）,分别测定正常饲养和饥饿48 h后藏羊各组织的AMPK、ACC和GS的活性.结果表明：AMPK、ACC和GS分布于藏系绵羊各组织中,且各组织器官中3种酶活性差异显著（P＜0.05）;饥饿应激导致骨骼肌、肝脏、肾脏和小肠组织中AMPK活性升高,骨骼肌、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和小肠组织中ACC活性下降,骨骼肌、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和小肠组织中GS活性下降.因此,AMPK、ACC和GS在藏系绵羊的各组织器官中分布广泛;饥饿应激可能通过激活AMPK表达,下调ACC和GS表达而调节藏羊的应激代谢. 相似文献
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实验旨在探究Myf5、Myf6基因在黔北麻羊和努黔F_1代各组织间的相对表达水平。应用实时荧光定量PCR法检测Myf5、Myf6基因在黔北麻羊(3只)和努黔F_1代(3只)的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、股二头肌和臂三头肌等组织间的相对表达量。结果表明:各组织Myf5、Myf6基因在黔北麻羊和努黔F_1代间表达差异不显著;2种基因在黔北麻羊臂三头肌、股二头肌和背最长肌相对表达量均极显著高于肾脏、肝脏、心脏、脾脏、肺脏(P<0.01),其中Myf5基因在肾脏相对表达量显著高于脾脏和肺脏(P<0.05),Myf6基因在心脏和肝脏相对表达量均显著高于脾脏(P<0.05);2种基因在努黔F_1代臂三头肌、股二头肌和背最长肌相对表达量均极显著高于肝脏、肾脏、心脏、脾脏、肺脏(P<0.01),心脏和肝脏相对表达量均显著高于肺脏(P<0.05)。综上,Myf5、Myf6基因在黔北麻羊和努黔F_1代8种组织中均有表达且表达量不等,在肌肉组织中的表达量最高。 相似文献
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铅在猪不同组织和器官中的富集状态 总被引：1，自引：0，他引：1
本试验旨在研究饲料中铅含量与猪组织和器官中铅含量的关系,及铅在猪各组织和器官中的分布规律,为制定猪可食用器官中铅含量限量标准提供理论依据.将24头大约克夏仔猪随机分为4组,分别饲喂含铅量为0.398mg/kg(对照组),6.095 mg/kg(低剂量组),17.49 mg/kg(中剂量组),51.674 mg/kg(高剂量组)的饲料,持续喂养90 d,屠宰、取其心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、小肠、猪毛、猪皮、脂肪、猪血、骨髓、猪耳、猪舌、猪尾、里脊、臀尖、小排、后腿内,测定其中的铅含量.结果表明,随着饲料中铅含量的增加,猪体内各组织和器官中的铅含量均有不同程度的升高.对照组组织和器官中铅含量由高到低的次序为肾脏>脾脏>肝脏>毛发>其他组织和器官,其中肾脏、脾脏铅含量超标;3个给铅组组织和器官中铅含量由高到低的次序为骨髓>肾脏>脾脏>肝脏>毛发>猪尾>其他组织和器官;其中肾脏、脾脏、肝脏、猪尾均超标,但各组猪的肌肉、脂肪、猪皮、小肠等组织或器官中的铅含量较低,均符合国家标准<食品中污染物限量,GB 2762-2005>.表明随着饲料中铅含量的增加,猪组织和器官中铅的富集有所不同,其中骨髓、肝脏、肾脏和脾脏中的铅含量较高,猪皮、肌肉、脂肪、小肠、猪舌、猪心、猪肺等可食用组织和器官中铅的含量较低. 相似文献
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《中国畜牧杂志》2014,(3)
为探讨中国蒙古马不同组织中TLR3、TLR7、TLR8和TLR9的表达情况,采用SYBR GreenⅠ荧光定量RTPCR方法对心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、十二指肠、空肠、盲肠和骨髓中TLRs基因的转录水平进行测定。结果表明:4种TLRs基因在被检测的10个组织中均有转录。其中,TLR3在肾脏中的表达量最高,在脾脏中的表达量最低;与TLR3相反,TLR7、TLR8和TLR9均在脾脏中的表达量最高,TLR7和TLR8在胃中的表达量最低,TLR9在空肠中的表达量最低。在不同免疫器官中,TLR7、TLR8和TLR9在脾脏中的表达量高于骨髓,而TLR3在骨髓中的表达量高于脾脏。在各肠段中,TLR3、TLR7、TLR8和TLR9在盲肠中的表达量高于十二指肠和空肠;并且均是TLR3和TLR8的表达量高于TLR7和TLR9的表达量。综上所述,TLRs基因mRNA转录水平在蒙古马各组织器官中差异较大,可能与其对病原体的识别和抵抗能力有关。 相似文献
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【目的】克隆白来航鸡半乳糖凝集素-1(galectin-1,Gal-1)基因,对其编码蛋白进行生物信息学分析,并检测其在不同组织中的表达情况,为进一步阐明其抗病毒功能提供科学依据。【方法】以鸡脾脏cDNA为模板,通过PCR扩增鸡Gal-1基因完整CDS区序列,并进行相似性比对及系统进化树构建;运用生物信息学软件对其编码蛋白的理化性质、亲/疏水性、跨膜区、信号肽、修饰结构、保守结构域及高级结构进行预测。利用实时荧光定量PCR检测Gal-1基因在白来航鸡心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑、腺胃、肌胃、十二指肠、空肠、盲肠、直肠、胸肌和腿肌组织中的表达情况。【结果】白来航鸡Gal-1基因CDS区序列长度为408 bp,编码135个氨基酸。相似性比对结果表明,白来航鸡Gal-1基因核苷酸序列与火鸡、绿头鸭和珍珠鸟的相似性分别为97.1%、88.4%和82.2%;系统进化树结果表明,白来航鸡与火鸡亲缘关系最近。Gal-1蛋白分子质量为15.06 ku,理论等电点为6.57,不稳定系数为36.05,脂肪系数为74.30,平均亲水指数为-0.259。Gal-1蛋白无信号肽,不存在跨膜区;存在2个明显的... 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2017,(15)
为了进行猪A-FABP基因的克隆及不同器官组织中的差异表达,试验采用RT-PCR方法从长白猪背最长肌中克隆A-FABP基因的cDNA序列并进行测序比对,分别与人、牛、山羊、家鼠及鸡进行同源性比较,应用半定量RT-PCR方法检测猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、腿肌中A-FABP基因的表达。结果表明:成功克隆得到A-FABP基因的cDNA序列,且比对结果为100%,该序列与人、牛、羊的同源性分别为90.98%、89.97%、89.97%,与鸡的同源性为73.68%。半定量RT-PCR结果为A-FABP基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、腿肌器官组织中均有表达,其中背最长肌和腿肌中A-FABP基因的表达量最高,肺脏内的表达量最低,A-FABP基因在动物进化中具有高度保守性,该基因在猪不同器官组织中的表达具有差异性。 相似文献
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采用RT-PCR方法从广西黄鸡骨髓中扩增了β-防御素Gal-4基因的cDNA片段。序列分析结果表明，获得的广西黄鸡Gal-4基因大小为321bp，推导的Gal-4由63个氨基酸组成，其中N端20个氨基酸为信号肽，C端38个氨基酸组成Gal-4的成熟肽。另外，分析了Gal-4基因在正常广西黄鸡（对照组）和H9N2禽流感病毒感染的广西黄鸡（感染组）的肺、肝、腔上囊、十二指肠、肾、气管组织中的表达情况。分析结果表明，在检测的6个组织中，肺、十二指肠、肾组织Gal-4基因的表达在感染组和对照组之间没有明显的差别，而在肝、气管和腔上囊组织中的表达有明显差异，感染组比对照组的Gal-4阳性样品数多。在肝组织中，对照组的30个样品检测到26个阳性样品，而感染组的30个样品全都是阳性；在气管组织中，对照组30个样品检测到19个阳性样品，而感染组的30个样品检测到24个阳性样品；在腔上囊组织中，Gal-4基因的诱导表达情况非常明显，对照组30个样品中仅有9个阳性，而感染组的30个样品中有21个阳性。 相似文献
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钙激活中性蛋白酶（CAPN3）参与哺乳动物体内多种重要的生理生化过程,但是有关它的确切生理功能和作用机制研究较少。本研究采用实时荧光定量PCR技术检测CAPN3基因在草原红牛多种组织中的表达水平差异情况。试验结果表明,CAPN3基因在所检测草原红牛的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、十二指肠、瘤胃和背最长肌8种组织中均有表达,且在不同组织中的表达水平有所不同。草原红牛脾脏中的CAPN3基因表达量显著高于其他组织,十二指肠和瘤胃中的CAPN3基因表达量显著高于心脏、肝脏、肺脏、肾脏和背最长肌。本试验为肉牛肉质性状的改良提供了分子遗传学依据,并为深入研究草原红牛体内CAPN3基因的生物学作用及作用机制奠定了基础。 相似文献
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钙激活中性蛋白酶(CAPN3)参与哺乳动物体内多种重要的生理生化过程,但是有关它的确切生理功能和作用机制研究较少.本研究采用实时荧光定量PCR技术检测CAPN3基因在草原红牛多种组织中的表达水平差异情况.试验结果表明,CAPN3基因在所检测草原红牛的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、十二指肠、瘤胃和背最长肌8种组织中均有表达,且在不同组织中的表达水平有所不同.草原红牛脾脏中的CAPN3基因表达量显著高于其他组织,十二指肠和瘤胃中的CAPN3基因表达量显著高于心脏、肝脏、肺脏、肾脏和背最长肌.本试验为肉牛肉质性状的改良提供了分子遗传学依据,并为深入研究草原红牛体内CAPN3基因的生物学作用及作用机制奠定了基础. 相似文献
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为了探究CD46基因在新疆褐牛不同组织中的表达丰度差异,初步掌握CD46基因在新疆褐牛不同组织中的表达规律,试验设计了特异性引物,应用实时荧光定量PCR技术分析新疆褐牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、小肠、大肠、胃、肌肉、卵巢和乳腺中的CD46基因表达情况。结果表明,新疆褐牛CD46基因在所检测的11种组织中均有表达,不同组织部位的表达存在差异,其中肝脏CD46表达丰度最高,其表达丰度显著高于肺脏、脾脏、肾脏、胃、小肠、大肠、卵巢和乳腺（P< 0.05）。本研究对新疆褐牛各组织CD46基因的表达规律进行初步分析,为CD46基因表达规律与其生物功能研究的开展提供了参考依据。 相似文献
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采用RT-PCR 方法从三黄鸡肝脏中扩增β-防御素 Gal-6基因的 cDNA 片段,构建重组表达质粒pGEX-6p-1-GAL-6,将重组质粒转化至大肠杆菌BL21进行原核表达。结果表明,成功获得201 bp的鸡β-防御素基因,SDS-PAGE 电泳分析表明,原核表达的重组鸡融合蛋白分子质量约为32 kD。此外,表达的该重组蛋白对金黄色葡萄球菌有较高抗菌活性。 相似文献
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试验旨在研究myoneurin（MYNN）基因在猪不同组织中的表达特征及其在肌肉（背最长肌、股二头肌和腰大肌）、小脑、肝脏、胰脏、肾脏、胃、脾脏、肺脏组织中的发育性表达规律。采用实时荧光定量PCR技术研究猪MYNN mRNA在90日龄大白猪和马身猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、小脑、小肠、胰脏、胃、股二头肌及脂肪共11个组织中的表达谱,以及在大白猪和马身猪1、90、180日龄3个发育阶段的肌肉、小脑、肝脏、胰脏、肾脏、胃、脾脏、肺脏组织中的发育性表达规律。结果表明,MYNN在猪的各种组织中广泛表达,且各组织间表达差异显著或极显著（P < 0.05;P < 0.01）;MYNN在大白猪和马身猪的肌肉、小脑、肝脏、胰脏、肾脏、胃、脾脏、肺脏组织中的不同发育阶段表达差异显著或极显著（P < 0.05;P < 0.01）,并具有特定规律,由此推测其可能在猪的这几种组织中发挥重要作用。MYNN基因的表达与组织、日龄及品种的遗传背景有关。本试验为研究猪MYNN基因的生物学功能提供了依据,但还需要深入的研究来探索其作用的具体机制,尤其是在骨骼肌发育中的调节机制。 相似文献