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1.
《畜牧兽医学报》2016,(3)
通过建立PCV2亚临床感染模型,探究感染仔猪肺泡巨噬细胞中干扰素的变化及其调控,为PCV2复制和发病机制研究提供补充。30日龄猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原和抗体均为阴性的仔猪15头,随机分成PCV2阴性对照0d组、PCV2感染14d组和PCV2感染28d组。感染后荧光定量PCR方法检测肺泡巨噬细胞中干扰素、模式识别受体和模式识别受体接头分子mRNA水平。结果显示,IFN-β和IFN-γmRNA转录水平在14和28d均显著高于对照组(P0.05);模式识别受体RIG-1、MDA-5、TLR4和TLR9mRNA转录水平在14和28d显著升高(P0.05);DAI mRNA转录水平在14d显著升高(P0.05),但28d迅速下降;TLR3、TLR7和TLR8mRNA转录水平无明显变化。接头分子MAVS、MyD88、IRF3和IRF7mRNA转录水平在14和28d均显著高于对照组(P0.05)。以上结果表明,PCV2亚临床感染仔猪后导致肺泡巨噬细胞内IFN-β和IFN-γ的表达量上调,其上调和PCV2激活的TLR4/TLR9/MyD88和RIG-1/MDA-5/DAI/MAVS/IRF3信号通路有关。 相似文献
2.
《畜牧兽医学报》2017,(1)
为了明确禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)感染对宿主天然免疫应答的影响,利用实时荧光定量PCR方法检测ARV感染SPF鸡后外周血淋巴细胞中天然免疫相关基因,包括Toll样受体(TLRs)、MDA5、IPS-1、IRF-3、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IFITM3、Mx1和OASL等基因在感染后0、12h以及1、2、3、5和7d的转录水平变化。结果表明,ARV感染SPF鸡后7d以内,外周血淋巴细胞中TLR3和TLR21的mRNA转录水平显著降低(P0.05或P0.01);而TLR7和MDA5的mRNA转录水平则在整个试验过程中显著升高,分别在7dpi和1dpi达到峰值(P0.05或P0.01)。IPS-1的mRNA转录被抑制;IRF-3则呈显著转录上调趋势;IFN-α、IFN-β和IFN-γ均表达上调,分别在2~3dpi达到峰值(P0.05或P0.01)。IFITM3、Mx1、OASL的mRNA转录水平也显著升高,均在3dpi达到峰值(P0.01)。试验结果表明ARV在感染早期能够显著性引起TLR7、MDA5、IRF3、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IFITM3、Mx1和OASL的转录上调,抑制TLR3、TLR21和IPS-1的转录,为进一步阐释ARV的分子致病机制和免疫应答机制奠定了基础。 相似文献
3.
试验旨在建立猪圆环病毒2型（PCV2）诱导的小鼠体内免疫细胞氧化胁迫模型。筛选PCV2感染剂量及感染时间,采用腹腔注射、滴鼻和灌胃3种途径联合方式于第1、2、3 天或第1、3、5、7天给予昆明系小鼠感染PCV2病毒原液或10－1 PCV2病毒液,分别于感染后7、14、21 d剖杀小鼠,测定活性氧（ROS）、总谷胱甘肽（T-GSH）、还原型谷胱甘肽（GSH）、氧化型谷胱甘肽（GSSG）水平及黄嘌呤氧化酶（XOD）、髓过氧化物酶（MPO）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）活性,探讨PCV2感染时间与活性氧水平变化的关系,建立免疫细胞氧化胁迫动物模型。结果显示,第1、2、3天每天经3种途径联合感染PCV2病毒原液,1 mL/只,为后续试验感染最佳方案。PCV2感染小鼠3个时间点细胞内ROS水平较空白对照组均极显著升高（P < 0.01）,感染后7、14 d GSH水平显著降低（P < 0.05）;感染后7 d GSSG水平极显著高于空白对照组（P < 0.01）;感染后7 d T-GSH水平显著低于空白对照组（P < 0.05）,感染后14 d T-GSH水平极显著低于空白对照组（P < 0.01）。感染后7 d脾脏XOD、MPO、iNOS活性与空白对照组相比均存在显著差异（P < 0.05）。结果表明,PCV2成功感染小鼠,试验感染方案为第1、2、3 天每天经3种途径联合感染PCV2病毒原液,1 mL/只,且用PCV2病毒原液感染7 d是建立小鼠体内免疫细胞氧化胁迫模型的最佳条件。 相似文献
4.
为探索海藻多糖可溶性粉对自然感染PCV2仔猪血清中细胞因子的调节作用,随机选取80头35-50日龄自然感染PCV2的仔猪,设海藻多糖可溶性粉高(400 mg/kg)、中(200 mg/kg)、低(100 mg/kg)剂量组及黄芪多糖对照组,连续用药7 d;另设阳性对照组和无PCV2感染阴性对照组,每组20头。从给药开始连续14 d观察仔猪临床症状,分别于用药前、用药后第7、14天,每组随机选取10头前腔静脉采血,检测血清中IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ及IgG水平。结果显示,相比于用药前,在用药后第7、14天,各用药组临床症状改善明显;血清中IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α、IgG含量有不同程度升高。结果表明,给予不同剂量的海藻多糖可溶性粉7 d,可提高自然感染PCV2的仔猪免疫能力,且临床推荐给药剂量为200 mg/kg饲料,连用7 d。 相似文献
5.
《中国预防兽医学报》2020,(6)
为比较3种TLR配体对猪圆环病毒2型(PCV2)病毒样颗粒(VLP)疫苗的佐剂活性,本研究利用重组大肠杆菌表达脑膜炎奈瑟菌Ag473脂蛋白、创伤弧菌FlaB鞭毛蛋白和结核分枝杆菌热应激蛋白70(Hsp70),采用镍亲和柱纯化获得该3种重组蛋白;分别将相同剂量(10μg)3种重组蛋白、ISA206佐剂(100μL)和不完全弗氏佐剂(FIA)(100μL)与PCV2 VLP疫苗(50μg)混合,肌肉注射免疫小鼠,初免后14 d加强免疫1次;初免后每周采血分离血清,采用ELISA检测抗原特异抗体;加强免疫后14 d利用PCV2攻毒,攻毒后7 d和14 d采血分离血清,采用荧光定量PCR检测病毒DNA拷贝数;攻毒后14 d迫杀小鼠,制备并培养其脾细胞,经PCV2 VLP疫苗刺激后,采用试剂盒检测细胞因子的表达。SDS-PAGE分析结果显示,3种TLR配体在重组大肠杆菌中均获得正确表达,纯化重组蛋白的纯度大于90%。从初免14 d起,3个分子佐剂组中Ag473佐剂组的PCV2抗体水平最高,但低于ISA206佐剂组却高于FIA组,差异不显著(p0.05)。在PCV2攻毒前,3个分子佐剂组中Ag473佐剂组的小鼠脾细胞TNF-α和IFN-γ表达水平最高,但低于ISA206佐剂组却高于FIA组,差异显著(p0.05);Hsp70佐剂组的IL-4表达水平最高,Ag473佐剂组次之,但均高于ISA206和FIA组。在攻毒后第7 d,5个免疫组小鼠的病毒拷贝数均较对照组显著下降(p0.05),但免疫组间差异不显著;在攻毒后第14 d,5个免疫组小鼠的病毒拷贝数进一步下降,免疫组间差异不显著。研究结果表明在测试的3种分子佐剂中,Ag473脂蛋白具有较强的总体免疫佐剂活性,有望进一步开发为PCV2等病毒的亚单位疫苗佐剂。 相似文献
6.
为了解猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)感染对仔猪的肺泡巨噬细胞(PAM)免疫功能造成的影响,试验对PCV2感染40日龄左右健康仔猪PAM模式识别受体TLR2、TLR4、CD16、CD18 mRNA的动态变化进行了研究。结果发现,在病毒感染后TLR2、TLR4、CD16 mRNA的转录水平动态变化基本相似,3、7 d高于对照组,14 d低于对照组,28 d接近对照组,且3 d时TLR4、CD16差异极显著(P<0.01),14 d仅TLR2差异显著(P<0.05);CD18 mRNA的转录水平,3 d时显著低于对照组(P<0.05),而7 d时显著高于对照组(P<0.05),28 d接近正常。以上结果表明,PCV2感染PAM后可引起PAM对异物识别吞噬功能与吞噬后信号转导功能出现紊乱,影响了PAM吞噬和清除病原微生物的能力。 相似文献
7.
《中兽医医药杂志》2017,(3)
研究PCV2和PRV混合感染对仔猪血清白细胞介素及IFN-γ水平的影响。将34头仔猪分为PRV单感染组(Ⅰ组)、PCV2单感染组(Ⅱ组)、PCV2和PRV混合感染组(Ⅲ组)及对照组,Ⅰ组颈部肌内注射PRV 2 mL,Ⅱ组颈部肌内注射PRV2 2 mL,Ⅲ组颈部肌内注射PRV、PRV2各1 mL,对照组颈部肌内注射生理盐水2 mL。分别在实验第0、3、7、14、21、35天空腹前腔静脉采血、分离血清,用ELISA方法检测仔猪血清中IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ含量。结果显示,混合感染组猪第8~14天发生死亡,IL-4、IL-10水平均呈上升趋势;IL-6水平呈先下降、后上升、再下降的趋势,第3天达到最低值;IFN-γ水平呈先下降、后上升的趋势,第3天达到最低值。PCV2和PRV混合感染对仔猪免疫系统的影响及PCV2引起的免疫抑制机制对该病的防治提供了科学依据。 相似文献
8.
用PCV2 B1株经鼻腔接种40日龄SPF仔猪,于接种后3、7、14 d宰杀,收集皮肤源树突状细胞(DC).利用实时荧光定量PCR技术对感染仔猪皮肤源DC的IL-10、TNF-α、IFN-α、IL-8、趋化因子受体1(CCR1)、CCR5在mRNA转录水平的变化进行定量分析.结果表明,IFN-α在接种后3 d(3DPI)显著下调(P＜0.05),TNF-α、IL-10在7DPI时显著上调(P＜0.05);趋化因子IL-8在3、7、14 DPI时均下调,差异接近显著;MCP-1在感染后3、14DPI下调,7DPI均上调,但不显著;MIP-1β在3、7DPI明显上调,14DPI恢复正常;趋化因子受体CCR1、CCR5在3、7和14DPI均上调,且7DPI显著上调(P＜0.05).以上结果表明PCV2在感染早期可抑制DC炎性反应的能力,免疫应答失调,影响了动物机体的细胞和体液免疫功能的发挥. 相似文献
9.
将猪圆环病毒2型（PCV2）BF株经口、鼻接种40日龄健康普通仔猪，于接种后不同时间宰杀，收集肺泡巨噬细胞（PAM），同时设立对照。用竞争PCR技术测定趋化性细胞因子IL-8和MCP-1 mRNA水平，分析PCV2感染对其mRNA表达的影响。结果显示，与对照组相比，在PCV2感染后第7d，IL-8mRNA水平下降至最低，随后迅速上升，至第14d时达到高峰，而后快速下降，但仍维持较高水平；MCP-1 mRNA水平在攻毒后第3d下降至最低，之后逐渐上升，至第14d时达到高峰，而后下降，第21d以后恢复正常。结果表明，PCV2感染初期可导致PAM趋化性细胞因子IL-8和MCP-1基因的转录明显下调。 相似文献
10.
猪圆环病毒2型感染后猪外周血淋巴细胞IL-2、IL-4、IL-10、IL-12p40、IFN-γ和TNF-α mRNA转录的变化 总被引：7，自引：2，他引：5
采用竞争定量RTPCR技术（qcRT—PCR）对PCV2感染组和健康对照组外周血淋巴细胞中IL-2、IL-4、IL-10、IL-12p40、IFN-γ和TNF-α mRNA转录水平进行分析。结果表明,在14和21 DPI（Dayspost inoculation）感染组Th1类细胞因子IL-2 mRNA转录水平分别为对照组的5．1（P〈0．01）和24．0（P〈0．01）倍;IL-12p40 mRNA转录水平在14和21 DPI分别为对照组的1．7（P〈0．05）和1．2（P〈0．05）倍;感染组IFN-γ mRNA转录水平除在7 DPI低于对照组外（P〈0．05）,在28和42 DPI均明显高于对照组,分别为对照组的38．2（P〈0．01）和4．0（P〈0．05）倍。Th2类细胞因子波动较为明显,28 DPI IL-4 mRNA转录水平显著高于对照组（P〈0．01）;感染组IL-10 mRNA在7（P〈0．01）和14 DPI（P〈0．05）的转录水平均显著高于对照组,而在35 DPI明显低于对照组（P〈0．05）。在整个试验过程中TNF—α mRNA转录水平没有发生明显变化。上述6种细胞因子mRNA变化结果显示,PCV2感染猪Th1细胞的细胞因子表达水平升高,而Th2细胞的细胞因子在28 DPI前后出现明显波动,尤其是在35 DPI IL-10 mRNA显著下降（P〈0．05）,提示PCV2感染可造成猪体内Th1／Th2免疫应答的失衡,导致细胞免疫应答功能增强而体液免疫应答下降。 相似文献
11.
《黑龙江畜牧兽医》2017,(15)
为了探究传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染雏鸡后抗病毒基因Mx在其体内不同组织的表达变化,试验以IBDV感染3天(22日龄)的SPF蛋鸡为研究对象,应用实时荧光定量PCR方法,检测了IBDV感染组雏鸡与对照组雏鸡法氏囊、盲肠扁桃体、脾脏、胸腺、肝脏、腺胃、十二指肠、卵巢等组织中Mx mRNA和IBDV VP2 mRNA表达水平。结果表明:IBDV感染雏鸡3 d后,Mx mRNA在盲肠扁桃体中表达水平最高,显著高于其他组织(P0.05);其次为法氏囊和肝脏;卵巢表达量最低(P0.05)。IBDV感染组雏鸡各组织Mx mRNA表达水平均显著高于对照组(P0.05)。IBDV感染雏鸡3 d后,IBDV VP2 mRNA在法氏囊中的表达量最高(P0.05),脾脏次之,其他被检组织无统计学差异(P0.05)。说明雏鸡感染IBDV 3 d后,IBDV载量在免疫器官较非免疫器官高;抗病毒基因Mx转录表达水平相对都比较高,其转录表达水平与器官的病毒载量没有明显的相关性。 相似文献
12.
13.
PRRSV和PCV2共感染对猪肺泡巨噬细胞细胞因子IL-10、IL-12p40和IFN-γ mRNA转录的影响 总被引：2，自引：1，他引：2
用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)共感染40日龄健康仔猪,利用实时荧光定量PCR技术对共感染仔猪肺泡巨噬细胞(PAM)细胞因子IL-10、IL-12p40和IFN-γ的mRNA转录水平的变化进行了定量分析。结果表明,IL-12p40 mRNA转录从攻毒后3 d开始显著上调(P<0.05),7 d达高峰,14 d开始下降,但仍显著高于对照组(P<0.05),28 d和42 d低于对照组;IL-10 mRNA在3 d显著上调(P<0.05),14 d达到转录高峰(P<0.01),之后逐渐下降,42 d接近对照组水平;IFN-γmRNA转录水平尽管在3 d和28 d时出现2次转录低峰1、4 d和42 d时出现2次高峰,但只在3 d和7 d差异显著(P<0.05)。由此表明,PRRSV和PCV2共感染可导致PAM细胞因子IL-12p40和IL-10 mRNA的转录在感染早期被激活,而IFN-γ mRNA转录则呈较复杂的动态变化,提示PRRSV和PCV2共感染猪PAM的免疫应答、免疫调节和抗感染功能均受到不同程度的影响。 相似文献
14.
将单一性别、混合性别旋毛虫肌幼虫分别灌胃感染小鼠，新生旋毛虫幼虫尾静脉注射感染小鼠，并以未感染小鼠作对照，在感染后不同时间检测IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10、TGF-β的血清含量变化。结果显示，与对照组相比，在感染后前7 d,混合性别感染组IL-2含量降低，IL-10、TGF-β、IFN-γ含量升高，而IL-4含量无明显变化；感染后7～35 d,混合性别感染组小鼠的5种细胞因子含量均升高。与混合性别感染组相比，感染后前7 d,单一性别感染组小鼠IFN-γ和TGF-β含量较高，IL-2含量较低；在感染后7～35 d, 5种细胞因子含量较低。与对照组相比，在感染后前7 d,新生幼虫尾静脉注射感染组小鼠的IL-2、IFN-γ、IL-10、TGF-β含量升高，而IL-4含量无明显变化；感染后7～28 d,各细胞因子含量均显著性升高。与混合性别感染组相比，在模拟的对应时间点，新生幼虫感染组5种细胞因子变化无显著差异。结果表明，旋毛虫单一性别感染和混合性别感染引起的细胞因子变化在观察期间有较大差异，而新生幼虫感染和混合性别感染在对应时间点细胞因子变化相似。因此，我们认为单一性别感染和混... 相似文献
15.
《中国兽医学报》2016,(11):1916-1922
为探讨氧化应激对猪繁殖与呼吸征病毒(PRRSV)体外感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)后诱导TLR3/NF-kB信号转导中相关蛋白的影响,从PRRSV阴性的健康仔猪肺脏中分离和培养PAMs,随后分为正常对照组、PRRSV各试验组、NAC+PRRSV组以及H_2O_2+PRRSV组,于感染后6、12、24、48、72h收集细胞,Western blot检测各组不同时间段PAMs中TLR3、TRIF、TRAF6以及NF-kB蛋白表达水平的动态变化。结果显示,在PRRSV各试验组,TLR3、TRIF、TRAF6及NF-κB蛋白水平表达与正常对照组相比均升高(P0.05),而且其表达量与感染之间有时间相关性;在NAC+PRRSV组中,TLR3、TRIF、TRAF6及NF-κB的蛋白表达虽有升高,但表达量都比正常接毒组明显下降;在H_2O_2+PRRSV组中,TLR3、TRIF、TRAF6及NF-κB的蛋白表达比正常接毒组表达量明显升高(P0.05)。结果表明,抗氧化剂和促氧化剂可引起PAMs氧化应激状态的改变,从而导致PRRSV感染PAMs后TLR3/NF-κB信号传导通路的相关蛋白水平发生了变化。 相似文献
16.
为了明确PCV2-SD/2008株对猪的致病性,将12头5周龄健康断奶仔猪随机分为PCV2组和对照组,每组6头.PCV2组经口鼻途径接种PCV2 SD/2008株第3代细胞毒(105.61 TCID50/0.1 mL),3 mL/头,对照组经相同途径接种3 mL细胞维持液.PCV2组中的1头猪从感染后14 d开始出现间断腹泻,一直到持续到试验结束.感染后第4、5周,感染组的周平均增重显著低于对照组(P＜0.05).病理组织学检查可见PCV2感染猪的淋巴结和脾脏内淋巴细胞缺失、单核/巨噬细胞和嗜酸性粒细胞浸润;间质性肺炎、坏死性肝炎和肾炎、小血管炎症等变化,并且感染后35 d比感染后14 d的病理变化更加严重.应用免疫组化方法在感染猪的肺、肝、脾、肾、淋巴结、小肠等多种组织中检测到了PCV2抗原,其中颌下淋巴结、肺、小肠中的阳性信号数与检出率最高.结果表明,PCV2 SD/2008株对仔猪具有明显的致病性. 相似文献
17.
探讨刺糖对酒精性肝病(Alcoholic liver disease,ALD)小鼠肝组织TNF-α和TLR4表达及组织病理变化的影响。将42只小鼠随机分成空白组、模型组、水飞蓟宾阳性组、刺糖高、中、低剂量组。模型组以500mL/L酒精造模,空白对照组(15mL/kg生理盐水)、刺糖高、中、低(600、300、150mg/kg)、水飞蓟宾(300mg/kg)灌胃,每日药物处理后用500mL/L酒精(10mL/kg)灌胃2次(分别为药物处理后2h和药物处理后10h),连续3d,末次灌胃酒精12h后,取肝脏提取mRNA,制备肝脏标本进行HE染色,实时荧光定量PCR检测肝组织TNF-α和TLR4mRNA表达。结果表明,与模型组相比,小鼠肝脏中TNF-α和TLR4mRNA表达水平明显降低。各刺糖给药组均抑制酒精引起的TNF-α和TLR4基因mRNA表达水平的增强。刺糖高、中、低剂量组均能够改善酒精所引起的肝脏病理变化。可推出刺糖对酒精引起的小鼠肝损伤有一定的保护作用,其作用机制可能与抑制TNF-α和TLR4基因mRNA表达有关。 相似文献
18.
为分析猪圆环病毒2型(PCV2)感染小鼠后脾细胞中CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)占CD4+T细胞比例的动态变化,探讨Tregs与PCV2感染的关系,本研究选择清洁级昆明小鼠60只,随机分成实验组和对照组,实验组腹腔接种PCV2,分别在接种后第0 d、5 d、10 d、20 d、30 d和60 d取脾脏制备单细胞悬液,用FITC-CD4和PE-CD25单克隆抗体标记Tregs,采用流式细胞仪检测Tregs占总CD4+T细胞百分比的动态变化。结果表明感染组小鼠脾细胞中Tregs百分比从第5 d开始逐步上升,第20 d达峰值后逐渐下降,感染组Tregs百分比第10 d、20 d、30 d时显著高于对照组(p0.05),但第60 d两组间差异不显著(p0.05)。试验结果证明PCV2感染昆明小鼠后,可在小鼠脾脏内诱导明显的Tregs增殖,这些增殖的细胞可能在PCV2感染中发挥免疫抑制作用。 相似文献
19.
禽呼肠病毒感染对SPF鸡外周血T细胞亚型变化和细胞因子转录的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
为探讨禽呼肠病毒(ARV)对SPF鸡外周血淋巴细胞中CD4+、CD8+T细胞数量变化和细胞因子mRNA转录水平的影响,利用流式细胞术和实时荧光定量PCR方法分别测定了ARV感染后1、7、14、21、28、35d感染组和对照组SPF鸡外周血淋巴细胞中CD4+、CD8+T细胞含量和细胞因子IL-1β、IL-6、IL-17、IL-18、IFN-γ、TNF-α基因mRNA相对转录时相。流式细胞术检测结果表明,SPF鸡感染ARV后7d和14dCD4+、CD8+T细胞比值高于对照组,其中感染7d,CD8+T细胞含量差异显著(P0.05);感染后1、21、28、35d感染组CD4+、CD8+T细胞比值均低于对照组,感染1d后CD4+、CD8+T细胞含量均差异显著(P0.05),说明外周血T细胞亚型变化是ARV感染的重要表现之一。实时荧光定量PCR结果表明,与对照组相比,感染组外周血淋巴细胞中IL-1β、IL-6(除7d外)、IL-18(除14d外)和TNF-α在整个感染过程中表达上调,IL-17和IFN-γ除感染1d外,均表达下调,说明IL-1β、IL-6、IL-17、IL-18、IFN-γ和TNF-α均参与了ARV的感染进程。 相似文献
20.
用猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）与猪圆环病毒2型（PCV2）共感染40日龄健康大白仔猪，利用实时荧光定量PCR技术对共感染仔猪肺泡巨噬细胞（PAM）共刺激分子CD80一CD86的mRNA转录水平进行了定量分析。结果表明，在感染后第3d和第7dCD80与CD86mRNA转录显著下调（P〈0．05），感染后第14dCD86mRNA转录水平仍低于未感染对照组。尽管CD80mRNA转录水平在第14d和第28d高于对照组，CD86mRNA转录水平在第28d高于对照组，两者在第42d均高于对照组，但无显著差异。证实，PRRSV和PCV2共感染可导致猪肺泡巨噬细胞的共刺激分子CD80-CD86基因转录在感染早期明显受到抑制，PAM的抗原呈递能力受到影响。 相似文献