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鸡传染性支气管炎病毒CK/CH/LHLJ/04V的分离鉴定及致弱的初步研究 总被引：1，自引：1，他引：1
从黑龙江省某鸡场发病鸡群的肾脏中分离到一株病毒,通过病毒致SPF鸡胚病变特征、对鸡外周血红细胞凝集特性、病毒粒子形态学特征以及RT-PCR鉴定等方面的研究,表明该病毒为鸡传染性支气管炎病毒,并命名为CK/CH/LHLJ/04V。通过对该病毒基因型分析以及对SPF鸡致病性试验发现该病毒为我国近年来流行的一类重要IBV的代表。将该毒株在SPF鸡胚连续传代110代(P110),取不同代次毒进行动物实验。结果显示,该毒株对SPF雏鸡的致病力随鸡胚传代次数的增加而逐渐降低。P110代毒以105.0 EID50/0.1 mL的剂量通过点眼滴鼻接种15日龄SPF雏鸡,鸡群发病率和死亡率均为0。不同代次毒接种SPF鸡对同源毒株P3代强毒的攻击均具有100%保护性。实验表明,IBV毒株CK/CH/LHLJ/04V P110对SPF雏鸡已无致病性,但仍具有良好的免疫原性,可作为研制IB弱毒疫苗的候选毒株。 相似文献
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选择2株鸡传染性支气管炎异种致弱毒株CK/CH/LHLJ/04 V F110、tl/CH/LDT3/03 F120和1株同种毒株CK/CH/LDL97ⅠF115,研究其对中国流行强毒株CK/CH/LDL97 Ⅰ的保护效果.首先对不同毒株及参考毒株的S1基因进行比较和系统进化树分析,研究了CK/CH/LDL97 Ⅰ与其他病毒的基因型关系.结果显示,CK/CH/LDL97 Ⅰ属于有别于其他IBV毒株的一个独立的基因群.在此基础上,通过血清抗体检测、攻毒后发病率、死亡率、临床症状,病理变化观察以及气管和肾脏中病毒分离等方面研究了同种致弱毒株和异种致弱毒株对CK/CH/LDL97 Ⅰ的免疫效力.结果显示,同种致弱毒株对CK/CH/LDL97 Ⅰ强毒的攻击可提供100%的临床和病毒分泌的保护性.异种毒株tl/CH/LDT3/03 F120可提供100%的临床保护,但呼吸道病毒检出率达50%,表明对呼吸系统的保护效果不好.异种毒株CK/CH/LHLJ/04 V F110免疫组临床发病率为50%,气管样品病毒检出率为100%,可见临床和对病毒分泌的保护效果均较差. 相似文献
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选择2株鸡传染性支气管炎异种致弱毒株CK／CH/LHLJ／04V F110、tl／CH／LDT3／03F120和1株同种毒株CK／CH／LDL97 I F115,研究其对中国流行强毒株CK／CH／LDL97I的保护效果。首先对不同毒株及参考毒株的S1基因进行比较和系统进化树分析,研究了CK／CH／LDL97I与其他病毒的基因型关系。结果显示,CK／CH／LDL97I属于有别于其他IBV毒株的一个独立的基因群。在此基础上,通过血清抗体检测、攻毒后发病率、死亡率、临床症状、病理变化观察以及气管和肾脏中病毒分离等方面研究了同种致弱毒株和异种致弱毒株对CK／CH／LDL97I的免疫效力。结果显示,同种致弱毒株对CK／CH／LDL97I强毒的攻击可提供100％的临床和病毒分泌的保护性。异种毒株tl／CH／LDT3／03F120可提供100％的临床保护,但呼吸道病毒检出率达50％,表明对呼吸系统的保护效果不好。异种毒株CK／CH／LHLJ／04VF110免疫组临床发病率为50％,气管样品病毒检出率为100％,可见临床和对病毒分泌的保护效果均较差。 相似文献
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《中国兽医杂志》2020,(6)
从黑龙江某鸡场中分离到1株新城疫病毒(NDV),命名为ck/CH/LHLJ170302株。全基因组序列测定和遗传进化分析表明,ck/CH/LHLJ170302株属于NDV class II类中的基因II型,与LaSota疫苗株的亲缘关系较近。分析基因分子特征发现,与LaSota株相比,ck/CH/LHLJ170302株编码的HN蛋白缺失了433位的糖基化修饰位点,而其他基因之间没有明显差异。进一步比较分析了ck/CH/LHLJ170302株与LaSota株在生长特性、致病性、抗原相关性方面的差异。结果发现,接种SPF鸡胚后,ck/CH/LHLJ170302株在24 h、48 h和72 h的病毒滴度均显著高于LaSota疫苗株(P0.05),表明ck/CH/LHLJ170302株的增殖速度要快于LaSota株。毒力指标测定结果显示,ck/CH/LHLJ170302株引起鸡胚死亡平均时间(MDT)较LaSota株提前了近20 h,1日龄SPF雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)略低于LaSota株。此外,ck/CH/LHLJ170302株与LaSota株的抗原相关性分析结果表明,ck/CH/LHLJ170302与LaSota株没有明显的抗原性差异。本研究结果为我国NDV的遗传变异的研究提供了参考数据。 相似文献
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为研究禽I型副粘病毒(APMV-1)天鹅分离株sw/CH/LHLJ/120608对鸡的致病性,本研究将该病毒以105EID50/m L的剂量,采用点眼和滴鼻的方式感染SPF鸡,检测其致病性,同时,采用荧光定量RT-PCR的方法检测病毒在各组织中的分布。结果显示,sw/CH/LHLJ/120608分离株感染鸡能够引起30%的发病率和6%的死亡率,并且病毒在感染鸡的呼吸系统、消化系统、免疫系统以及泌尿系统中均有广泛的分布。根据对APMV-1实验动物致病性的判定标准,该病毒株对鸡具有中等毒力的致病力特征。 相似文献
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《中国家禽》2021,(11)
为了解河北省鸡细小病毒(Chicken parvovirus,ChPV)在小肠有出血斑病变的鸡群中的流行及遗传变异情况,研究针对ChPV的非结构(NS)蛋白基因设计特异性检测引物,采用PCR方法对送检的151份样品进行检测,并对部分阳性病料中ChPV NS基因进行测序和遗传进化分析。流行病学调查结果显示:ChPV阳性率为48.3%;肉鸡和蛋鸡的阳性率分别为64.3%和44.7%,且幼龄鸡群的阳性率较高;4～5月份和7～8月份样品中ChPV的阳性率较高。序列分析显示测序病料中ChPV/CK/CH/HBSJZ/61株、ChPV/CK/CH/HBBD/62株和ChPV/CK/CH/HBSJZ/68株均与参考毒株ChPV/Poland/G090/2011核苷酸序列同源性最高(98.8%～99.1%),属于火鸡细小病毒(Turkey parvovirus,TuPV)亚群;ChPV/CK/CH/HBZJK/17株与参考毒株GX-CH-PV-17和GX-CH-PV-14的核苷酸序列同源性最高(均为99.7%),属于ChPV亚群。结果表明:河北省有出血斑病变的鸡小肠中ChPV检出率较高,测序样品中ChPV分别属于ChPV亚群和TuPV亚群。 相似文献
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《中国动物传染病学报》2018,(6)
为了明确传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)分离株CK/CH/HD/171018的生物学特性,本研究对所分离IBV CK/CH/HD/171018株首先进行了HA检查阴性、侏儒胚阳性检查及致病性试验;随后设计了23对引物进行全基因组内部序列扩增及使用cDNA末端快速克隆技术获得3'和5'的精准序列,并与不同基因型的参考毒株全基因组进行同源性比对、构建遗传进化树进行基因分型及重组分析。结果显示:该毒株自然状态下无血凝性,接种SPF鸡胚可导致鸡胚发育迟缓并产生典型的侏儒胚现象,对3日龄SPF雏鸡的致死率为100%;CK/CH/HD/171018基因组全长为27 688 bp,结构为5'Cap-Replicase-S-3a-3b-3c/E-M-5a-5b-N-poly(A)3',其中3'有14个A;CK/CH/HD/171018属于QX基因型,该分离株在Gene1的2个位置有QX型野毒株和CK/CH/LSC/99I型野毒株的重组痕迹,属于QX强毒型IBV。本研究丰富了IBV的生物信息数据库,为进一步从分子水平研究IBV的流行情况、变异机制及致病特征等奠定了基础。 相似文献
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利用长距离RT-PCR技术扩增病毒基因组3'端覆盖口蹄疫病毒Asial/JS/China/2005株近全长的3个片段(共约7.5 kb),并利用单一酶切位点将其分别克隆到pBlueseriptSK+载体上.利用融合PCR扩增到基因组5'端含有15个C碱基的基因片段(约700 bp),并将其连接至pGEM-T载体.最后将这4个片段的阳性克隆装配至剔除T7启动子的低拷贝载体pcDNA3.1/Zeo(+)中构建该病毒株的全长cDNA克隆.以构建的FMDV Asial/JS/China/2005株全长cDNA为模板,使用TTRNA聚合酶在体外转录得到病毒RNA,通过脂质体将其导入BHK细胞获得拯救病毒.对收获的病毒分别用RT-PCR、间接免疫荧光、电子显微镜观察和乳鼠致病性分析结果证实,通过体外转录获得了具有感染性的口蹄疫病毒.该株感染性克隆的构建为深入研究口蹄疫病毒的致病机制及研制新型疫苗等奠定了基础. 相似文献
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猪乙脑病毒WHe株的PrM-E、NS1、E-NS2A基因的克隆及序列测定 总被引：1，自引：0，他引：1
本文通过RT-PCR扩增了猪乙型脑炎病毒WHe株主要抗原基因NS1(约1.14 kb)、prM-E(约2.1 kb)、E-NS1-NS2A (约3.0 kb),并将NS1、E-NS1-NS2A、PrM-E基因克隆、测序.与Genbank发表的JEV基因序列进行序列分析,发现WHe株与其他12种典型的JEV强毒株的同源性在88.3 %～99.4 %之间.WHe株与K94P05株的同源性最低(88.3 %),与P3株的同源性最高(99.4 %),可认为WHe株是由P3株衍生而来的.在JEV基因组5'端389～3910的长3522 nt的决定JEV抗原性的C-prM-E-NS1-NS2A区中,WHe株与P3株仅有21个碱基不同,其中的14个单碱基突变为同义突变,另外7个为错义突变,导致相应的氨基酸序列(1173个)中的6个氨基酸发生了变异,其中的5个氨基酸变异出现在含有各关键的抗体中和决定簇的E蛋白内,另一个位于NS1蛋白内. 相似文献
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为进一步了解福建省H9N2亚型禽流感病毒的基因遗传进化关系,本研究将福建省2011年分离的毒株FZ-04、FZ-11与GenBank上登录的2000～2011年福建省分离的H9N2毒株及国内外典型代表株进行HA、NA基因的序列比对和遗传进化分析。结果表明,分离株FZ-04和FZ-11的HA基因与CK/FJ/G9/09株核苷酸同源性最高,属于国内常见的CK/BJ/1/94亚系。HA裂解位点处的氨基酸序列为-PSRSSR/GL-,符合低致病性禽流感病毒的分子特征。NA基因在遗传进化关系上呈现独立的分支,与CK/FJ/10954/05毒株核苷酸序列同源性最高,属于CK/HK/G9/97亚系,且NA基因推导的469个氨基酸序列中没有缺失。同时,从HA和NA基因的遗传进化树上可知,2000～2011年福建省H9N2禽流感病毒进化相对比较稳定,可能有一个共同的起源。 相似文献
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为构建表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)主要免疫原S1蛋白的重组腺病毒,本研究以复制缺陷型人5型腺病毒为载体,以IBVCK/CH/LHLJ/04V株S1基因为外源插入靶基因,通过细菌内同源重组法构建了一株稳定表达IBVS1蛋白(90ku)的重组腺病毒,命名为rAdV-S1。通过PCR鉴定、间接免疫荧光及western blot检测证实S1蛋白在重组腺病毒中获得表达。对构建的重组腺病毒和亲本腺病毒的生长动力学分析表明,该重组病毒的毒价为108.25TCID50/mL,并且两者在生长动力学方面无显著差异。本研究为动物试验和该重组腺病毒免疫特性的研究奠定基础。 相似文献
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Liu S Zhang X Wang Y Li C Liu Q Han Z Zhang Q Kong X Tong G 《Veterinary journal (London, England : 1997)》2009,179(1):130-136
Avian infectious bronchitis virus (IBV) causes tremendous economic losses to the poultry industry worldwide. Different serotypes of this virus show little cross-protection. The present study investigated the genotypic relationship between CK/CH/LDL/97I-type strains and reference IBVs based on S1 gene comparisons and the protection provided by vaccination with commercial vaccines and attenuated homologous and heterologous strains. Phylogenetic analysis and the comparison of S1 showed that CK/CH/LDL/97I-type virus might be a new serotype compared to vaccine strains and other types of IBV isolates in China. Protection efficacy was evaluated by morbidity, mortality, and virus re-isolation from the challenged chicks. Complete protection by IBV vaccination was provided by the homologous strain but sufficient respiratory protection was not provided by the commercial vaccines. Heterologous strains against CK/CH/LDL/97I challenge and the development of a vaccine against CK/CH/LDL/97I-type IBV will be necessary to control infectious bronchitis disease in poultry. Further development of the attenuated CK/CH/LDL/97I strain may provide a valuable contribution towards this goal. 相似文献
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本试验通过鸡胚矮小试验、血凝试验和RT-PCR等方法,从华北地区某鸡场发生疑似肾型传染性支气管炎的发病鸡群分离了1株鸡传染性支气管炎病毒,命名为SX01株.结果显示该分离株能引起鸡胚典型的临床症状;经1%胰酶处理后的尿囊液可凝集鸡红细胞,而未处理的则无血凝活性;利用RT-PCR对分离株M基因序列测定分析结果显示,SX01株的M基因核苷酸序列与GX-GL分离株同源性高达99.4%,与QX基因型毒株SDZB0808核苷酸同源性高达99.1%,与H120株同源性仅为90.0%,与BJ/00/02株M基因核苷酸同源性较低,为90.6%.遗传进化分析结果显示,该分离株与中国地方型分离株(GX-GL、SDZB0808、CK/CH/LJL/110302、DY07、IBVSX7)亲缘关系较近,位于同一进化分支;与H120代表的Mass型疫苗株的亲缘关系较远,是一株肾型传染性支气管炎病毒毒株. 相似文献
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为调查广东地区鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的流行及其遗传变异情况,本研究通过病料SPF鸡胚接种和鸡胚尿囊液的RT-PCR鉴定,于2013年从广东湛江地区不同发病鸡场分离到两株IBV,分别命名为CK/CH/GD/ZJ10/2013和CK/CH/GD/ZJ11/2013,并对这两株IBV的S1基因进行序列分析。结果显示,CK/CH/GD/ZJ10/2013株S1基因全长1 626 bp,编码542个氨基酸,其裂解位点为NRFRR,属于基因型Ⅲ,并推测其为基因型Ⅲ毒株(CK/CH/GX/NN11-3)与基因型Ⅰ毒株(GX-NN-6)在S1基因处发生重组而产生的新毒株;CK/CH/GD/ZJ11/2013株S1基因全长1620 bp,编码540个氨基酸,其裂解位点为HRRRR,属于基因型Ⅰ(类QX型);两株IBV的S1基因间核苷酸序列及其推导的氨基酸序列同源性较低,与位于同一基因型的参考毒株间同源性较高,而与中国使用的Mass型常规疫苗H120和H52之间的同源性最低,仅为75.7%~76.3%和77.1%~77.9%。本研究可为广东省IBV的流行病学调查和分子生物学研究提供参考。 相似文献
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SHANG Hui-qin LI Lin CHEN Rui-ai LIU Hong-bo LIANG Mei-lan HE Dong-sheng 《中国畜牧兽医》2015,42(8):1963-1972
In order to investigate the epidemiology and genetic variation of avian infectious bronchitis virus (IBV) in Guangdong province, two strains of IBV were isolated by inoculation of embryo and RT-PCR detection from diseased chickens at different farms in Zhanjiang, Guangdong province in 2013.We denoted these two strains of IBV as CK/CH/GD/ZJ10/2013 and CK/CH/GD/ZJ11/2013, respectively.Analysis of the S1 gene sequences from these two isolated strains showed that the S1 gene of CK/CH/GD/ZJ10/2013 was 1 626 bp, which encoded 542 amino acids with a cleavage site sequence of NRFRR, while the S1 gene of CK/CH/GD/ZJ11/2013 was 1620 bp, encoded 540 amino acids with a cleavage site sequence of HRRRR.Phylogenetic analysis revealed that these two isolated strains were clustered into genetic groups Ⅲ and Ⅰ(QX-like type), respectively.Homology analysis demonstrated that nucleotide and deduced amino acid sequence homologies between these two isolated strains were lower, while the homologies were higher among the same genotypes, however, the homologies were lower comparing with current vaccine strains such as H120 and H52, with which the nucleotide homologies ranged from 75.7% to 76.3% and the amino acid homologies ranged from 77.1% to 77.9%.Further analysis showed that the CK/CH/GD/ZJ10/2013 strain was formed from a recombination event between CK/CH/GX/NN11-3 and GX-NN-6.Taken together, this study provided valuable insight into prevention and control of IBV infection in Guangdong province. 相似文献
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试验旨在探讨不同来源的传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)诱导SPF鸡发病的免疫机制。选用140只1日龄SPF白来航鸡,随机分为4组,3组攻毒组通过滴鼻点眼途径分别接种鸡源IBV强毒株、鸡源IBV弱毒株和野鸡源IBV毒株3个毒株,对照组以同种方式接种等量灭菌的磷酸盐缓冲液。在感染后12 h、36 h、72 h、7 d和14 d,每组随机选取5只进行剖检,并分别采集法氏囊、肾脏和气管组织,剩余鸡用于观察临床症状、发病及死亡情况。应用实时荧光定量PCR检测攻毒后不同时间点采集的各组织中IBV的病毒载量、Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)及部分细胞因子(白细胞介素(interleukin,IL)和干扰素(interferon,IFN))表达量的变化。结果显示,感染不同来源IBV毒株之后仅鸡源IBV强毒株感染组SPF鸡出现抑郁、翅膀下垂、甩头等典型的临床症状,且在感染后5~10 d共有7只死亡,死亡率为20%。病理剖检发现,感染鸡源IBV强毒株的鸡肾脏肿大、尿酸盐沉积和有花斑样病变,而感染野鸡源IBV毒株、鸡源IBV弱毒株和对照组的鸡无明显的眼观病变。实时荧光定量PCR结果显示,在鸡源IBV强毒株组的法氏囊、肾脏和气管3个组织中均检测到病毒。对照组和野鸡源IBV毒株组中均未检测到病毒,鸡源IBV弱毒株组只在部分组织中检测到病毒。在感染后72 h,鸡源IBV强毒株组与其他各组相比,TLR1、TLR2、TLR3、TLR5、TLR7和TLR15基因在法氏囊中的表达量均显著升高(P<0.05),IL-6和IFN-β参与更强烈的抗病毒免疫反应;在感染后7 d,鸡源IBV弱毒株组与其他各组相比,肾脏中TLR2、TLR3、TLR15、TLR21、IL-6和IL-18基因表达量均显著升高(P<0.05)。野鸡源IBV感染后36 h法氏囊组织中IFN-γ基因表达量显著上调(P<0.05)。综上所述,3个IBV毒株中仅鸡源IBV强毒感染引起SPF鸡典型临床发病症状与可视组织病变,且可提高SPF鸡组织中免疫相关因子的基因表达量。本研究结果揭示,不同来源的IBV对SPF鸡的不同致病性与其感染诱导的免疫反应不同有关。 相似文献
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本研究于2010年8月从河北省某鸡场鸡群中分离一株病毒,通过对分离株进行电子显微镜观察、鸡胚致病性试验、血凝特性试验等生物学特性及鸡传染性支气管炎病毒(IBV)核蛋白基因RT-PCR方法鉴定,结果表明分离株为IBV,命名为ck/CH/LHB/100801.根据GenBank中登录的IBV基因组序列,设计扩增病毒全基因组的19对引物,并扩增病毒基因组,采用3-RACE和5-RACE技术,扩增得到该病毒全部基因组序列.通过与已发表的参考病毒株全基因组序列比较表明,该分离株基因组全长为27 675bp,共有10个开放阅读框,其基因排序为:5'-cap-Replicase-S-3a-3b-3c-M-5a-5b-N-poly(A)-3',纤突蛋白裂解位点为534RRFRR538.序列分析表明ck/CH/LHB/100801与台湾分离株TW2296/95的结构蛋白序列相似性高达99.8%,进化亲缘关系最近,推测两分离株间可能具有相同的进化来源. 相似文献
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《Veterinary microbiology》2014,168(1):88-97
To compare the pathogenicity of PPMV-1 in pigeons and chickens, both species of birds were experimentally infected with strain pi/CH/LHLJ/110822, which was isolated from a pigeon in China. The clinical signs, gross lesions, and histopathological changes were observed in pigeons inoculated with pi/CH/LHLJ/110822. The morbidity and mortality rates were 80% and 70% in pigeons, respectively, whereas there were no clinical signs or gross lesions in chickens inoculated with the same strain. The viral loads in tissue samples were detected by real-time RT-PCR, indicating that six tissue samples (i.e., kidney, lung, brain, trachea, Harderian glands, and proventriculus) had detectable viral RNA in all dead pigeons, and significant differences in viral loads between pigeons and chickens were observed in several tissue samples (i.e., Harderian glands, proventriculus, duodenum, pancreas, small intestine, and large intestine) on 3 days post-inoculation (dpi) and in brain tissue on 7 dpi. In general, viral loads in pigeons were higher than those in chickens, whereas antibody titers in pigeons were lower than those in chickens. These results showed differences in pathogenicity, efficiency of viral RNA replication, and humoral immunity, indicating different susceptibilities between the host species. Additionally, the cross hemagglutination inhibition assay and cross virus neutralization tests demonstrated that pi/CH/LHLJ/110822 antigenicity was different from those of strains La Sota and F48E9. 相似文献