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猪肺炎支原体,又称猪气喘病病原体,是全球养猪业的重要病原体,接种疫苗是控制和预防该病最有效的方法。然而,由于缺乏已知和定性的物种特异性肺炎支原体抗原,其致病机制、血清学常用检测方法及新的重组亚单位疫苗的研究进展缓慢。本试验选择了54个候选基因(在诊断试验中,这些基因的编码蛋白可用作疫苗或抗原),对其进行PCR扩增后,产物克隆至大肠杆菌表达载体中,并分析了重组蛋白的表达、溶解度及产量。结果表明,大多数重组蛋白在包涵体内表达。经尿素或十二烷基肌氨酸溶解后,用镍离子亲和层析纯化重组蛋白,得到30种重组肺炎支原体蛋白,在诊断试验中这些蛋白可用作候选疫苗和抗原。 相似文献
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一株猪肺炎支原体HN0613株的分离鉴定 总被引：1，自引：1，他引：0
采集疑似猪支原体肺炎病理变化的肺脏,经Friis液体、固体培养基培养、纯化,PCR、测序分析、生化鉴定、生长抑制、代谢抑制和致病性试验证实分离获得一株猪肺炎支原体菌株,命名为HN0613.该菌株能适应人工培养基的培养,且传代生长良好,液体培养基中培养达108 CCU/mL;菌株有较强的毒力,可作为疫苗候选株进一步研究.该菌株的分离鉴定为研制猪支原体肺炎灭活疫苗奠定了基础. 相似文献
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胸膜肺炎放线杆菌溶血外毒素研究进展 总被引：1，自引：0，他引：1
猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌(APP)引起的一种呼吸道传染性疾病.根据荚膜多糖和脂多糖抗原表位不同,将胸膜肺炎放线杆菌分为15个血清型,不同血清型的菌株毒力大小不同,致病性也有强弱之别.研究发现与APP致病性有关的毒力因子包括荚膜多糖、脂多糖、外膜蛋白、转铁结合蛋白、溶血外毒素等,其中溶血外毒素是APP引起猪致病最主要的毒力因子,也是主要的保护性抗原.论文从猪传染性胸膜肺炎溶血外毒素的分子结构、致病机制、免疫原性几个方面对其进行综述,为获得以Apx为抗原制备减毒活疫苗提供参考资料. 相似文献
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<正>虽然到目前为止,科研人员尚不能完全解释机体对猪肺炎支原体的免疫机制,但是可以明确的一个事实是,接种疫苗可显著有助于减轻肺部病变的大小以及病原体在体内的持续时间。众所周知,对于优秀的灭活疫苗来说,抗原和佐剂成分都对刺激机体的疫苗免疫反应起到关键作用。经相关研究证实,脂多糖可有利于猪肺炎支原体疫苗对机体所产生的体液和细胞介导的免疫反应。猪肺炎支原体(M.hyo)是引起猪支原体肺炎的一种主要病原, 相似文献
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牛布鲁氏菌膜蛋白的免疫抗原筛选 总被引：1，自引：1，他引：0
试验旨在通过免疫蛋白质组学筛选布鲁氏菌保护性抗原。利用双向电泳技术对试验条件下培养的布鲁氏菌强毒株544A膜蛋白进行分离,结合Western blotting技术分别用豚鼠、牛抗布鲁氏菌血清寻找发生免疫反应的蛋白质。16个免疫蛋白点经胶内酶切、质谱(LC-MS/MS)进行鉴定。利用生物信息学工具发现这些蛋白不全是膜蛋白,还存在胞质蛋白,其功能涉及生物合成和物质代谢等领域。成功建立了布鲁氏菌膜蛋白的免疫蛋白质组学研究方法,为寻找保护性抗原及为新型疫苗抗原候选提供新思路。 相似文献
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人兽共患寄生虫种类多、宿主广泛且危害严重。血吸虫病、棘球蚴病、囊尾蚴病、旋毛虫病、弓形虫病等是常见的重要人兽共患寄生虫病。人类和家畜饱受寄生虫病的危害,这对公共卫生和畜牧业造成了很大的影响。控制传染源、切断传播途径和保护易感群是控制人兽共患寄生虫病流行的综合防控措施。在综合防控策略中,疫苗的使用是切断循环链、控制乃至消灭人兽共患寄生虫病的理想和有效途径之一。选用高效的抗原筛选方法挖掘潜在的疫苗候选分子是开发疫苗的前提和关键。抗原筛选技术的更新换代使得研究者发掘出了更多新抗原和保护性多肽。现有的抗原筛选方法主要包括传统的粗抗原筛选法、cDNA文库筛选法、蛋白质组学筛选法、生物信息学及多组学技术联合筛选法。很多抗原筛选的方法是伴随寄生虫疫苗研究的发展应运而生的,粗抗原筛选法是基于抗原抗体相互反应的免疫学原理而设计的,此方法筛选的天然抗原可引起机体较强的免疫反应;cDNA文库筛选抗原的优势在于筛选更有针对性,所以候选产物的成分更单一、明确;蛋白质组学筛选法是基于质谱而兴起的一种筛选技术,它既可对未知蛋白组分进行鉴定,还可对鉴定结果进行差异比较,在未知分子的发现和功能特殊的靶分子筛选中发挥着重要作用;随着后基因时代的到来,生物信息学及多组学联合筛选技术使得抗原筛选逐步进入了多维、立体的筛选模式,也使得候选抗原及其表位的功能研究更加深入,这为基因工程疫苗和多肽疫苗候选分子的筛选提供了技术手段。 相似文献
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猪支原体肺炎研究进展 总被引：1，自引：0，他引：1
猪支原体肺炎是猪肺炎支原体所引发的一种以气喘为主要症状,以肺部对称性肉变为主要病理变化的慢性接触性呼吸道传染病,在世界各地普遍存在,严重危害养猪业的健康发展.随着对猪肺炎支原体的深入研究,发现其单一感染致死率虽低,但是易引发其他病毒或细菌等病原的续发或并发感染,导致猪呼吸道疾病综合征,使得疫情变得更为复杂,增加猪病诊断与防控的难度,造成巨大的经济损失.论文根据猪肺炎支原体的最新研究进展,从病原学、流行病学特点、主要抗原蛋白的研究、诊断、疫苗研制、防控措施等六个方面做一综述,从而为猪肺炎支原体的进一步研究及该病的防控提供新思路. 相似文献
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从湖北某地山羊肺脏中分离支原体,经多次克隆纯化后进行生化试验、显微镜观察、PCR及酶切分析、基因特征鉴定以及用动物致病性试验对该菌株进行了鉴定,命名为GH2,进一步通过免疫印迹对GH2株外膜蛋白及GH2株全菌蛋白免疫原性进行分析,并用抗Y98血清和抗PG3血清进行比较,筛选GH2株特异性的外膜蛋白,结果表明GH2株为山羊支原体山羊肺炎亚种,存在于GH2外膜蛋白中的相对分子质量大约为60和49.7 ku的蛋白可能是其主要的免疫原性蛋白,也是GH2株区别于丝状支原体山羊亚种标准株PG3和绵羊肺炎支原体标准株的主要特异性抗原.这一结果为山羊支原体山羊肺炎亚种的诊断和疫苗研制提供了良好的理论基础. 相似文献
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为研究不同毒力的猪肺炎支原体对宿主细胞的黏附作用,本研究采用体外培养的猪气管环检测不同毒力的猪肺炎支原体代表菌株对猪气管上皮细胞及纤毛的损伤情况,初步验证不同猪肺炎支原体代表菌株的毒力.应用间接免疫荧光技术研究不同猪肺炎支原体分离株、标准株、168致弱株及疫苗株对猪肾细胞PK15、肺泡上皮细胞SJPL和猪肺泡巨嗜细胞3D4/31的黏附情况.结果表明猪肺炎支原体野毒株XLW-1能引起猪气管上皮细胞严重病变及纤毛损伤、脱落;国际标准弱毒株J株仅能引起猪气管上皮细胞轻微病变;168疫苗株既不能引起猪气管上皮细胞病变,也不能引起纤毛损伤.野毒株XLW-1、国际标准强毒株232株、弱毒株J株及168疫苗株均能黏附PK15、SJPL和3D4/31,168致弱株可以黏附PK15和SJPL.野毒株、标准强毒株、标准弱毒株、168致弱株及疫苗株均能黏附PK15、SJPL和3D4/31. 相似文献
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为了筛选出特异性好和敏感性高的ELISA用猪肺炎支原体抗原蛋白,作者分别将猪肺炎支原体灭活疫苗和168株菌活疫苗分别经肌肉和肺内注射途径免疫猪,免疫后7、15、30和56d采集分离血清。以P97R1、P36、P46、DnaK单个蛋白和混合蛋白为猪支原体肺炎血清抗体ELISA用特异性蛋白抗原,与猪肺炎支原体IDEXX抗体检测试剂盒比较检测免疫后抗体的发生规律,并对检测结果进行对比。结果表明,P36和P97R1能够检测出比较高的母源抗体水平;DnaK和P46检测的抗体滴度变化趋势相一致,且检测的抗体高滴度维持时间较长;与其它抗原相比,混和蛋白在56d时检测到较高的抗体水平。混合抗原的检测结果与IDEXX具有较高的符合率,但检测敏感性比IDEXX高,且较IDEXX符合抗体变化规律。结果表明混合蛋白具有较高的检测敏感性,可以更加准确地监测该病的感染或免疫状态。 相似文献
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猪肺炎支原体膜蛋白P46基因在大肠杆菌中的表达 总被引：1，自引：0，他引：1
把猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)国际标准株232的P46基因克隆进pGEM-T-EASY载体上,通过PCR方法把该基因中三个编码Trp的密码子TGA突变为TGG,然后将该基因亚克隆到载体pMAL-P2X上,得到重组表达载体pMAL-P2X-P46.用该重组载体转化大肠杆菌TB1,得到表达重组菌TB1-pMAL-P2XA-P46,用终浓度为0.3 mM的IPTG在37℃下诱导表达,获得可溶性表达的融合蛋白MBP-P46,在免疫印迹试验中,兔抗MBP高免血清和兔抗猪肺炎支原体高免血清都能与目的蛋白发生阳性反应,证明猪肺炎支原体P46基因在大肠杆菌里获得了可溶性表达.该融合蛋白对于建立特异性和敏感性好的EIISSA方法具有重要意义. 相似文献
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抗猪支原体共同抗原单克隆抗体的制备与鉴定 总被引：4，自引：2，他引：2
以猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)168菌株F332作为抗原，免疫8周龄BALB/c小鼠，利用淋巴细胞杂交瘤技术，获得两株能稳定分泌特异单克隆抗体的杂交瘤细胞株。两株单抗与Mhp和猪鼻支原体（M.hyorhinis,Mh)等反应，而不与鸡支原体，对照血清等反应。结果表明两株单抗可能是针对猪支原体共同抗原的单抗，用SDS-PAGE电泳和Western-blot分析猪支原体的膜蛋白成分。结果显示，猪支原体的共同抗原是80kd和30kd蛋白，两株单抗均与Mhp和Mh的30kd蛋白条带反应，表明这两株单抗特异地针对猪支原体的共同抗原成分30kd蛋白，可以看出，这两株单抗在Mhp的抗原分析，血清学诊断和疫苗质量监测以及猪源支原体污染细胞检测等方面有重要应用价值。 相似文献
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《畜牧兽医学报》2017,(12)
对我国用于生产的3种猪支原体肺炎活疫苗菌株(168株、RM48株、Z株)进行P46和P97R1R2基因序列分析,考察其保守性和差异。提取来源于四家猪支原体肺炎活疫苗生产企业的疫苗株基因组DNA,以其为模板进行PCR扩增、测序;利用DNAStar序列分析软件对测序结果和国际标准株J株、232株、7448株、7422株一起进行比对,分析3种疫苗菌株和4个标准株之间核苷酸及氨基酸差异。结果发现,疫苗株Z株、RM48株、168株的P46基因序列相似性为100%,与J株、232株相似性为99.1%,与7422株、7448株相似性为98.9%。疫苗株RM48株和Z株的P97R1R2基因序列相似性为100%;而与疫苗株168株相似性为97.5%;三个疫苗株与J株、232株、7448株、7422株的P97R1R2基因相似性仅为90.1%~93.6%,差异主要发生在R1区重复序列的次数上。本研究为临床猪支原体肺炎活疫苗菌株的检测及不同菌株之间的差异鉴定研究奠定了基础。 相似文献
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猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)是猪支原体肺炎(Mycoplsamal pneumonia of swine,MPS)的原发性病原,广泛流行于世界各地,对养猪业造成重大经济损失。MPS发病率高,死亡率低,主要导致猪慢性咳嗽,生长率降低,饲料转换率下降,体重增长缓慢。另外,MPS使宿主易感其他呼吸系统病原,从而造成继发感染。由于对具有良好免疫原性的Mhp特异性蛋白缺少深入研究,使得Mhp研究受到一定限制,从而影响了对MPS的控制。文章围绕Mhp主要黏附因子、膜蛋白及细胞质蛋白等主要保护性抗原蛋白予以综述,以期为MPS疾病诊断、监测和相关疫苗研究提供科学依据。 相似文献