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1.
《饲料工业》2015,(13)
研究旨在克隆并表达嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)胞内具二硫键还原活性的酶蛋白。以Stenotrophomonas maltophilia基因组DNA为模板,扩增目的基因谷胱甘肽还原酶(Glr),构建重组质粒p ET-22b-Glr,并转化到表达菌株BL21(DE3)中得到重组菌,经IPTG诱导表达后,测定二硫键还原酶活性。结果表明,该重组酶基因大小为1 359 bp,酶活力为1.85 U/mg。酶学性质研究表明,重组谷胱甘肽还原酶的最适反应p H值为6.0,最适反应温度为40℃。对角蛋白酶K降解羽毛角蛋白的研究表明,该酶对其降解羽毛促进率为15%。结果揭示了Stenotrophomonas malto-philia胞内液具有促进胞外液角蛋白水解活性的内在机制。 相似文献
2.
本研究从鸡场长期堆放羽毛的土壤中筛选到一株降解羽毛能力强的菌株。该菌株在牛奶平板上培养24 h后产生透明降解圈,形状不规则,表面粗糙,边缘模糊,产生绿色荧光色素;革兰氏染色阴性,短杆状,无芽孢,有鞭毛,无荚膜。生化试验显示,该分离株能够水解牛奶、明胶,具有角蛋白酶活性,能利用柠檬酸盐,硝酸还原反应阳性。系统进化树分析显示,分离株与铜绿假单胞菌模式菌株（GenBank登录号：BAMA01000316）亲缘关系最近,综合以上结果,最终确定分离株为铜绿假单胞菌,并正式命名为Pesudomonas aeruginosa B1-2。将该分离株在以1%羽毛为唯一碳氮源的基础培养基中发酵培养,48 h后角蛋白酶活性最高达到60.3 U/mL,对羽毛降解率为85.7%。本研究中分离获得的Pesudomonas aeruginosa B1-2可用于畜禽废弃物的处理。 相似文献
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为了探寻降解家禽羽毛角蛋白的微生物资源,利用富集及驯化培养的方法,从家禽养殖场长期堆积废弃羽毛的土壤中,分离能够有效降解羽毛角蛋白的细菌,并对其降解效果进行初步研究,结果分离筛选出1株能以羽毛角蛋白为唯一碳氮源的菌株N01。经形态特征观察,生理生化特征鉴定和16SrDNA序列分析,初步鉴定其属于节杆菌属。系统发育树显示,该菌株与金黄色节杆菌(Arthrobacter aurescens)的相似性最高,达99%,因而确定其为金黄色节杆菌。该菌株经过72h发酵,对羽毛角蛋白的降解率达75%,表明该菌株对羽毛角蛋白有明显的降解作用。该菌株的分离鉴定为微生物降解利用家禽羽毛角蛋白提供了新的种质资源。 相似文献
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《中国饲料》2018,(23)
为了筛选能稳定高效降解黄曲霉毒素B1(AFB1)的细菌,本试验以香豆素培养基进行初筛,AFB1标准品进行复筛,从动物粪便堆肥土壤中获得降解率最高的菌株,命名为SG16,并初步鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。通过研究各发酵组分的降解率,不同p H、温度、金属离子等因素下发酵液的降解活性,以及浓缩发酵液对发霉玉米中AFB1降解的效果。结果显示:各组分中发酵上清液降解率最高为80.62%,菌悬液和胞内液的降解率仅为14.32%和10.67%,温度、p H、金属离子、蛋白酶K均能影响其毒素降解活性,因此SG16产生的降解AFB1活性物质初步鉴定为胞外酶。浓缩发酵液能显著降低霉变玉米中AFB1的含量,这为生物防治饲料或粮食中的黄曲霉污染提供资源。 相似文献
5.
试验对筛选得到的高效降解黄曲霉毒素B1、G1和M1的枯草芽孢杆菌(霉立解060菌)进行解毒活性、抗菌活性及抗逆性研究。将枯草芽孢杆菌发酵液分成上清液、菌悬液和胞内液组分,验证各组分对黄曲霉毒素的解毒效率。试验结果表明,枯草芽孢杆菌发酵后的上清液对AFB1、AFG1和AFM1的降解活性最高,确定发酵后的上清液中存在解毒活性组分;对解毒活性物质进行加热和蛋白酶K变性处理后,解毒活性显著降低,表明起解毒作用的活性物质是其分泌的一种胞外酶;试验进一步证明枯草芽孢杆菌具有显著抑制大肠杆菌、沙门氏菌以及金黄色葡萄球菌,抵抗胃酸、胆盐、高温等不利环境的特性,具有很强的抗菌性和抗逆性。 相似文献
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《畜牧与兽医》2015,(10):35-40
为筛选产漆酶的木质素降解菌,采用愈创木酚平板法和RB亮蓝平板法进行菌株筛选,利用16S r DNA序列分析对菌株进行鉴定,通过液体发酵培养对漆酶活性和木质素降解能力进行研究。将漆酶基因cot A克隆到表达载体p ET-32a(+)上获得重组质粒p ET-32a(+)-Cot A并转化到BL21中进行表达,通过酶活测定将表达条件进行优化。结果:从白蚁肠道中成功筛选出1株产漆酶的木质素降解菌,鉴定为枯草芽胞杆菌。漆酶的最适酶活温度为60℃,最适酶活p H为3.5~4.0;0.2 mmol/L Cu2+可诱导菌株漆酶的产生,缩短了产酶时间并提高了酶活性。菌株木质素降解率在液体发酵培养24 h后达到了17.1%。漆酶基因大小为1 542 bp,表达的重组蛋白为85 ku,属于有活性的可溶性蛋白。在IPTG浓度为1mmol/L、Cu2+浓度为0.3mmol/L、诱导时间为9 h的条件下,漆酶蛋白活性可达到113.10 U/L。研究表明,本试验成功筛选出1株降解木质素能力较强的枯草芽胞杆菌,获得可分泌较高活性漆酶的重组菌,为木质素酶在畜牧业生产实践上的应用奠定了基础。 相似文献
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《畜牧与饲料科学》2017,(11)
为筛选具有潜在开发价值的畜禽饲料添加剂益生菌,采用传统方法从藏鸡消化道分离芽胞杆菌并对其进行初步鉴定;检测分离菌株的产纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和植酸酶活性,测定分离菌株对常见致病菌的抑菌性能;对筛选到的具有优良胞外酶分泌活性和抑菌活性的菌株进行分子生物学鉴定。结果表明,从藏鸡消化道中共分离到72株芽胞杆菌;不同菌株的产酶活性差异较大,部分菌株都具有产纤维素酶、蛋白酶和淀粉酶活性,有8株菌能够同时产生5种胞外酶;菌株CB-11不仅具有较强的产酶活性,而且可以同时抑制大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌和金黄色葡萄球菌,抑菌谱较广;结合表型特征和16S r DNA序列分析结果,将CB-11确定为枯草芽胞杆菌。研究结果为天然益生菌资源的发掘利用及畜禽微生态饲料添加剂的开发应用提供了参考。 相似文献
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《畜牧兽医学报》2017,(4)
玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)是危害动物健康的重要真菌毒素之一,笔者旨在筛选出能够有效降解ZEN的微生物,并对其降解特性以及降解产物的致毒活性进行检测,以期筛选出高效降解ZEN的菌株。以ZEN为唯一碳源进行初筛,以菌株发酵液对ZEN的降解率为复筛指标,对降解率最高的菌株进行16SrRNA基因测序分析;并对筛选出的菌株对ZEN的降解特性进行研究,对其降解产物在MCF-7细胞上进行活性检测。初筛获得40株能生长良好的细菌,复筛筛选出降解率最高H6菌株,经16SrRNA基因测序分析,该菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。在37℃、180r·min-1、72h时,该菌株发酵液对1μg·mL~(-1) ZEN的降解率为95.6%,其上清液和菌悬液的降解率分别为68.93%和28.70%,对20μg·mL~(-1) ZEN的降解率为85.8%;菌株上清液经蛋白酶K、蛋白酶K+SDS和热处理后,其降解活性明显降低;该菌株ZEN的降解产物在MCF-7细胞上的增殖率显著降低。结果表明,本研究筛选出能有效降解ZEN的菌株H6,经鉴定判断为解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens),该菌株分泌的胞外酶能够降解ZEN,使其类雌激素毒性显著降低。 相似文献
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为了筛选出高效的纤维素降解菌,实现纤维类饲料的资源化利用,试验采用形态学观察、生化试验、16S rDNA鉴定对奶牛粪便纤维素降解菌进行了研究,同时还测定了该菌株的最优酶活性。结果表明:形态学观察该菌株为革兰氏阴性直杆菌;生化试验初步鉴定其为志贺氏菌属;16S rDNA试验最终确定该菌为革兰氏阴性兼性厌氧志贺氏菌,将其命名为NC007384;在pH值为7、温度为35℃、装液量为40%、接种量为2.5%、摇床转速为180 r/min的条件下培养42 h,志贺氏菌CMCase活性最大,达到21.842 U。 相似文献
11.
本研究旨在对来源于地衣芽孢杆菌CP-16的重组角蛋白酶和二硫键还原酶协同酶解羽绒加工副产品最佳工艺条件进行探讨。试验探讨角蛋白酶与二硫键还原酶组合水解羽毛角蛋白的适宜比例，并研究蒸汽压力处理时间、酶解时间、组合酶添加水平和水分含量等单一因素对酶解效率的影响，再利用L9（34）正交试验进一步优化处理工艺条件。结果显示，当角蛋白酶与二硫键还原酶的酶活比例为80：1，角蛋白酶终浓度为90 U/mL时，组合酶酶解羽绒加工副产品效率最佳；经压力处理2 h更有利于提高酶解效率；水解60 h酶解率最高，但与48 h差异不显著（P>0.05）；总反应体系中缓冲液为5.5 mL时酶解效率显著高于对照组（P<0.05），但与4.5 mL组差异不显著（P>0.05）。正交试验优化酶解羽绒加工副产品条件发现，影响组合酶酶解效率的因素由大到小依次为压力处理时间、酶解时间、酶剂量；酶解羽绒加工副产品最适条件为：角蛋白酶与二硫键还原酶活性比例为80：1，121℃高压处理2 h，角蛋白酶终浓度为90 U/mL，50℃酶解48 h，此时1 g羽绒加工副产品产生的上清液可溶性蛋白含量为352.72 mg，比对照组提高640.26%。综上，利用多种处理工艺相结合更有利于提高组合酶水解羽绒加工副产品的效率。本试验结果可为羽绒加工副产品资源开发利用提供理论指导。 相似文献
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The aim of this study was to explore the optimal technological conditions for the synergistic enzymatic hydrolysis of feather processing by-products by recombinant keratinase and disulfide bond reductase from Bacillus licheniformis CP-16.Firstly,the appropriate proportion of keratinase and disulfide bond reductase was explored in this experiment.Secondly,the factors affecting the treatment of combined enzymes were studied,including steam pressure treatment time,enzymatic hydrolysis time,combined enzyme addition level and water content.Finally,L9(34) orthogonal test was used to further optimize the processing conditions.The results were as follows:When the enzyme activity ratio of keratinase and disulfide bond reductase was 80：1 and the final concentration of keratinase was 90 U/mL,the combined enzyme had the best efficiency in feather hydrolysis.Pressure treatment of feather keratin for 2 h was more conducive to hydrolysis of feathers processing by-products by combined enzymes.Feather hydrolysis rate was the highest at 60 h hydrolysis,but it was not significantly different from that at 48 h (P>0.05).The efficiency of feather enzymatic hydrolysis in the total reaction system with 5.5 mL buffer was significantly higher than control group(P<0.05),but the difference was not significant compare to the group with 4.5 mL buffer (P>0.05).The results of orthogonal test showed that,the factors affecting the hydrolysis efficiency were pressure treatment time,enzymolysis time and enzyme dosage from large to small.The optimal conditions for feather enzymatic hydrolysis were:The ratio of keratinase to disulphide bond reductase was 80：1,121 ℃ for 2 h,the final concentration of keratinase was 90 U/mL,and the enzymatic hydrolysis was conducted at 50 ℃ for 48 h.At this condition,the soluble protein content of supernatant produced of each gram feather was 352.72 mg,which was 640.26% higher than that of the control group.In conclusion,the combination of multiple treatment processes was more conducive to improving the efficiency of hydrolysis of feathers processing by-products by combined enzymes.The study could provide guidance for the development and utilization of feather resources. 相似文献
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本试验旨在通过异源表达获得地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)CP-16的脂类水解酶,并探究其在羽毛降解过程中的作用。试验以地衣芽孢杆菌CP-16基因组DNA为模板,扩增脂类水解酶基因,转化入大肠杆菌中表达,获得重组酶L-4。研究重组酶L-4的适宜p H、p H稳定性、适宜温度、温度稳定性以及有机溶剂和金属离子对其相对活性的影响,同时探究其对角蛋白酶K水解天然羽毛角蛋白的作用。结果显示,获得的脂类水解酶基因大小为747 bp,编码248个氨基酸,在大肠杆菌中成功表达出重组酶L-4,其分子质量约为28.3 ku,酯酶活性为0.42 U/m L,适宜p H为6.5,适宜温度为50℃;在p H 6.5~9.5条件下处理30 min相对活性保持80%以上,在低于50℃温度条件下处理30 min相对活性保持70%以上。二价铁离子(Fe~(2+))、钠离子(Na~+)、锰离子(Mn~(2+))、钙离子(Ca~(2+))对重组酶L-4相对活性具有激发作用,钡离子(Ba~(2+))、锌离子(Zn~(2+))、铜离子(Cu~(2+))、镍离子(Ni~(2+))对重组酶L-4相对活性具有抑制作用。当有机溶剂浓度为30%时,重组酶L-4在二甲基亚砜(DMSO)和甲醇中保存97%和85%的相对活性,在丙酮、乙醇中保存45%以上的相对活性,在异丙醇中保存不到20%的相对活性,而在乙腈中相对活性基本完全丧失。用重组酶L-4预处理天然羽毛底物,可提高角蛋白酶K对底物的水解效率,促进率为4.32%。由此可见,脂类水解酶可降解羽毛表层脂质,可在促进角蛋白酶水解羽毛角蛋白中发挥作用。 相似文献
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角蛋白酶研究进展及其在饲料工业中的应用 总被引：2，自引：0，他引：2
角蛋白酶主要由微生物产生,可以降解角蛋白,可以用于畜禽羽毛、被毛的分解。本文主要介绍角蛋白酶的来源、基本性质、检测方法和角蛋白酶在饲料行业中的应用以及在动物生产试验中的效价。 相似文献
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1. Poultry processing generates a large quantity of feather waste. Feathers are a rich source of keratin and could be used as a feather meal in the feed industry if the keratin is degraded using suitable micro-organisms.
2. In this study, keratin-degrading micro-organisms were isolated from a poultry farm. The predominant organisms were identified as Bacillus subtilis, Aspergillus flavus, A. fumigatus and Trychophyton sp.
3. The isolates were inoculated into feather medium and observed for keratin degradation by measuring the protein content, free amino acids and change in pH.
4. During feather degradation by B. subtilis, the concentration of soluble protein released to the medium increased gradually and reached the maximum (433 µg/ml) during d 7 of incubation and the pH increased from the initial 6.9 to 8.4 on d 9 of incubation. Similarly, the maximum protein content of 414 µg/ml and pH of 8.5 was observed for A. fumigatus on d 21 of incubation.
5. B. subtilis and A. fumigatus showed almost the same level of keratinase activity. 相似文献
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从健康猪生长的发酵床垫料中筛选到1株耐高温的高效降解菌Y34,把其接种到猪粪水中反应25 d后,对COD与NH3 N降解率分别为84.7%,83.5%。生长特性表明其最适生长温度为50 ℃。通过形态观察、生理生化鉴定及16S rDNA序列比对,鉴定菌株Y34为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）,其与Bacillus licheniformis相似性为99.0%。对此菌发酵过程中产酶情况作了研究,结果表明,在50℃培养条件下,菌株Y34能够分泌过氧化氢酶、蛋白酶、脲酶,具有用于研制发酵床微生物制剂的潜力。 相似文献
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试验旨在筛选一株地衣芽孢杆菌M109(Bacillus licheniformis M109)进行培养基和发酵条件的优化。采用单因素试验方法筛选出最佳碳源和氮源的培养基,并利用正交试验方法确定其最佳的碳氮比。为了继续提高地衣芽孢杆菌M109的发酵水平,研究其在发酵过程中的生长曲线、pH和溶氧(DO)水平的变化曲线,通过对发酵过程中生长参数的测定,优化了地衣芽孢杆菌M109最佳的接种量和最适pH。结果发现,溶氧限制是地衣芽孢杆菌M109生长的关键因素;在限定通风量的条件下,通过调节搅拌转速的方法来提高培养基中的溶氧水平,提高发酵密度;通过流加培养基的方法也能提高地衣芽孢杆菌M109的发酵水平。因此,通过对培养基和发酵条件的优化,使地衣芽孢杆菌M109的发酵水平由最初的1.0×109 CFU/mL提高到1.2×1010 CFU/mL,芽孢形成率为88%。 相似文献