甘薯AFLP扩增产物的PAGE胶快速银染方法     

靳容  后猛  马代夫  谢世清  李强 《江苏农业科学》2013,41(2)

对目前6种常用的PAGE银染方法的成本、时间及染色效果等进行比较.结合笔者所在实验室的具体情况,用简易强碱法对甘薯AFLP扩增产物进行银染,分析银染过程中漂洗时间、次数,银染用水对银染效果的影响,建立了甘薯AFLP扩增产物的PAGE胶快速银染方法,可以批量生产银染AFLP扩增产物,银染效果较好.  相似文献   

2种方法银染的AFLP片段再扩增效果比较及改进   总被引：6，自引：0，他引：6  

刘耘  熊家军  杨利国 《华中农业大学学报》2008,27(2):182-185

Bassam银染法和Sanguinetti银染法是AFLP标记最常用的检测方法.本研究比较这2种方法银染的AFLP条带再扩增效果的差异,发现Bassam法银染的AFLP片段再扩增效率达到100%,而用同样的PCR条件,sanguinetti法银染的AFLP片段不能被扩增,限制了Sanguinetti法在AFLP标记分析中的应用.为提高Sanguinetti法银染的AFLP片段再扩增效率,对Sanguinetti法银染的AFLP片段回收和再扩增条件进行了改进.通过增加Sanguinetti法显色后的胶板漂洗次数、延长漂洗时间、改变AFLP条带浸泡溶液、增加浸泡液体积和增加PCR循环次数,成功地将Sanguinetti法银染的AFLP条带的再扩增效率提高到100%,从而解决了San-guinetti银染法应用的限制因素.  相似文献   

马铃薯蛋白质银染方法的改进     

张丽莉  连勇  陈伊里 《东北农业大学学报》2007,38(4):483-485

为了探索一种便于操作、低背景的蛋白质SDS-PAGE凝胶电泳银染色方法,对银染色过程中的主要因素进行了优化,并结合DNA银染方法对蛋白质银染方法加以改进,将凝胶固定在长玻璃板上进行染色,避免凝胶在染色过程中破碎。结果表明,改进后的方法不仅使染色操作容易进行,背景容易控制,而且还使得检测方法的灵敏性、准确性得到提高。  相似文献   

一种简便快速高效的DNA银染方法   总被引：1，自引：0，他引：1  

郭大龙  张君玉  石春梅  张国海  白晓燕  高姗姗 《河南农业科学》2010,(7)

以葡萄叶片为试材,对变性聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)中DNA银染及显色方法进行了改良,改良后的方法省略了预处理、固定、用试剂终止显色过程等步骤。使用改进的显带方法得到的PAGE胶图片,DNA带型和背景具有更高的对比度和分辨率;同时操作简单,耗时短,使用试剂少。改良方法使PAGE中DNA银染显色全程时间缩短至15~20 min,且效果较好,可较好的替代常规的银染方法。  相似文献   

双向电泳中4种常用染色方法的比较   总被引：1，自引：0，他引：1  

唐秀英  邵彩虹  谢金水 《江西农业学报》2010,22(7):100-102,106

采用SDS-PAGE电泳技术,比较分析了双向电泳中常用4种染色方法的优、缺点。结果表明:常规银染法灵敏度低;改进的双胺硝酸银银染法与质谱分析不兼容;考染方法-银染复合染色法的灵敏度稍低于双胺硝酸银银染法,但它的质谱兼容性最高;改进后的银染方法灵敏度高、背景清晰、与质谱兼容。因此后两种方法较广泛适用于蛋白质组学研究。  相似文献   

凝胶电泳蛋白质染色方法研究进展   总被引：4，自引：0，他引：4  

常胜合  舒海燕  秦广雍  李宗伟  李宗义  王雁萍  杨天佑  陈林海 《河南农业科学》2006,(5):8-12

蛋白质条带染色是蛋白质凝胶电泳中一个重要的步骤。目前的方法主要有考马斯亮兰染色、银染、荧光染色、负染等。将考马斯亮兰与BBR相结合进行染色，可以减少染色／脱色的次数，能够提高考马斯亮兰在蛋白质条带上的染色效果。Gallyas Intensifying方法与银染相结合，能提高用银染已经检测到的蛋白质条带的亮度，使蛋白质点之间及其与背景之间更容易区分。将银染与考马斯亮兰结合起来进行染色可以提高同一块胶上微量蛋白质检测灵敏度。目前，对染色方法改进主要集中在如何提高蛋白质染色的灵敏度，操作方便与否，费用是否昂贵等方面。如何在保持银染方法高灵敏度的同时，又能够有效地降低染色背景，用无毒的化学物质去替换现在凝胶电泳中常用的有毒物质，克服荧光染色使蛋白质化学性质改变的缺点，在保持负染不修饰蛋白质条带化学性质优势的同时，对蛋白质条带染色结果加以改善等，可能代表了蛋白质条带染色的未来发展方向。  相似文献   

大豆SSR标记PAGE银染方法的改进   总被引：5，自引：1，他引：4  

宋显军  张伟  曹萍  郭玉华  谢甫绨 《安徽农业科学》2006,34(16):3922-3923

比较改进后的两种最常用的银染方法Bassam和Sanguinetti,建立了一种更加行之有效、简便快捷的应用于大豆SSR标记的PAGE银染检测方法。  相似文献   

柑橘苗期SSR鉴定分析体系的优化及初步应用   总被引：4，自引：0，他引：4  

韩国辉  魏旭  向素琼  汪卫星  何波  梁国鲁 《西南农业学报》2011,24(2)

本文以柑橘幼苗微量叶片(3～5 mg)为材料,改进柑橘基因组DNA提取方法,并对3种PAGE凝胶浓度和3种银染色方法进行了筛选和优化,建立了一种经济,高效的柑橘苗期SSR分析体系.试验结果表明:该微量叶片提取方法需材少,用时短,所提取基因组DNA质量好、纯度高,完全适用于SSR-PCR扩增反应.9%的PAGE凝胶浓度最适合柑橘SSR标记的电泳检测,扩增出的条带清晰,分散良好.改进的两种快速银染方法相对于传统的染色方法染色效果较好,且更加经济.初步对两个柑橘杂交幼苗群体进行了遗传鉴定和分析,2对引物从24株沙田柚与强德勒柚杂交幼苗中鉴定出17株杂种,4对引物在沙田柚与红江橙杂交群体中扩增出14条多态性条带,占总条带数的70.0%.表明所建立的SSR优化体系可为柑橘分子辅助育种提供技术参考.  相似文献   

mRNA差异显示中特异条带回收方法的改进     

秦岭  张春雷  张斌 《山东农业科学》2007,(6):106-107

聚丙烯酰胺凝胶电泳的银染显色具有灵敏度高、显色速度快、无放射性等优点,在mRNA差异显示中应用广泛。由于银染过程中要经过酸、碱的处理,从中回收DNA条带有一定困难。本研究对回收方法进行了改进,回收后的条带经PCR重扩增得到了清晰的特异条带。  相似文献   

香菇微卫星标记变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的应用及正交优化     

张丹  颜梦秋  张美彦  谭琦  宋春艳  尚晓冬 《江苏农业科学》2021,49(5):57-61

变性聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种高效鉴定微卫星分子标记的方法,广泛应用于种质鉴定、遗传连锁图谱构建及分子标记辅助育种等研究中.该方法由于操作繁琐,目前在食用菌领域的应用尚不广泛.以香菇为研究对象,建立变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的检测流程,并利用正交试验对检测流程中涉及的加样缓冲液与PCR反应液的体积比、95℃变性时间、置于冰上冷却时间、银染时间、银染后胶板去离子水洗时间等5个操作节点进行优化.结果表明,加样缓冲液与PCR反应液体积比为1∶2,95℃变性2～5 min,置于冰上冷却15～20 min,银染7 min,银染后胶板用去离子水洗5～10 s是正交试验的较优处理组合.试验建立了香菇微卫星标记变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测操作规程,该操作规程具有成本低、效率高、易批量化操作等优点,对其他食用菌微卫星标记的应用具有重要的参考价值.  相似文献