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1.
《中国预防兽医学报》2017,(2)
为探究接触蛋白-1(CNTN1)对体外培养的犬乳腺肿瘤细胞CHMm增殖及迁移能力的影响,本研究利用RNAi技术沉默CNNT1基因在犬乳腺肿瘤CHMm细胞中的表达,采用CCK8法检测CHMm细胞增殖能力、细胞划痕法检测CHMm细胞迁移能力,western blot检测CHMm细胞中E-cadherin蛋白含量。结果显示CNTN1沉默后,对犬乳腺肿瘤细胞CHMm增殖无明显影响,但能够导致使细胞迁移能力显著减弱,细胞中E-cadherin蛋白含量明显增加。研究表明CNTN1对犬乳腺肿瘤CHMm增殖调节无明显作用,对犬乳腺肿瘤细胞CHMm作用主要是通过降低E-cadherin蛋白的表达增强体外培养的肿瘤细胞迁移力,为犬乳腺肿瘤的治疗提供新的靶点。 相似文献
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为探究SOX2对犬乳腺肿瘤细胞系CHMm增殖及迁移能力的影响,采用脂质体将siRNA转染至犬乳腺肿瘤细胞系CHMm降低其SOX2的表达,采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力,Transwell小室迁移试验检测细胞的迁移能力,Western blot检测NF2和YAP的表达。结果表明,成功建立了SOX2敲低的犬乳腺肿瘤细胞模型,敲低SOX2的犬乳腺肿瘤细胞的增殖能力和迁移能力均显著降低(P<0.05);敲低SOX2的犬乳腺肿瘤细胞中NF2的表达显著升高(P<0.05),Hippo信号通路下游效应分子YAP的表达显著降低(P<0.05)。说明SOX2可通过NF2/YAP影响犬乳腺肿瘤细胞增殖和迁移,进一步阐明了SOX2在肿瘤发生中的作用机制。 相似文献
3.
《中国预防兽医学报》2016,(7)
为探讨过表达的第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)对犬乳腺肿瘤细胞系(CHMm)增殖及Bcl-2、Bax基因的影响,本研究构建了PTEN表达质粒pc DNA-PTEN,采用脂质体转染法将其导入CHMm细胞系,采用western blot检测PTEN蛋白表达情况,CCK-8法检测CHMm细胞增殖情况,荧光定量PCR检测Bcl-2和Bax的基因表达情况。结果显示,转染PTEN的CHMm细胞组的PTEN蛋白表达水平显著高于空载体组和未转染组;转染PTEN细胞组的细胞增殖显著低于空载体组和未转染组(p0.05);转染PTEN的CHMm细胞组Bcl-2的m RNA表达水平显著低于空载体组和未转染组(p0.05);转染PTEN的CHMm细胞组Bax的m RNA表达水平显著高于空载体组和未转染组(p0.05)。本实验将PTEN基因导入犬乳腺肿瘤细胞系(CHMm),抑制犬乳腺肿瘤细胞增殖,为寻找乳腺肿瘤基因治疗新方法提供依据。 相似文献
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《畜牧与兽医》2017,(4):111-115
为研究二甲双胍对犬乳腺肿瘤细胞增殖和细胞周期的影响,以犬乳腺肿瘤CHMm和CHMp为模型,采用终浓度为0、5、10、20、40mmol/L二甲双胍对其进行干预,应用CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布比例,再通过Western blot检测细胞周期相关蛋白cyclin D1和p27的表达情况。二甲双胍作用48 h后,与对照组比较,CHMm细胞试验各组的成活率显著降低(P0.05),而CHMp细胞除了5 mmol/L组(P0.05),其他试验各组的成活率也显著低于对照组(P0.05),并且均呈现一定的浓度依赖性。流式细胞仪分析细胞分布比例发现,CHMm的G0/G1期细胞比例从(38.7±5.89)%增加到(70.36±5.78)%,CHMp的G0/G1期细胞比例也从(37.03±4.23)%增加到(54.92±4.67)%。随着二甲双胍作用浓度的增加,CHMm和CHMp细胞内cyclin D1表达量呈现减少的趋势,而p27表达量呈现上升的趋势。研究结果表明,二甲双胍可以抑制犬乳腺肿瘤细胞体外增殖能力,诱导细胞发生G0/G1期阻滞,并下调cyclin D1和上调p27细胞周期相关蛋白表达量,从而为犬乳腺肿瘤治疗提供一定的理论基础。 相似文献
6.
本试验通过向纯化的奶牛乳腺上皮细胞中添加不同浓度（0（对照组）、10、20、40 mmol/L）的糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase 3β,GSK3β）特异性蛋白抑制剂氯化锂（Licl）,作用细胞24 h,研究其对奶牛乳腺上皮细胞增殖及细胞周期的影响,并利用qRT-PCR和Western blotting分别检测不同浓度Licl对奶牛乳腺上皮细胞中GSK3β、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1） mRNA水平及GSK3β、磷酸化GSK3β （p-GSK3β）、Cyclin D1蛋白水平表达的影响。结果显示,Licl能促进奶牛乳腺上皮细胞的增殖活性,Licl抑制GSK3β后促进奶牛乳腺上皮细胞增殖的最佳浓度为20 mmol/L。与对照组相比,添加Licl后GSK3β蛋白表达受到抑制,p-GSK3β蛋白表达上调,同时提高了Cyclin D1蛋白表达。表明GSK3β对于奶牛乳腺上皮细胞增殖的能力是负调控因子,失活的GSK3β通过Cyclin D1途径促进细胞周期的进行。 相似文献
7.
为研究紫杉醇诱导犬乳腺肿瘤细胞(CHMm)凋亡及对氧化还原平衡的影响,本实验以不同浓度的紫杉醇处理细胞,采用台盼蓝排斥试验和MTT法检测细胞活性,并进行丫啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)双荧光染色以及在透射电镜下观察CHMm细胞凋亡和形态学变化,并检测细胞内活性氧(ROS)、超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和丙二醛(MDA)等反映细胞内氧化还原功能的指标。结果显示:在紫杉醇的作用下,CHMm生长受到不同程度的抑制,引起细胞凋亡,出现典型的凋亡形态;ROS和MDA含量增加,SOD和CAT酶活性降低,细胞内出现氧化还原失衡。表明紫杉醇能够抑制CHMm细胞生长,打破氧化还原平衡,诱导细胞凋亡并呈浓度和时间依赖性。 相似文献
8.
应用特异性方法检测转化生长因子(TGF-β1)对奶牛乳腺上皮细胞增殖和凋亡的作用,用不同浓度的TGF-β1作用于体外培养的奶牛乳腺上皮细胞,在不同时间收集培养细胞及其培养液,应用MTT法检测细胞增殖、应用分光度法检测caspase-3活性、测定DNA片段化率法检测细胞凋亡。结果表明,1、5、10ng/mL TGF-β1试验组与对照组比较细胞增殖差异显著(P<0.05),随TGF-β1浓度增大抑制细胞增殖作用增强。细胞凋亡检测显示,1、5、10ng/mL TGF-β1试验组与对照组比较细胞凋亡差异均显著(P<0.05),随TGF-β1浓度增大促进细胞凋亡作用增强。TGF-β1可以抑制奶牛乳腺上皮细胞的增殖,促进奶牛乳腺上皮细胞凋亡。 相似文献
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10.
本研究旨在深入探讨血小板凝血酶蛋白1(THBS1)对犬乳腺肿瘤细胞CHMp的影响,并阐明其影响犬乳腺肿瘤发生发展的作用机制。通过构建THBS1慢病毒稳定过表达和THBS1沉默表达的犬乳腺肿瘤细胞CHMp细胞系,采用CCK-8试验、划痕试验、Transwell试验、原位荧光检测和流式细胞术检测THBS1对CHMp细胞增殖、迁移、侵袭、细胞凋亡和细胞周期情况的影响;通过qRT-PCR和Western blot检测THBS1对CHMp细胞凋亡相关因子(p53、Bcl-2、Bax)表达情况的影响,验证THBS1对CHMp细胞凋亡通路的影响。结果显示,过表达THBS1能有效增强犬乳腺肿瘤细胞CHMp的增殖、迁移和侵袭能力,并且减少CHMp细胞的凋亡数量,而沉默THBS1后结果与之相反;流式细胞术得出THBS1能够影响CHMp细胞的细胞周期分布;经qRT-PCR和Western blot检测发现,在THBS1过表达后,p53和Bcl-2的表达量均明显增高,Bax的表达量明显减少,在沉默THBS1后结果与之相反。结果表明,THBS1的异常表达能够影响犬乳腺肿瘤细胞CHMp的增殖、迁移、侵袭以及细胞周期;此外,THBS1能够通过影响细胞凋亡因子p53、Bcl-2和Bax的表达来影响CHMp细胞凋亡相关通路,进而影响犬乳腺肿瘤的发生发展。 相似文献
11.
通过体外细胞培养方法研究大豆异黄酮对奶牛乳腺上皮细胞增殖及泌乳性能的影响。取对数生长期的奶牛乳腺上皮细胞,用无血清培养基培养24 h,使细胞同步化后分组试验。试验分空白对照组(0 mg/L大豆异黄酮)和添加不同浓度大豆异黄酮(1、10、100、1000 mg/L)组,培养48 h后,采用CASY 细胞计数仪检测细胞增殖能力与活力,高效液相色谱检测β-酪蛋白和乳糖,甘油三酯检测试剂盒检测甘油三酯的分泌情况。结果表明,与对照组相比,10、100、1000 mg/L大豆异黄酮组奶牛乳腺上皮细胞的增殖能力与活力显著增强(P<0.05);细胞分泌β-酪蛋白、乳糖和甘油三酯的能力也显著提高(P<0.05)。因此,添加10、100、1000 mg/L大豆异黄酮均能促进奶牛乳腺上皮细胞增殖及提高其泌乳性能,且呈一定的浓度依赖性。 相似文献
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为探究牛坏死杆菌对小鼠乳腺上皮细胞系(EPH4细胞)增殖和凋亡的影响,本研究将坏死杆菌(牛A25菌株)以感染复数(MOI)为100感染EPH4细胞,用EdU细胞增殖法检测细胞增殖率,用Hoechst染色以及DNA Ladder检测细胞凋亡,并用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测凋亡基因的mRNA相对表达量变化。EdU检测结果显示,坏死杆菌可抑制EPH4细胞增殖;Hoechst染色以及DNA Ladder检测结果均显示,坏死杆菌可促进细胞凋亡的发生;RT-qPCR结果显示,与对照组相比,坏死杆菌感染EPH4细胞2 h时,促凋亡基因Bax、Bax/Bcl-2的mRNA相对表达量显著上调(P<0.05),感染4 h时,促凋亡基因Caspase-3和Caspase-9的mRNA相对表达量极显著上调(P<0.001),感染6 h时,促凋亡基因AIF的mRNA相对表达量极显著上调(P<0.001)。由此可见,牛坏死杆菌能够抑制EPH4细胞增殖且诱导细胞凋亡,为进一步研究坏死杆菌致病机制提供了相关数据支持。 相似文献
13.
本试验旨在探讨miR-142-5p对脂多糖(LPS)诱导的小鼠乳腺上皮细胞炎性因子释放以及增殖和凋亡的影响。采用小鼠乳腺上皮细胞系经LPS诱发炎症反应，分别经miR-142-5p模拟物或抑制剂处理，检测细胞TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的释放水平，AKT/p65信号通路关键蛋白磷酸化水平以及细胞增殖和凋亡水平。结果显示：与对照组比较，LPS组TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-8分泌水平显著上调(P<0.05),p-AKT和p-P65蛋白相对表达水平显著上调(P<0.05),G0/G1期细胞比率上调，S期细胞比率降低，细胞增殖活力下降，细胞凋亡率显著增加(P<0.05);与LPS组相比，LPS+抑制剂组上述检测数值变化减弱(P<0.05),而LPS+模拟物组上述检测数值变化则进一步增强(P<0.05),LPS+抑制剂阴性对照组和LPS+模拟物阴性对照组上述检测数值均无显著差异(P>0.05)。结果表明，miR-142-5p可能通过激活AKT/p65信号通路，促进炎性因子的分泌和释放，并抑制细... 相似文献
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microRNAs(miRNAs)在各种类型细胞增殖、分化和凋亡中发挥了重要作用。miR-138参与乳腺发育周期过程中细胞增殖分化的调控。试验以小鼠为动物模型,尾静脉注射miR-138基因抑制剂,应用幼鼠体重称重法,检测miR-138抑制后乳腺泌乳量变化;应用电子显微镜等技术观测乳腺组织形态变化,抑制miR-138后,小鼠乳腺上皮细胞增加,乳汁分泌量增加;抑制miR-138后,观察小鼠乳腺组织超微结构可发现,乳腺细胞的代谢活动增强;收集尾静脉注射miR-138 抑制剂的小鼠乳汁,检测发现其乳糖、乳中酪蛋白含量均有所增高。研究认为,miR-138可刺激乳腺上皮细胞增殖,增加乳腺发育泌乳过程中乳的分泌,并且调控乳汁中重要成分含量。 相似文献
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【目的】筛选和分析环状RNA(circRNA)在犬乳腺肿瘤(CMGT)耐药中的作用,为肿瘤诊断和治疗提供新靶点。【方法】以CMGT细胞CHMm作为研究对象,首先通过浓度梯度法和浓度维持法构建CMGT他莫昔芬(TAM)耐药细胞系,然后采用CCK-8法检测CMGT细胞对TAM的敏感性,最后通过高通量测序技术筛选耐药细胞中差异表达的circRNAs,通过GO功能和KEGG信号通路分析其可能参与的生物过程。【结果】经过TAM持续刺激,CHMm形态变为长梭形,半数抑制浓度(IC50)由4.07提高至13.75μmol/L,说明耐药细胞展现更强TAM抗性。测序结果显示,耐药细胞中差异表达的circRNAs 46个,GO功能分析涉及肿瘤细胞外基质、蛋白质类泛素化、细胞黏附和细胞迁移等过程,主要信号通路为Notch、Rap1、ErbB、FoxO和PI3K等通路。【结论】本研究成功构建犬乳腺肿瘤TAM耐药细胞系CHMmTAM,耐药细胞展现更强的增殖能力和TAM抗性。高通量筛选了亲本和耐药细胞中差异表达的circRNAs,耐药性产生可能通过Notch、Rap1和... 相似文献
16.
《中国兽医学报》2014,(9):1513-1519
将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞NRK分别用0、0.5、1.0、2.0μmol/L醋酸铅作用12h后,MTT法检测不同剂量的醋酸铅对其增殖的抑制率,Annexin V-FITC/PI双染法检测醋酸铅引起的NRK凋亡,罗丹明123检测线粒体膜电位的变化,Western blot检测caspase-3和caspase-9蛋白的表达,以及caspase广谱抑制剂和caspase-9的抑制剂(Z-VAD-FMK和Ac-LEHD-FMK)对醋酸铅诱导细胞凋亡的抑制作用。结果显示,与对照组相比,细胞存活率明显下降(P<0.05或P<0.01),醋酸铅明显抑制NRK细胞增殖,且呈一定剂量效应,IC50为(2.44±0.32)μmol/L;凋亡检测表明,随着醋酸铅浓度的升高,细胞凋亡现象越明显;明显减低线粒体膜电位;激活体caspase-3和caspase-9的表达水平呈剂量依赖性增加;caspase抑制剂能显著抑制醋酸铅诱导的细胞凋亡。结果表明,醋酸铅抑制NRK细胞增殖,可能通过激活caspase依赖性的线粒体信号通路而诱导NRK细胞凋亡。 相似文献
17.
《中国饲料》2020,(15)
本文旨在研究大豆异黄酮对高温下体外培养奶牛乳腺上皮细胞增殖和抗氧化能力的影响,采用细胞培养方法,将奶牛乳腺上皮细胞分为4组,分别在细胞基础培养基中添加0、10、100μg/m L和1000μg/mL的大豆异黄酮,各组细胞正常(37℃、5%CO2)培养48 h后,在42℃下处理1.5 h,再正常培养12 h检测相关指标。结果发现:(1)与0μg/mL组相比,100μg/mL和1000μg/mL大豆异黄酮组奶牛乳腺上皮细胞活性显著升高(P 0.05)。(2)与0μg/m L组相比,10～1000μg/mL大豆异黄酮组细胞活性氧(ROS)的浓度显著降低(P 0.05)。(3)与0μg/mL组相比,100μg/m L和1000μg/mL大豆异黄酮组细胞的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性显著升高(P 0.05),而乳酸脱氢酶(LDH)活性和一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量显著下降(P 0.05)。(4)与0μg/m L组相比,100μg/mL和1000μg/mL大豆异黄酮组细胞内Caspase3和Bax基因的相对表达显著降低(P 0.05),而Bcl-2基因的相对表达显著升高((P 0.05)。综上所述,大豆异黄酮能够通过增强奶牛乳腺上皮细胞的抗氧化能力,抑制细胞凋亡,进而促进细胞增殖。 相似文献
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旨在研究PERK在脂多糖(LPS)诱导的奶牛乳腺上皮细胞自噬中的作用。首先,试验设对照组(CON)和LPS组(LPS,4μg·mL-1),研究LPS对奶牛乳腺上皮细胞内质网应激和自噬的影响;随后用不同浓度的PERK抑制剂GSK2606414(GSK)预处理细胞,通过测定PERK、ATF4、eIF-2α和CHOP的mRNA表达,筛选出GSK的最佳抑制浓度;最后将奶牛乳腺上皮细胞分为对照组(CON)、LPS组(LPS)、GSK+LPS组(GLPS)和GSK组4组,研究抑制PERK对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞自噬的影响。采用RT-qPCR和Western blot分析内质网应激、自噬相关基因和蛋白的表达,通过免疫荧光检测GRP78和p62的荧光强度。结果表明：1)与对照组相比,LPS组的PERK、IRE1α、ATF6、GRP78和CHOP的mRNA和蛋白表达均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)升高。LPS还可以显著升高LC3、ATG5、ATG14和Beclin1的mRNA和蛋白表达(P<0.01),并且显著降低p62的mRNA和蛋白表达(P... 相似文献
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《畜牧兽医学报》2018,(11)
为了解gga-miR-155对MDCC-MSB1细胞生物学行为的影响,将人工合成的gga-miR-155模拟物、gga-miR-155抑制物以及阴性对照瞬时转染MDCC-MSB1细胞。然后采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测MDCC-MSB1细胞中gga-miR-155的表达水平,CCK-8法检测转染后细胞增殖能力的变化,流式细胞术检测MDCC-MSB1细胞的细胞周期与凋亡的变化,Transwell检测MDCC-MSB1细胞的迁移、侵袭能力的变化。结果显示,gga-miR-155模拟物可显著上调MDCC-MSB1细胞gga-miR-155表达水平,促进MDCC-MSB1细胞增殖,细胞G1期细胞减少,S和G2期细胞增加,同时凋亡减少,迁移、侵袭能力增加;gga-miR-155抑制物可显著下调MDCCMSB1细胞gga-miR-155表达水平,抑制MDCC-MSB1细胞增殖,细胞G1期细胞增加、S和G2期细胞减少,同时凋亡增加,迁移、侵袭能力下降。结果表明,gga-miR-155可促进MDCC-MSB1细胞增殖、迁移和侵袭,抑制其凋亡。 相似文献