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不同地理株及其杂交株柔嫩艾美耳球虫细胞免疫水平研究 总被引：3，自引：3，他引：0
本文首先培育了5个不同虫株柔嫩艾美耳球虫(Emeria tenella):3个不同地理株吉林株[J]、山东株[S]、黑龙江株[H]和2个杂交株F1(山东株×黑龙江株)、F2(F1×吉林株).将300只AA肉鸡鸡雏随机分成6组,每组50只,12日龄时分别用不同株柔嫩艾美耳球虫进行免疫,首免剂量为1 × 104卵囊.24日龄时攻虫,剂量为1×104卵囊.攻虫后10日龄时翼下静脉采血1 mL检测学液中的CD4 ,CD8 的数量,以此判断柔嫩艾美耳球虫的细胞免疫功能,结果证明:杂交株柔嫩艾美耳球虫CD4 ,CD8 的数量远远高于其它组,F2组更高.各组的CD4 ,CD8 的数量依次为F2＞F1＞S＞H＞J. CD4 ,CD8 的数量的比值也不同.即各组的细胞免疫功能不同,从数值上反应出,F2株细胞免疫水平最高,其次是F1,再次是山东株,黑龙江株和吉林株最低. 相似文献
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《中国家禽》2021,(7)
为了解鸡球虫混合种和柔嫩艾美耳球虫分离株的耐药一致性,验证不同种属球虫耐药性检测方法的可靠性,试验利用抗球虫指数(ACI)、最适抗球虫活性百分率(POAA)、病变计分减少率(RLS)和相对卵囊产量(ROP)4项指标综合评价了田间分离的山东XYP种,以及利用单卵囊分离技术从中分离的艾美耳球虫D1、D2和D3株,分别进行了11种临床常用抗球虫药的耐药性。结果显示:山东XYP种对11种抗球虫药均表现为完全耐药,而从中分离的柔嫩艾美耳球虫D1、D2和D3株对11种抗球虫药呈现出完全不同的耐药性,说明临床分离的鸡球虫对常用的抗球虫药物都存在严重的耐药性,柔嫩艾美耳球虫分离株与其来源混合种的耐药检测结果存在差异,而且不同分离株之间的耐药性综合评价结果也不一致。提示基于单卵囊分离的不同种属鸡球虫药物敏感性检测方法存在局限性,有待进一步完善。 相似文献
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用随机引物PCR(AP-PCR)技术对鸡柔嫩艾美球虫(Eimeria tenella)黑龙江株(H)、山东株(S)及黑龙江株与山东株的杂交株(F1)进行了研究，同时对2个不同地理株的子代株与亲代株和F1株的亲缘关系进行了分析。结果，鸡柔嫩艾美球虫不同地理株之间以及同一地理株的亲代与子代之间存在DNA多态性；并且不同地理株间的种内变异程度较大(Si=0．6423～0．6370)；同一地理株亲代与子代之间的亲缘关系也稍有改变，但其变异程度不大(Si=0．9830～0．9811)。对F1株的AP—PCR分析发现，F1株与H株、S株的相似值分别为0．6929、0．6825，介于H株与S株相似值和传代株间的相似值之间。结果表明，F1株既具有两亲本株的遗传性状，又发生了变异。 相似文献
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3种兔球虫18S rDNA部分序列测定与系统发育分析 总被引：1，自引：0，他引：1
采用单卵囊分离法从河北某兔场分离大型艾美耳球虫、黄艾美耳球虫及肠艾美耳球虫,接种无球虫兔后获得大量纯种卵囊,CTAB法提取孢子化卵囊基因组DNA。利用艾美耳属球虫18S rDNA保守引物,PCR扩增3种兔球虫18S rDNA片段,产物纯化后测序。将3种球虫18S rDNA测序结果与GenBank中发布的兔球虫18S rDNA序列用DNAStar软件进行比对。使用MEGA4.0软件对兔球虫18S rDNA进行同源性比较,并绘制遗传进化树。结果表明,大型艾美耳球虫扩增出大小为1 521bp的18S rDNA片段;黄艾美耳球虫及肠艾美耳球虫均扩增出大小为1 520bp的18S rDNA片段。序列比对结果显示,3种河北株兔球虫与GenBank中相应的3种兔球虫18S rD-NA(EF694016、EF694011、EF694012)相似性分别为99.6%、99.6%和100%。3种河北株兔球虫序列和GenBank中兔球虫18S rDNA序列(EF694007-EF694017)位于一个单系集群。 相似文献
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用聚丙烯酰胺凝胶电泳,对柔嫩艾美耳球虫和斯氏艾美耳球虫孢子化卵囊,进行了乳酸脱氢酶(LDH)、葡萄糖磷酸同分异构酶(GPI)和6—磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGD)同工酶的初步研究。结果表明柔嫩艾美耳球虫和斯氏艾美耳球虫的LDH和GPI同工酶酶谱存在明显差异,6PGD同工酶酶谱则一致。柔嫩艾美耳球虫的LDH、GPI和6PGD均为1条带,而斯氏艾美耳球虫的LDH为2条带,其位置与柔嫩艾美耳球虫明显不同,斯氏艾美耳球虫的GPI呈现2条带,其中1条的位置同柔嫩艾美耳球虫基本一致。作者认为,聚丙烯酰胺凝胶电泳可作为球虫同工酶研究的一种方法。讨论了同工酶技术在球虫虫种、虫株的鉴定,在致弱株、耐药株的确定,以及在遗传学、免疫学等方面的应用前景 相似文献
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《中国家禽》2018,(23)
为分析鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)河北株的致病性及其ITS-1基因序列遗传变异特点,对临床分离的柔嫩艾美耳球虫河北株通过人工感染雏鸡试验验证其致病性,并计算其半数致死量(LD_(50)),采用RT-PCR对柔嫩艾美耳球虫河北株的ITS-1基因进行扩增、克隆,测序后进行生物信息学分析其基因序列变异情况。结果显示:柔嫩艾美耳球虫河北株对雏鸡有较强的致病性,其LD_(50)为3.16×10~4个/只;柔嫩艾美耳球虫河北株的ITS-1基因与GenBank登录的柔嫩艾美耳球虫ETSH4PF3-17株和柔嫩艾美耳球虫上海株的相似性在97.7%～99.0%之间,系统发育进化树分析显示柔嫩艾美耳球虫河北株与GenBank发表的柔嫩艾美耳球虫ETSH4PF3-17株和柔嫩艾美耳球虫上海株聚为一支,亲缘性最近,与其它虫株亲缘性较远;与GenBank发表的柔嫩艾美耳球虫ETSH4PF3-17株序列相比,柔嫩艾美耳球虫河北株的ITS-1基因序列中在第4、13、16、425位4个碱基发生缺失;第258、348位2个碱基发生变异,由C变为T,由G变为T。研究结果为进一步研究柔嫩艾美耳球虫河北株遗传变异情况提供参考依据。 相似文献
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为研究鸡艾美耳球虫哈尔滨株单一虫种的生物学特性,本研究利用单卵囊分离技术分离了6种鸡艾美耳球虫哈尔滨株,用分离的单卵囊接种雏鸡,同时应用PCR方法对收集的单卵囊分离株进行球虫种类鉴定并进行同源性和系统进化分析.结果显示,分离得到的6株鸡艾美耳球虫分别为柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、早熟艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫和布氏艾美耳球虫,PCR结果表明单卵囊分离株确为该6种纯株.本研究表明毛细吸管单卵囊分离法简便易行,使接种难度降低,提高了接种成功率,为球虫的分子生物学研究奠定了基础. 相似文献
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为了确定鸡艾美耳球虫（Eimeria）不同种以及来自不同地区同种不同株之间的亲缘关系,研究其分类地位,对实验室保藏的柔嫩艾美耳球虫（Etenella）、毒害艾美耳球虫（Eneeatrix）、巨型艾美耳球虫（Emaxima）、堆形艾美耳球虫（Eaaervulina）等4种15株鸡球虫孢子化卵囊的18SrDNA基因进行克隆、测序,并与从GenBank下载的鸡球虫18SrDNA序列一起,使用软件DNAstar 5．0 MegAlign进行系统发育分析。结果显示,4种艾美耳球虫种间同源性在94．6％～99．4％之间,7株柔嫩艾美耳球虫的株间同源性在99．0％-99．9％之间,5株巨型艾美耳球虫的株间同源性在96．9％～99．8％之间。用该4种鸡球虫的18SrDNA序列与GenBank下载的另外4种鸡球虫18SrDNA序列构建系统发育树,显示这8种鸡艾美耳球虫形成2个分支,即堆形艾美耳球虫（EASH）、巨型艾美耳球虫（EMSH）、变位艾美耳球虫（Emivati）、和缓艾美耳球虫（Emitis）、布氏艾美耳球虫（Ebrunetti）、早熟艾美耳球虫（Epraecox）构成1个分支,柔嫩艾美耳球虫（ENSH）、毒害艾美耳球虫（ETAS）构成另1分支。巨型艾美耳球虫、柔嫩艾美耳球虫各株的系统发育树均根据地域关系产生2个分支。柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫的亲缘关系较近,不同地理区域的同种不同株的亲缘关系相对较远,种间和种内的鉴定结果与普通生物学结果一致。本研究提示18SrDNA基因可用于鸡球虫不同种／株的分类鉴定,为艾美耳球虫分子遗传学鉴定提供了理论基础。 相似文献
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A battery trial was conducted to evaluate the comparative pathogenicity of five field strains of Eimeria tenella from Behera, Khafr El-Sheikh, Alexandria, Gharbia and Matrouh provinces in Egypt. Two-week-old broiler chickens were infected with 25×10(3) sporulated oocysts of each strain of E. tenella. The comparative pathogenicity of the strains was assessed by calculating body weight gain, feed conversion ratio, lesion scores, dropping nature scores, cecal scrapings, mortality percentage and oocysts count. Hematological parameters including hemoglobin (Hb) content, packed cell volume (PCV%) and total erythrocytic count, were also evaluated. There were different degrees of pathogenicity between the strains. 相似文献
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为了研究外源基因表达对转基因柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)生物学特性的影响,对转基因球虫(TE1)和BJ株(野生强毒)的发育和致病性进行比较分析.结果显示,相对于BJ株,转基因球虫TE1株繁殖力下降约4倍,低剂量感染时致病性下降明显,但是高剂量感染时依然保持较强的致病性.另外,在荧光显微镜下发现,TE1有滋养体、第一代裂殖体/裂殖子、第二代裂殖体/裂殖子和大小配子体等内生发育虫体.孢子化卵囊内4个孢子囊并非全部表达黄色荧光蛋白.这些结果说明黄色荧光蛋白和乙胺嘧啶抗性基因的表达在一定程度上降低了转基因柔嫩艾美耳球虫致病性和繁殖力.在柔嫩艾美耳球虫合子减数分裂过程中,存在同源或异源染色体重组现象. 相似文献
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应用PCR技术,从柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)孢子化卵囊子孢子cDNA表达文库中扩增得到鸡E.tenella杨凌株(YL)子孢子表面抗原3-1E基因。序列分析表明,E.tenella YL 3-1E基因的开放阅读框(ORF)为513个碱基,编码170个氨基酸,与报道的E.tenella甘肃株(GS)3-1E基因相似性为99.8%,两者推导的氨基酸序列相似性为99.4%;而与文献报道的堆型艾美耳球虫(E.acervulina)美国株(US)3-1E基因序列的相似性为98.8%,推导的氨基酸序列相似性为98.8%。利用生物信息学和分子生物学软件对3-1E基因编码的蛋白进行结构预测,结果表明,该蛋白为结构松散的球状蛋白。将3-1E基因亚克隆到表达载体pGEX-4T-1,构建pGEX-3-1E重组质粒并在大肠杆菌BL21中进行表达,表达产物经SDS-PAGE分析,表明成功地表达出了分子量为44.7 ku的融合蛋白。该研究为球虫基因工程疫苗的研制奠定了基础。 相似文献
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Single-oocyst-derived field strains of Eimeria tenella isolated from Rugby in the United Kingdom (E tenella R) and from Mymensingh and Dhaka in Bangladesh (E tenella M and D, respectively) and a laboratory strain (E tenella, Houghton, H) were compared by isoenzyme electrophoresis, reactivity with antisporozoite monoclonal antibodies and, for some pairs of strains, cross-protection in vivo. The three field strains conformed to one zymodeme with respect to six isoenzymes. For glucose phosphate isomerase (GPI) all field strains were characterised by GPI-9. A panel of six different monoclonal antibodies raised against sporozoites of E tenella H did not discriminate between strains by titration in an immunofluorescence assay against air-dried, acetone fixed sporozoites. In cross-protection experiments involving immunisation and challenge of young chickens, two immunisation schedules were used which, after homologous challenge, provided complete immunity either by the criterion of oocyst output, or by the criterion of weight gain (and more than 94 per cent protection by the criterion of oocyst output). While strain heterogeneity was minimal in the former situation, there was poor cross protection between some strains in the latter case. Under those conditions, heterologous challenge with E tenella M resulted in dysentery and in significantly (P less than 0.05) increased oocyst output and decreased weight gain. The results suggested that E tenella M was immunologically superior to E tenella R and H strains. The results show that a limited degree of immunogenic variability exists between these strains of E tenella and that, unless homologous strain immunity is complete by the criterion of oocyst output, challenge with heterologous strains may result in depressed weight gain. 相似文献
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外源性一氧化氮对鸡柔嫩艾美尔球虫的作用 总被引：3，自引：2，他引：1
用酸化亚硝酸钠作为一氧化氮(NO)供体处理新收取的柔嫩艾美尔球虫未孢子化和已孢子化卵囊,来探讨外源性NO对球虫卵囊的抑杀作用。另外通过内服亚硝基谷胱甘肽(GSNO)试验来观察外源性NO对球虫病的防治作用。结果表明,酸化亚硝酸钠溶液(pH=1)对球虫卵囊的孢子生殖具有明显的抑制作用,20mmol/L酸化亚硝酸钠溶液对卵囊孢子生殖的抑制率可达100%;但不经酸化的亚硝酸钠溶液和相同pH的盐酸溶液对卵囊的孢子生殖没有明显影响。经20mmol/L以上浓度酸化亚硝酸钠处理的孢子化卵囊也失去了对雏鸡的致病力,但直接内服GSNO溶液则没有明显的抗球虫作用。这提示外源性NO对鸡柔嫩艾美尔球虫未孢子化和孢子化卵囊均有抑杀作用,但直接内服没有明显的抗球虫病作用。 相似文献
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Live vaccines containing attenuated parasite strains are increasingly used to control chicken coccidiosis. In this paper antibody responses elicited by infections with wild-type and attenuated strains of Eimeria tenella and Eimeria necatrix were characterized by immunoblotting and ELISA with homologous and heterologous antisera. Few differences between antisera from birds infected with wild and attenuated strains of E. tenella were evident in immunoblots conducted with merozoite antigen preparations from both E. tenella strains, however the reactivity of sera raised in birds infected with the wild-type strain was noticeably more intense. In ELISAs conducted with merozoite antigen preparations, antisera from birds infected with the wild-type strains of E. tenella and E. necatrix consistently produced a significantly higher (P<0.05) antibody response than antisera from birds infected with the attenuated strains. Likewise, avidity ELISAs conducted with the E. tenella strains demonstrated that antibodies in birds infected with the wild-type strain were of significantly higher avidity (P<0.05) than antibodies in birds infected with the attenuated strain. The differences in the antibody responses are probably due to changes in the attenuated strain as a result of selection for precocious development and the less severe tissue damage and inflammation of the intestine resulting from infection with the attenuated strain. 相似文献