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鸡传染性贫血病毒VP1和VP2基因共表达载体的构建 总被引：1，自引：0，他引：1
根据GenBank中收录的鸡传染性贫血病毒(CIAV)基因组序列,设计了扩增CIAV VP1和VP2基因的特异性引物,运用PCR技术从发病鸡肝组织DNA中扩增得到VP1、VP2基因,并将其克隆至pMD18-T载体.核苷酸测序结果显示,其序列与发表的序列同源性达到99.8%.将VP2基因克隆到pMD18-T载体,并对Vp3基因起始密码子进行定点突变,得到突变基因mVP2.将mVP2、VP1先后克隆至pIRES载体,并转化大肠埃希菌JM109,提取质粒通过酶切鉴定显示,成功获得了共表达质粒pIRES-VP1/mVP2. 相似文献
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鸡贫血病毒vp3基因克隆、序列分析和比较 总被引：2，自引：0，他引：2
克隆了从我国哈尔滨分离的一株鸡贫血病毒（CAV）的vp3基因，并对之进行了测序。该基因的开放读码枢由366bp组成，编码121个氨基酸，氨基酸组成具有已报道VP3的典型特点。本次克隆的基因与GenBank收录的CAV的vp3基因进行序列比较，同源性至少为98％。与国内报道的山东株SJ1的vp3基因有3个核苷酸的差异，表明国内的CAV毒株已经产生了一些分化。在EMBL中比较本次克隆的VP3蛋白一级结构，与之差异最大的是马来西亚分离株的VP3，有5个氨基酸残基不同，同源性为96％。同时收集EMBL中的CAV的VP3蛋白绘制进化树，我国哈尔滨分离的CAV毒株与CIA进化关系最近，而与Cux-1的2个衍生株QDWX1、QDWX3进化关系最远。这些结果进一步证明了CAV在遗传方面是较保守的病毒，来自哈尔滨的CAV不是CAV的一个独立分支。 相似文献
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《中国兽医杂志》2015,(7)
为研究鸡传染性贫血病毒(CIAV)VP3蛋白在宿主细胞中的作用,本研究采用PCR技术从CIAV DNA中扩增出vp3基因,并将该基因克隆到p MD18-T simple vector中。经测序证实所克隆的vp3基因与CIAV CUX-1标准株相同。并将vp3基因亚克隆到真核表达载体p EGFP-N1中,构建了重组真核表达质粒p EGFP-vp3与p CMV-Myc vp3,转染BHK-21和293 T细胞,经RT-PCR、荧光显微镜以及Western Blot证实转染的真核细胞能够表达VP3蛋白。以台盼蓝染色法检测细胞死亡,结果表明,VP3蛋白具有较强诱导细胞死亡的作用。该结果为深入研究CIAV的致病机理奠定了基础。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2020,(17)
为了评估辽宁地区鸡传染性贫血病毒(Chicken anemia virus,CAV)的变异情况及致病能力,试验提取鸡传染性贫血发病鸡肝脏总DNA,依据GenBank中德国株CUX-1(M55918.1)基因序列设计3对特异性引物进行PCR扩增、测序及序列分析;然后对鸡传染性贫血发病鸡肝脏进行常规处理,取菌液接种1日龄SPF雏鸡,观察其是否具有致病性。结果表明:成功分离出1株CAV(DD-2016),该毒株基因编码区全长为2 297 bp,共编码764个氨基酸,与GenBank中南韩株South Kores(JF507715.1)核苷酸序列的同源性最高(99.17%);该分离株能引起SPF雏鸡发生贫血、皮下出血、胸腺萎缩、骨髓黄化等典型病理学损伤。说明辽宁地区目前流行毒株基因发生了较大变异且致病力较强。 相似文献
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应用PCR方法检测鸡传染性贫血病毒 总被引：3，自引：0，他引：3
根据发表的鸡传染性贫血病毒(CAV)序列,选择鸡传染性贫血病毒基因组保守区域。设计一对引物,建立了CAV快速诊断的PCR方法。特异性结果说明,该方法对CAV不同毒株均能扩增出明显的特异性条带,而新城疫病毒(NDV)Lasota株、传染性支气管炎病毒(IBV)M41株、鸡马立克氏病病毒(MDV)和鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)扩增结果均为阴性;PCR反应敏感性结果显示．该方法能检测出的DNA最低浓度为O．001pg／μl,可用于临床感染不同年龄鸡群的CAV的检测。 相似文献
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CAV与REV共感染SPF鸡对疫苗免疫反应的抑制作用 总被引：3，自引：0，他引：3
用1日龄SPF鸡人工感染鸡贫血病毒(CAV)和禽网状内皮增生病病毒(REV),探讨病毒感染对鸡体疫苗免疫反应的影响。结果表明,在用禽流感病毒(AIV,H5和H9)疫苗免疫后,CAV与REV单独感染均显著抑制了鸡体对H5和H9亚型禽流感病毒灭活疫苗的HI抗体反应,在CAV与REV共感染后,这种抑制作用更为明显。CAV单独感染后鸡体对新城疫病毒(NDV)和传染性法氏囊病病毒(IBDV)疫苗的免疫反应受到抑制,但与对照组在统计学上的差异不显著,然而,CAV可以显著加重REV感染对鸡体在NDV和IBDV疫苗免疫后抗体反应的抑制作用。从而证实CAV与REV共感染在疫苗免疫抑制上有协同作用。 相似文献
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鸡贫血病毒(Chicken anemia virus,CAV)是目前已知最小的动物病毒之一,为单股环状DNA,基因组长度为2.3 kb.CAV基因组单链有3个部分或完全重叠的开放阅读框(ORF),分别编码核衣壳蛋白VPl、相关蛋白VP2、细胞凋亡因子VP3 3种蛋白.至今发现的所有CAV毒株的抗原性都相同,均属于同一个血清型,但世界各地的CAV分离株之间毒力不同,基因组序列也存在一些差异. 相似文献
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将Akesu/O/58口蹄疫病毒分离株牛舌皮毒适应乳鼠,通过RT-PCR法分别获得了该病毒结构蛋白基因vp1和p1.结果表明:vp1和p1基因分别为639 bp和2 208 bp,与Akesu/O/58细胞适应株FMDV的vp1和p1基因核苷酸序列的同源性分别为83.9%和84.7%,氨基酸序列的同源性为89.7%和95.1%.本试验分离株与OHK99、O1K、Taiwan97病毒株的细胞受体结合位点均为RGD(Arg-Gly-Asp),而Akesu/O/58细胞适应株的细胞受体结合位点为SGD(Ser-Gly-Asp). 相似文献
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鸡贫血病毒VP1和VP2蛋白在家蚕中的联合表达 总被引：1，自引：0，他引：1
将鸡贫血病毒VP1和VP2基因分别克隆入转换载体pBacPAK8中，获得重组转移质粒pBac-vp1和pBac-vp2。以上两质粒分别与CvnⅠ酶切线性化的亲本病毒Bm-BacPAK6DNA共转染家蚕细胞，通过蓝白斑筛选，纯化得到重组病毒Bm-vp1和Bm-vp2。PCR分析表明Vp1和Vp2基因已整合进杆状病毒基因组中。将Bm-vp1和Bm-vp2共感染5龄家蚕，通过表达产物免疫SPF鸡产生的抗血清与CAV感染的MDCC－MSB1细胞的间接荧光抗体分析，证明表达产物能诱导鸡产生相应的抗体。该研究表明，表达VP1和VP2蛋白的重组家蚕杆状病毒（recombinant BmNPV）是很有前途的CAV亚单位疫苗的生产系统。 相似文献
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将从组织病料中提取的鸡传染性贫血病毒(chicken infectious anemia virus,CIAV)核酸进行PCR扩增,获得vp1基因,将其克隆到表达载体pET32a(+)中,构建了CIAV vp1基因重组质粒,命名为pET32a-vp1。将 pET32a-vp1转化E.coli plys,重组菌经IPTG诱导,SDS-PAGE分析结果表明,vp1基因在大肠杆菌中成功表达。纯化的蛋白质作为包被抗原,ELISA鉴定结果表明具有良好的抗原性。本试验结果为进一步研究用重组抗原制备CIAV ELISA诊断试剂盒奠定了基础。 相似文献
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Direct detection of chicken anemia virus (CAV) DNA in tissues and sera was investigated by a polymerase chain reaction (PCR) assay. Using a pair of primers constructed to amplify the coding sequence of the CAV DNA genome, the PCR assay was shown to be extremely sensitive, being able to detect 1 fg of CAV replicative form DNA. The oligonucleotide primers used for the PCR yielded 583 base-pair (bp) amplified product, which was sized by ethidium bromide-agarose gel electrophoresis. Tissue samples from seven cases of suspected chicken infectious anemia were obtained for CAV isolation. DNA extracted from the homogenized suspension of pooled tissues of each case was analyzed by the PCR assay. Results showed that five of the seven cases were positive for CAV DNA by PCR, whereas CAV was isolated from four cases only. The PCR assay also detected CAV DNA in two of 37 serum samples from disease-free chickens. The specificity of PCR was confirmed by chemiluminescence dot-blot analysis of the amplified products. 相似文献
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通过RT．PCR法获得阿克苏（Akesu／O／58）FMDV结构蛋白基因vp1，将该基因克隆到pGEM．TEasy载体进行核苷酸序列测定。将vp1基因、Kozak序列等插入中间表达质粒pBin438，构建重组中间表达载体pBinVP1。采用三亲融合法构建植物双元表达载体pBinFMDV-vP1。结果表明：vp1基因为639bp。重组中间表达载体pBinVP1经BamHI／Sal I双酶切、PCR扩增和序列测定，表明vp1基因、Kozak序列等插入pBinVP1中。在含50mg／L卡那霉素、25mg／L链霉素和50mg／L利福平的YEB培养基上筛选及对融合农杆菌质粒进行vp1基因的PCR检测，证明植物双元表达载体pBinFMDV-vP1构建正确。 相似文献
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Nogueira-Dantas EO Ferreira AJ Astolfi-Ferreira CS Brentano L 《Comparative immunology, microbiology and infectious diseases》2007,30(3):133-142
Purification of chicken anemia virus (CAV) VP3 protein, expressed in a prokaryotic expression system as histidine-tagged fusion protein is demonstrated in the present study. CAV particle was obtained from infected liver of chicken and DNA was extracted. The VP3 protein gene was amplified from the extracted DNA by polymerase chain reaction (PCR) and cloned. The recombinant expression construct (pTrc-VP3) was identified by PCR and sequencing analysis. Expression of VP3 protein with a molecular mass of approximately 21kDa was confirmed by Western blotting analysis with CAV-specific antibodies. The in vitro expressed VP3 protein was purified to near homogeneity by elution from the gel, as judged by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis analysis. The purified VP3 protein was recognized by CAV antibodies in a Western blotting assay. This finding indicates that recombinant VP3 expressed in the pTrcHis2 vector system can be used as antigen to detect anti-CAV antibodies. 相似文献
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PCR技术在鼠金黄色葡萄球菌检测中的初步研究 总被引：5，自引：0，他引：5
根据已公布的金黄色葡萄球菌耐热核酸酶nuc基因的序列 ,设计并合成一对特异性的引物 ,利用PCR技术扩增nuc基因片段。对金黄色葡萄球菌和其他非金黄色葡萄球菌菌株抽提的DNA进行扩增。结果金黄色葡萄球菌PCR产物出现 6 6 8bp的特异性DNA扩增片段 ,而其他非金黄色葡萄球菌未出现扩增片段 ,证实了合成的引物对金黄色葡萄球菌具有特异性。将抽提的金黄色葡萄球菌DNA进行系列稀释 ,测定此PCR体系的敏感性。结果显示 ,该PCR体系能检出 3pg金黄色葡萄球菌DNA ,且从抽提DNA到PCR扩增及电泳结束仅需 4h。因此 ,研究所建立的扩增耐热核酸酶nuc基因检测鼠金黄色葡萄球菌的PCR方法 ,具有快速、可靠、敏感和特异的特点 ,可用于临床样品和金黄色葡萄球菌感染时的检测 ,适合应用于实验大小鼠的监测 相似文献
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口蹄疫病毒结构蛋白基因vp1的表达与应用研究 总被引：2，自引：0，他引：2
体外克隆口蹄疫病毒vp1基因，构建重组表达载体pET28a-vp1。将此重组质粒转化到受体菌BL21（DE3）中，进行诱导表达，SDS-PAGE和蛋白质印迹分析表明，诱导5h后表达量达到最高，表达产物大小约为33Ku-40Ku，表达蛋白能与口蹄疫病毒阳性血清产生特异性免疫反应。经HPLC纯化后，以重组蛋白为抗原，建立检测VP1蛋白抗体的ELISA方法，检测猪牛血清样品，免疫抗体检测结果与口蹄疫液相阻断ELISA检测结果呈正相关，能反映出免疫抗体动态变化，对临床样品口蹄疫病毒血清抗体检测，两种方法有一定相关性，但不显著。所以以重组VP1蛋白为检测抗原的ELISA方法有望用于口蹄疫免疫抗体监测。 相似文献
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为获得高活性的鸡传染性法氏囊病病毒（infectious bursal disease virus,IBDV）VP2蛋白的重组蛋白,本试验对IBDV VP2蛋白基因与能进行自我组装的幽门螺杆菌（Hp）铁蛋白基因进行融合PCR扩增,获得其融合基因。根据成熟VP2蛋白基因cDNA序列和Hp铁蛋白基因的碱基序列,设计合成2对引物,应用融合PCR技术扩增获得融合基因片段VP2-Fe。将目的基因克隆至pMD18-T载体筛选阳性重组克隆质粒,然后将目的基因亚克隆至真核表达载体pPICZaC后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选获得阳性表达质粒。结果显示,通过两轮PCR扩增出长度为1 824 bp的融合基因VP2-Fe,亚克隆至pMD18-T载体,测序结果显示,融合基因无任何碱基的突变,筛选的阳性质粒命名为pMD-VP2-Fe。双酶切回收目的基因大小为1 824 bp,亚克隆至pPICZaC,PCR和双酶切鉴定出现预期大小的片段,将获得的阳性表达质粒命名为pPICZaC-VP2-Fe。本研究为后期利用真核表达载体获得其融合重组蛋白奠定基础。 相似文献