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为评价含碘、季铵盐、过硫酸氢钾、二氧化氯这四类常用消毒剂对非洲猪瘟病毒（ASFV）的灭活效果,参考OIE参考实验室相关操作流程,基于畜禽栏舍、运载工具、器具消毒及皮肤黏膜消毒目的,根据说明书标明的浓度范围选择不同工作浓度,与ASFV分别在4 ℃和20 ℃条件下作用30分钟,10倍连续稀释后接种猪肺泡巨噬细胞,同时加入猪红细胞,培养观察红细胞吸附现象。结果显示,本试验四类消毒剂对ASFV均有灭活作用,但灭活效果因消毒剂的种类和工作浓度不同有所差异。相同工作浓度的同一消毒剂产品,在4 ℃和20 ℃这两种条件下的灭活效果基本一致。季铵盐类和二氧化氯类消毒剂,在说明书推荐的工作浓度下,均有效灭活ASFV;多数含碘类、过硫酸氢钾类消毒剂,需在其说明书标明浓度范围的较高工作浓度时,才可有效杀灭ASFV。本研究为非洲猪瘟防控工作中消毒剂的选择和使用提供参考。 相似文献
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为做好非洲猪瘟（ASF）防控，保障猪场生物安全措施的有效实施，通过查阅文献分析了多种猪场常见消毒药（火碱、酸、过硫酸氢钾、卤素类和醛类）的特点及使用方法，综述了其对非洲猪瘟病毒（ASFV）的杀灭效果。结果显示：在22℃时，1.0%和0.5%的火碱溶液可将ASFV杀灭；800倍稀释的二氯异氰尿酸钠溶液可在0.5 h杀灭ASFV;1.0%的柠檬酸能够将ASFV减少4个对数单位以上；3.0%的醋酸以及0.1%、0.5%和1.0%的戊二醛溶液均对ASFV有杀灭效果。综上，推荐火碱（0.5%）或二氯异氰尿酸钠（稀释度1:800）用于环境消毒，戊二醛（0.1%～1.0%）用于带猪消毒。本文通过综述猪场常用消毒药对ASFV的消杀效果，为猪场消毒药的选择和使用提供指导，以助于猪场的ASF防控。 相似文献
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《广东畜牧兽医科技》2021,46(3)
生物安全仍是当前防控非洲猪瘟的最重要措施。然而,在猪场的各个生物安全环节中,对员工食材的消毒尚未见较好的方法。臭氧消毒是多场景中均可使用的消毒方式。因此,为了探究臭氧溶于水后对非洲猪瘟病毒(ASFV)的杀灭效果,试验通过臭氧水与ASFV的作用后的红细胞吸附(HAD)试验来判定臭氧水对ASFV的杀灭效果。试验结果显示:10 m L浓度为2.0 ppm、3.5 ppm、5.0 ppm的臭氧水与100μL的3.0×104拷贝数的ASFV作用2 min、5 min和10 min时,HAD结果均为阴性,表明2.0 ppm、3.5 ppm、5.0 ppm的臭氧水作用于100μL的3.0×104拷贝数的ASFV 2 min、5 min和10 min时,均可完全杀灭病毒。以上试验表明,臭氧水在不同作用时间下对ASFV具有较好的杀灭效果。 相似文献
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《中国预防兽医学报》2021,(9)
为评估抗低温消毒剂"抗冻消-30"对非洲猪瘟病毒(ASFV)的杀灭效果,本研究通过观察不同稀释度的"抗冻消-30"对细胞形态的影响,并计算相应细胞的活性确定该消毒剂对细胞的安全浓度。结果显示,"抗冻消-30"对细胞的安全浓度为≤1 g/L,细胞存活率高于95%,且形态正常。将不同浓度的ASFV报告病毒(rASFV-HLJ/2018-EGFP株)与不同浓度"抗冻消-30"在不同温度下作用30 min后,分别感染HEK293T细胞,通过倒置荧光显微镜观察,评估在不同温度下"抗冻消-30"对ASFV报告病毒的杀灭效果;将不同浓度的ASFV亲本病毒(HLJ/2018株)与不同浓度"抗冻消-30"在-30℃作用30 min后,分别感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs),一定时间后加入猪红细胞,利用倒置显微镜观察红细胞吸附现象,评估-30℃条件下,"抗冻消-30"对ASFV亲本病毒的杀灭效果。结果显示,常温和4℃时,400 g/L、160 g/L、80 g/L、40 g/L、8 g/L的"抗冻消-30"可完全杀灭10~6TCID_(50)及以下浓度、10~5TCID_(50)及以下浓度、110~4TCID_(50)及以下浓度、10~4TCID_(50)及以下浓度、10~3TCID_(50)及以下浓度的ASFV报告病毒;-20℃时,上述浓度的"抗冻消-30"可完全杀灭10~5TCID_(50)及以下浓度、110~4TCID_(50)及以下浓度、10~3TCID_(50)及以下浓度、10~3TCID_(50)及以下浓度、10~2TCID_(50) ASFV报告病毒;-30℃和-40℃时,上述浓度的"抗冻消-30"可完全杀灭110~4TCID_(50)及以下浓度、10~3TCID_(50)及以下浓度、10~3TCID_(50)及以下浓度、10~2TCID_(50)及以下浓度、10~2TCID_(50) ASFV报告病毒。-30℃时,400 g/L、160 g/L、80 g/L、40 g/L的"抗冻消-30"可完全杀灭110~4TCID_(50)及以下浓度、10~3TCID_(50)及以下浓度、10~3TCID_(50)及以下浓度、10~2TCID_(50)及以下浓度的ASFV亲本病毒。本研究在细胞水平上系统评价了该消毒剂对ASFV报告病毒和亲本病毒的杀灭情况,表明"抗冻消-30"在常温和低温条件下对ASFV均具有良好的杀灭效果,可以作为防控ASF的有效消毒剂。 相似文献
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正一、非洲猪瘟病原非洲猪瘟病毒(ASFV)是非洲猪瘟病毒科非洲猪瘟病毒属唯一成员,具有典型二十面体囊膜结构,病毒粒子大小200 nm。ASFV对低温高度耐受,加热灭活(56℃/60 min;60℃/20 min)。对乙醚和氯仿敏感,8/1 000的氢氧化钠(30 min)、次氯酸和碘化合物可将其灭活。ASFV在肉类中存活期长(表1),不利于病毒的消除。 相似文献
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为建立一种检测非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体的间接ELISA(iELISA)方法,对构建的ASFV P30基因表达工程菌诱导表达后,将获取的重组ASFV P30蛋白进行纯化和Western-blot检测,然后以纯化的重组蛋白为抗原,建立了ASFV抗体iELISA检测方法,并进行了特异性、灵敏性、重复性试验;同时与基于ASFV P30-2His6蛋白(N、C末端各融合1个His6标签)的iELISA方法进行兽医临床样本比较试验。结果显示:重组ASFV P30蛋白和重组ASFV P30-2His6蛋白在Western-blot检测中,均能与猪ASFV阳性血清产生特异性杂交带;基于重组ASFV P30蛋白iELISA的最佳反应条件为,抗原蛋白包被质量浓度20μg/mL、血清样品稀释度1:1 000、酶标二抗稀释度1:40 000、血清样品检测OD450阳性结果临界值0.22。该方法仅对ASFV阳性血清呈特异性反应,1:3 200稀释的阳性血清仍可检出,批内试验和批间试验变异系数均小于10%,可以消除His标签所造成的假阳性反应。本研究建立的ASFV P30 iELISA检测方法为ASFV抗体检测提供了一种有效手段。 相似文献
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《中国预防兽医学报》2021,(9)
为建立非洲猪瘟病毒(ASFV)的血清学检测方法,本研究根据ASFV Georgia2007/1株基因组合成其p72全长基因,并将其克隆至p GEX6p-1载体,构建重组质粒pGEX6p-1-p72并经酶切、PCR和测序鉴定正确后转化BL21感受态细胞,经IPTG诱导表达后经SDS-PAGE和western blot鉴定,结果显示获得了可溶性表达且纯度较高的重组p72蛋白(rp72)。利用GST亲和纯化层析柱纯化,得到浓度为0.2 mg/mL的rp72。以rp72作为包被抗原,通过优化各反应条件建立检测猪血清中非洲猪瘟抗体的间接ELISA方法,结果显示,rp72最佳包被浓度为1.25μg/mL,封闭时间为37℃1 h;待检血清稀释度为1.100,孵育时间为37℃30 min;羊抗猪IgG-HRP孵育时间为37℃1 h。利用该方法检测280份阴性血清,确定其临界值为0.412。采用建立的间接ELISA抗体方法对PEDV、PRRSV、CSFV、PRV、TGEV、PPV、PCV、E. coli阳性猪血清进行检测,结果显示,除ASFV阳性对照为阳性外,其他病原阳性血清检测结果均为阴性,该方法特异性强;将非洲猪瘟抗体阳性猪血清2倍倍比稀释(1.100～1.6 400)后,利用该方法进行检测,结果显示其检测阳性血清的稀释度为1.3 200倍时OD_(450nm)值仍大于临界值,敏感性高于市售西班牙ASFV阻断ELISA试剂盒检测结果,本研究建立的方法敏感性较高;对该方法进行批内和批间重复性试验,结果显示批内和批间的变异系数均10%,重复性良好。利用本研究建立的ASFV ELISA抗体检测方法(p72)对184份临床血清进行检测,结果显示该方法敏感性为100%,特异性为98.70%;与ASFV阻断ELISA抗体检测试剂盒方法总符合率为98.91%,kappa值为0.961。本研究首次基于rp72建立的非洲猪瘟抗体间接ELISA检测方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,为ASFV抗体检测提供了一种快速、精准、经济、高效的方法。 相似文献
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通过对新型复合消毒剂——癸甲丙二醇氯铵复合碘抗病毒效果的定量试验和定性试验,结果表明,癸甲丙二醇氯铵复合碘（含碘50g／L）按1：500稀释,对猪瘟兔化弱毒和鸡新城疫病毒的灭活率均为100％,对新城疫病毒10min即达到完全灭活作用;按1：1000稀释对猪瘟兔化弱毒、鸡新城疫病毒及牛病毒性腹泻病毒（BVDV）的灭活率分别为99％、100％和100％,而1：1000稀释的聚维酮碘（含碘50g／L）对照灭活率为90％,癸甲丙二醇氯铵复合碘的抗病毒效果好于聚维酮碘。 相似文献
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过氧乙酸戊二醛复方消毒剂对羊舍环境真菌的消毒效果评价 总被引：1，自引：0，他引：1
为了测定过氧乙酸戊二醛复方消毒剂对环境真菌的消毒效果,为其使用提供依据,以黑曲霉、青霉分离株和白色念珠菌标准株为指示菌,应用5种消毒剂分别进行悬液定性、定量杀灭试验,并应用复方消毒剂进行了羊舍现场消毒效果监测。结果显示:复方消毒剂在推荐中剂量组作用30 min可完全杀灭指示菌,而其他4种消毒剂在推荐中、高剂量组不能完全杀灭3种指示菌;复方消毒剂对真菌消毒合格所需的有效成分浓度均低于其他消毒剂;复方消毒剂以1:256稀释、20 mL/m~3剂量喷雾消毒,对羊舍气载真菌作用6 h后的效果最佳(杀灭率为47.8%~68.1%),对地面、墙壁和笼具等表面载体消毒30 min的杀灭率分别为89.3%、72.3%和88.7%,可维持24 h以上。结果表明,过氧乙酸戊二醛复方消毒剂在实验室消毒和现场消毒试验中1:256稀释作用10 min即可高效杀灭真菌孢子,比市售常见消毒剂所需有效成分浓度更低,用时更短,但在生产应用中应根据实际情况适当加大使用浓度和剂量。 相似文献
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旨在建立特异、敏感的实时荧光定量PCR（FQ-PCR）方法,用于非洲猪瘟病毒（ASFV）和猪瘟病毒（CSFV）野毒株的快速鉴别检测。针对ASFV的P72基因和CSFV野毒株的5'UTR非编码区序列的保守区域分别设计1对特异性引物和1条探针,经优化反应条件,建立一种基于TaqMan MGB探针技术的FQ-PCR方法,验证方法的敏感性、特异性和稳定性,对50份临床样品进行检测,并与猪瘟国标方法及OIE推荐的非洲猪瘟检测方法进行比较分析。结果显示：建立的鉴别ASFV和CSFV野毒株二重FQ-PCR检测方法在100~106拷贝·μL-1模板范围内有良好的线性关系;对ASFV和CSFV基因出现阳性扩增信号,但对猪瘟病毒疫苗株、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒、副猪嗜血杆菌等病原对照未出现扩增;批内、批间试验变异系数在1.18%~2.08%,重复性良好;对ASFV和CSFV的最低检测模板浓度均为10拷贝·μL-1;利用建立的二重FQ-PCR方法对50份临床样品进行检测,检测结果与猪瘟国标方法及OIE推荐的非洲猪瘟检测方法结果完全一致。本研究成功建立了鉴别ASFV和CSFV野毒株二重TaqMan MGB FQ-PCR方法,为ASFV和CSFV野毒株的鉴别诊断提供了快速、敏感、特异且能满足临床检测需求的检测方法。 相似文献
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非洲猪瘟（African swine fever,ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）感染引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,给养猪业造成了严重的经济损失。本研究利用重组酶聚合酶扩增技术（RPA）,针对ASFV B646L （p72）基因设计了3组引物和探针,并进行筛选、反应条件优化、灵敏性、特异性和重复性试验,建立了实时荧光RPA方法。结果显示,该方法在39℃、20 min内即可检测10个拷贝的DNA分子,且与猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒均无交叉反应,检测5.5×106至5.5×100拷贝/μL共7个稀释度样品在各时间点的荧光强度,变异系数范围在0.38%~28.30%。该等温、快速扩增方法可用于ASFV的定性检测,为中国ASFV感染的早期诊断提供技术支持,对疫情暴发后相应控制方案的制定具有重要意义。 相似文献
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《养殖与饲料．饲料世界》2020,(9)
非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)导致的一种烈性、高度接触性传染病,目前兽医临床上还没有有效的商品化非洲猪瘟疫苗,该病的防控应重视生物安全措施,提高饲养管理水平和消毒措施。非洲猪瘟病毒对碱类、戊二醛等多种消毒剂均敏感,根据消毒范围可选择合适的消毒剂。 相似文献
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《中国兽医杂志》2020,(1)
非洲猪瘟(简称非瘟)是猪病中一种重要的疾病,严重影响养猪业的发展。因目前没有有效疫苗和治疗药物,对该病的防控主要采取消除传染源和生物安全措施。非瘟发病场消毒是清除病原的重要手段。本文对江苏某发生非瘟猪场的猪舍内进行了消毒,并评价了每个消毒环节的效果。采取的消毒措施为:清扫前消毒,清扫冲洗,之后分别用3%NaOH、5%次氯酸钠、1∶200过硫酸氢钾消毒和冲洗。干燥后火焰灼烧、白化处理(4%火碱+20%石灰水)。最后用甲醛熏蒸24 h,空舍10 d。消毒效果检测表明,经过多个环节的消毒到过硫酸氢钾作用完成时,环境细菌总数已达到200 CFU/cm~2,非洲猪瘟病毒(ASFV)核酸荧光定量PCR Ct值为36,表明环境细菌总数和ASFV核酸已非常少。火焰灼烧后,排污沟细菌总数为43 CFU/cm~2,达到环境合格标准;ASFV为阴性。再经过白化、熏蒸、空舍后细菌总数达标,ASFV为阴性。本试验表明,非瘟后猪舍经过多个消毒环节,清除了环境中ASFV。本研究为非瘟后猪舍的合理消毒程序和消毒后效果检测提供参考。 相似文献
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《中国畜牧兽医》2018,(12)
为建立检测血清中非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)抗体的间接ELISA方法,本试验将ASFVp30基因进行原核表达,采用SDS-PAGE和Western blotting方法对重组蛋白进行表达鉴定和免疫原性分析,随后以纯化的重组蛋白为包被抗原,经条件优化、特异性试验、敏感性试验和重复性试验,建立一种血清中ASFV抗体的检测方法。结果显示,ASFVp30基因成功克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,获得pET-32a-p30重组质粒;转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达,得到P30重组蛋白,重组蛋白大小约为42ku,主要以包涵体形式存在;Western blotting结果显示,纯化后的蛋白具有良好的免疫原性;以纯化的P30重组蛋白为包被抗原,建立了检测ASFV抗体的间接ELISA方法,通过方阵试验对间接ELISA方法进行优化,最终确定了抗原最佳包被浓度为1.2μg/mL,待检血清最佳稀释倍数为1∶100,最佳封闭液为1%BSA,酶标抗体最佳稀释度为1∶4 000,以此建立的ASFV间接ELISA方法临界值为0.322。本方法仅与ASFV阳性血清发生特异性反应,与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型及猪流行性腹泻病毒阳性血清均无交叉反应,具有较强的特异性。该方法检测ASFV阳性血清灵敏度可达到1∶1 600;批内重复性和批间重复性变异系数均10%。本试验建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性,可初步应用于ASFV抗体的检测。 相似文献
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《畜牧兽医学报》2021,(1)
旨在建立特异、敏感的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,用于非洲猪瘟病毒(ASFV)和猪瘟病毒(CSFV)野毒株的快速鉴别检测。针对ASFV的P72基因和CSFV野毒株的5′UTR非编码区序列的保守区域分别设计1对特异性引物和1条探针,经优化反应条件,建立一种基于TaqMan MGB探针技术的FQ-PCR方法,验证方法的敏感性、特异性和稳定性,对50份临床样品进行检测,并与猪瘟国标方法及OIE推荐的非洲猪瘟检测方法进行比较分析。结果显示:建立的鉴别ASFV和CSFV野毒株二重FQ-PCR检测方法在10~0～10~6拷贝·μL~(-1)模板范围内有良好的线性关系;对ASFV和CSFV基因出现阳性扩增信号,但对猪瘟病毒疫苗株、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒、副猪嗜血杆菌等病原对照未出现扩增;批内、批间试验变异系数在1.18%～2.08%,重复性良好;对ASFV和CSFV的最低检测模板浓度均为10拷贝·μL~(-1);利用建立的二重FQ-PCR方法对50份临床样品进行检测,检测结果与猪瘟国标方法及OIE推荐的非洲猪瘟检测方法结果完全一致。本研究成功建立了鉴别ASFV和CSFV野毒株二重TaqMan MGB FQ-PCR方法,为ASFV和CSFV野毒株的鉴别诊断提供了快速、敏感、特异且能满足临床检测需求的检测方法。 相似文献