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1.
本研究旨在分析猪源ST9型耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,MRSA)中前噬菌体的流行情况、结构特点和转导能力,探究前噬菌体在猪源MRSA流行克隆形成中的作用。基于全基因组信息,分析了近年来从我国多省分离的131株ST9型MRSA中前噬菌体的流行率、分型、亲缘关系和结构特征;选取含不同分型前噬菌体的菌株进行诱导,对诱导获得的噬菌体颗粒进行转导,测定转导子的耐药表型及体外适应性。研究结果显示：猪源ST9型MRSA的前噬菌体携带率为78.6%(103/131株),其中,63株携带完整前噬菌体序列,所有前噬菌体序列均不含耐药基因,仅2.9%(3/103株)的前噬菌体序列含毒力基因;前噬菌体谱型丰富,其整合酶分型主要为Sa2int和Sa4int;各型别前噬菌体结构同源性较高,完整前噬菌体可被诱导为长尾噬菌体;噬菌体颗粒可包装供体菌的aadD、tet(L)耐药基因并转导至受体菌中;转导子可获得卡那霉素、四环素耐药表型,体外生长能力与受体菌株无明显差异(P>0.05)。研究结果表明：猪源ST9型MRSA的前噬菌体携带率较高,谱型丰富,不携带耐药基因,部分噬菌体可包装供体菌的耐药基因转导至受体菌,产生的适应性代价小。 相似文献
2.
《中国奶牛》2017,(8)
为了解奶牛场乳房炎金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)的耐药性,并对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的耐药基因进行研究,本研究采集奶牛场临床型乳房炎奶样89份进行金黄色葡萄球菌分离鉴定及药敏试验,采用K-B法检测其对常用13种抗生素的敏感性;利用双重PCR扩增MRSA的nuc基因和mec A耐药基因;应用基因外重复回文序列(repetitive extragenic palindromic elements,REP)PCR对分离菌株进行基因多样性分析。结果显示,共分离到16株MRSA;在监测的13种药物中,耐药率超过50%的达到10种,其中对头孢曲松(CRO)、头孢噻肟(CTX)、环丙沙星(CIP)和亚胺培南(IPM)耐药率高达93.75%(15/16),但未见对头孢呃酮(SCF)耐药的分离菌株;耐药基因检测结果显示,16株菌中都携带有mec A耐药基因,除1株外其他15株分离菌都携带特异致病nuc基因。REP-PCR把分离菌株分为13种基因型(A-M),同源性≥90%的只有6株菌。研究结果表明,奶牛乳房炎金黄葡萄球菌的多重耐药比较严重,分子多样性复杂,mec A是其耐甲氧西林类药物的重要机制,本研究为MRSA耐药菌的有效检测及奶牛乳房炎的治疗提供了科学依据。 相似文献
3.
本试验应用噬菌体分型的方法,对主要来源于我国京津地区葡萄球菌病鸡的207株金黄色葡萄球菌进行了分型。 应用国际金黄色葡萄球菌噬菌体分型系统分型的结果为:常规检验稀释度(R.T.D.)时分型率71.12％,其中属噬菌体第Ⅰ裂解群的最多,Ⅲ群次之,混和群和Ⅳ群(又不定群)再次之,属Ⅱ群者最少(分别占可分型总株数的48.98％,18.24％,14.12％,12.84％和5.41％)。在可分型菌株中,不同分离部位(主要为皮肤病灶、内脏和眼)的菌株均以属噬菌体裂解群Ⅰ群的居多;来源自不同日龄(主要为雏鸡、育成鸡和成鸡)的菌株也以属噬菌体裂解群Ⅰ群者居多。同时发现,鸡源金黄色葡萄球菌菌株中仅能被52A型噬菌体强烈裂解的占可分型总数的44.22％。 试验说明,自我国京津地区分离的鸡源金黄色葡萄球菌菌株与人源株有一定差异,但具有较好的同源性,文中讨论了两者间交叉感染的可能性。 相似文献
4.
为了解动物源性金黄色葡萄球菌对市售常见的各种兽用抗生素药物的耐药情况,掌握并分析其耐药性,指导临床合理使用抗菌药物。本研究通过常规细菌分离鉴定患病动物炎性分泌物,对分离菌株进行生化试验、耐药性试验、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant S.aureus,MRSA)鉴定和耐药基因鉴定,获得4株耐药金黄色葡萄球菌,2株为MRSA,2株为甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(Methicillinsusceptible S.aureus,MSSA);4株金黄色葡萄球菌均检测出tetA、aac(6')/aph(2')、sul1耐药基因,其中2株MRSA检测出mecA。MRSA与MSSA均表现出了多重耐药现象,其中MRSA比MSSA的耐药现象更为广泛。因此,要更加关注MRSA的流行情况,制定规范的用药行为,严控抗生素药物的滥用。 相似文献
5.
《畜牧兽医学报》2020,(3)
旨在揭示金黄色葡萄球菌针对β-内酰胺类抗生素可能存在细胞壁增厚的耐药机制。2016—2018年间,采集宁夏地区部分奶牛养殖场临床及亚临床型乳腺炎的乳样,通过显色培养基鉴别、镜检及PCR方法,分离鉴定牛乳源金黄色葡萄球菌;利用微量肉汤稀释法测定细菌对14种抗菌药物的耐药性,了解本地区金黄色葡萄球菌的耐药率及多重耐药情况;通过qRT-PCR方法检测细胞壁增厚相关的pbpB、murG、glmU、atlR基因转录丰度,并结合透射电镜进行形态观察,以确定增厚及发生原因。结果显示,分离鉴定出261株牛乳源金黄色葡萄球菌,其中包括9株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)。药敏试验结果显示,金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类抗生素具有较高的耐药率,其中氨苄西林为79.69%,青霉素为78.54%。多重耐药情况是以3、7和8重耐药的菌株居多;其中1株耐药种数达14种之多。qRT-PCR结果表明,4种相关基因的转录丰度均极显著上调(P0.001或P0.01)。透射电镜观察发现,甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(methicillin sensitive Staphylococcus aureus, MSSA) JY21菌株的细胞壁在64和128μg·mL~(-1)的青霉素浓度下,较对照组均极显著增厚(P0.001),并可见细胞壁表面粗糙,有结节状凸起;但药物浓度从64μg·mL~(-1)升高至128μg·mL~(-1)细胞壁不再显著增厚(P0.05)。MRSA WLD10菌株细胞壁未出现明显增厚(P0.05)。综上所述,本地区牛乳源金黄色葡萄球菌针对β-内酰胺类抗生素,存在细胞壁增厚的耐药机制;增厚的原因主要是肽聚糖的过度合成及细胞自溶的减少。与MSSA JY21菌株相比,细胞壁增厚并非MRSA WLD10重要的耐药机制。 相似文献
6.
A.T.Feβler S.Wendlandt A.Ruppelt K.Kadlec M.Hassel T.Hauschild S.Monecke P.Slickers 翁善钢 《中国家禽》2013,35(5)
近期,德国研究者开展了2项研究以期深入了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的流行情况及耐药特性.22个源自患病火鸡和鸡MRSA菌株以及32个源自火鸡和鸡肉/肉制品的MRSA菌株研究显示,分离菌株中,CC398为优势菌株,同时CC5和CC9的MRSA菌株也被检出;除了2个MRSA菌株外,其他所有菌株均具有多重耐药性,且至少对3类抗菌剂具有耐药性.采用DNA微阵列分析和分子分型来获得MRSA的分子生物学特征有助于追溯其在家禽及食物链中的传播. 相似文献
7.
《畜牧与兽医》2015,(11):88-90
研究旨在了解江苏省牛奶源金黄色葡萄球菌分离株中抗生素耐药基因的分布特征。经耐热核酸酶基因(nuc)和甲氧西林耐药决定子A基因(mec A)的PCR检测,78个牛奶源菌株中18株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),60株为甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)。采用PCR方法检测了所有菌株中氨基糖苷类耐药基因aac(6')/aph(2″)、aph(3')-Ⅲ和ant(4',4″),大环内酯类耐药基因erm A、erm C和msr A,四环素类耐药基因tet M和tet K,上述8种耐药基因的检出率分别为32.1%、20.5%、41.0%、16.7%、44.9%、12.8%、29.5%和28.2%。除erm C在MSSA菌株中的检出率高于MRSA菌株之外,其余7种耐药基因的检出率均为MRSA菌株显著高于MSSA菌株。MRSA菌株携带2种及以上耐药基因的百分率较MSSA菌株高,MRSA菌株多重耐药情况更加普遍。 相似文献
8.
将噬菌体与细菌孵育25min提取噬菌体感染细菌的总RNA,通过逆转录的方法获得cDNA,以此为模板进行PCR扩增得到目的片段,以pET-15b为载体构建重组质粒pET-15b-lysK并转入大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达金黄色葡萄球菌噬菌体K裂解酶基因lysK,表达产物蛋白经镍柱纯化后,测定LysK的裂解活性、裂解谱,并免疫家兔制备多克隆抗体。结果表明,成功诱导表达可溶性LysK并获得重组蛋白,酶谱试验证明LysK对金黄色葡萄球菌具有裂解活性,LysK比噬菌体K裂解谱广。制备的兔多克隆抗体能够与LysK发生特异性反应且具有较高效价,为后续进行LysK体内治疗研究打下了基础。 相似文献
9.
金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶LysK的表达及其多克隆抗体的制备 总被引：1，自引：0，他引：1
将噬菌体与细菌孵育25min提取噬菌体感染细菌的总RNA,通过逆转录的方法获得cDNA,以此为模板进行PCR扩增得到目的片段,以pET-15b为载体构建重组质粒pET-15b—lysK并转入大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达金黄色葡萄球菌噬菌体K裂解酶基因lysK,表达产物蛋白经镍柱纯化后,测定LysK的裂解活性、裂解谱,并免疫家兔制备多克隆抗体。结果表明,成功诱导表达可溶性LysK并获得重组蛋白,酶谱试验证明LysK对金黄色葡萄球菌具有裂解活性,LysK比噬菌体K裂解谱广。制备的兔多克隆抗体能够与LysK发生特异性反应且具有较高效价,为后续进行LysK体内治疗研究打下了基础。 相似文献
10.
为了克隆奶牛乳房炎金黄色(葡萄球菌裂解性噬菌体裂解酶Lys IMEP5基因,分析其生物信息学特性,以本实验室分离的奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌裂解性噬菌体v B_Sau S_IMEP5为材料,根据其全基因组学信息,获取裂解酶基因序列,应用Primer 5.0设计特异性引物。采用PCR方法扩增并克隆Lys IMEP5基因,通过BLAST进行序列比对分析,利用在线软件对蛋白结构进行预测。成功克隆到裂解酶Lys IMEP5基因,测序结果通过DNAMAN比对与原序列完全匹配,无任何基因突变,同源性分析显示,与已报道的金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶相似性最高为83.1%;裂解酶Lys IMEP5基因序列全长1371 bp,共编码456个氨基酸,为亲水性蛋白,分子质量为51.717 k Da,理论等电点为9.70;Lys IMEP5同时存在CHAP片段和Amidase-3片段;该蛋白无跨膜区,无信号肽,以无规则卷曲为主。从奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌裂解性噬菌体中成功克隆出Lys IMEP5基因,通过对该蛋白的结构预测分析为后续克隆表达及开发新型绿色抑菌剂奠定了基础。 相似文献
11.
从临床分离得到17株金黄色葡萄球菌,经鉴定后发现其中8株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。前期研究发现的裂解酶LysGH15经表达并纯化后,对17株菌株都表现出高效的杀菌作用,而与耐药性无关。进一步试验发现150mg/L的LysGH15不仅能有效抑制所有菌株形成生物被膜,而且对已经形成的生物被膜也有极强的破坏作用(P0.01)。结果表明,LysGH15在控制金黄色葡萄球菌持续性感染及解决耐药性方面具有很大的应用潜力。 相似文献
12.
为了解上海地区动物源性金黄色葡萄球菌的耐药情况,采用微量肉汤稀释法对1999年、2011—2018年(2016年除外)分离鉴定保存的78株金黄色葡萄球菌进行19种药物的药敏试验,采用头孢西丁纸片法进行耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)菌株筛选,采用聚合酶链反应(PCR)进行mecA基因检测。结果:金黄色葡萄球菌除万古霉素、利奈唑胺、夫西地酸、莫匹罗星外,均产生耐药性,多重耐药现象严重,耐药谱广;MRSA检出率为51.3%,发病样品、健康畜禽的粪便样品、环境样品中均检测到MRSA;mecA基因检出率为51.3%,MRSA中mecA基因携带率显著高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(Methicillin-sensitive staphylococcus aureus,MSSA)。 相似文献
13.
《中国动物传染病学报》2017,(4)
为了了解引起奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌分离株的耐药性及其分子流行病学特征,本研究采用纸片扩散法检测临床分离的71株金黄色葡萄球菌的耐药特性,并对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)进行判定;应用多重PCR方法对MRSA进行SCCmec分型。结果显示:在新疆地区71株金黄色葡萄球菌临床分离株中共检出13株MRSA,检出率为18.3%;金黄色葡萄球菌对呋喃妥因、利福平100%敏感,MRSA对头孢类、氟喹诺酮类和大环内酯类抗菌药物的耐药率明显高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(methicillin sensitive staphylococcus aureus,MSSA);MRSA的SCCmec基因型共以SCCmecⅠ和SCCmecⅣa型为主,均占76.9%,另外,1株MRSA仅有1种SCCmecⅢ型,1株MRSA有SCCmecⅠ、SCCmecⅢ和SCCmecⅣa型。本研究结果表明,MRSA耐药性多样,新疆地区MRSA主要流行株为SCCmecⅠ和SCCmecⅣa型。 相似文献
14.
金黄色葡萄球菌是引起奶牛乳房炎的最主要病原菌之一。然而,在治疗奶牛乳房炎的过程中由于抗生素滥用,造成乳汁中药物残留及耐药菌株增多。近年来,尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检出率逐年呈上升趋势,成为危害人畜健康的重要致病菌之一。同时也给奶牛乳房炎的治疗带来巨大的挑战。论文对牛源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测方法、流行病学、致病性及致病因子、耐药机制、预防与治疗措施及未来发展前景及展望进行了综述,希望为深入研究MRSA,减少其耐药性,研制有效的药物和疫苗起到参考作用。 相似文献
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牛源金黄色葡萄球菌耐药性及甲氧西林敏感和耐甲氧西林菌株演化相关性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
为研究牛源金黄色葡萄球菌耐药性以及甲氧西林敏感(MSSA)和耐甲氧西林(MRSA)菌携带的耐药基因、MRSA的SCCmec基因型,揭示牛源MSSA与MRSA之间的演化相关性和MRSA起源和扩散途径,对2009年以来中国五省区不同牛场分离的54株金黄色葡萄球菌进行了药敏试验.对确定的12株MSSA和MRSA进行了耐药基因检测、SCCmec基因型分型和多位点测序分型(MLST)研究.54株菌的药敏结果显示,对红霉素、克林霉素、青霉素、复方新诺明、多西环素、四环素、氯霉素、环丙沙星、庆大霉素的耐药菌株分别为88.8％、81.5％、88.9％、90.7％、92.6％、94.4％、79.6％、63.0％和70.4％.其中,对所测10种抗生素完全耐药的占5.6％,对5种以上耐药的占85.2％,6株(11.1％)对头孢西丁耐药.12株MSSA和MRSA菌株的药敏和耐药基因检测结果显示,3株MRSA对10种抗生素耐药;6株MSSA菌中,新疆分离株对2～4种抗生素耐药,其它省区分离株对7种以上抗菌素耐药.12株MSSA和MRSA菌均检出ermC和tetK基因;6株MRSA中均检出aac(6′)/aph(2")基因,5株检出tetM基因,4株检出aph(3′)-Ⅲ基因;6株MSSA均未检出aac(6′)/aph(2")和aph(3′)-Ⅲ,4株检出tetM基因.用多重PCR对MRSA进行SCCmec基因分型显示,5株为SCCmec Ⅳ,1株未能分型;12株菌的MLST分型发现,所有菌株分为ST50、ST965、ST6、ST97和ST9序列型.经eBURST v3分析,MRSA分布在CC7、CC4、CC21和CC9四个克隆复合群(CCs)中,MSSA分布在CC7和CC32克隆复合群中.以上研究表明,我国牛源金黄色葡萄球菌不仅耐药严重,且表现多重耐药;MRSA基因型以SCCmec Ⅳ为主.对牛源SCCmec Ⅳ型MRSA与同型人源MRSA的耐药谱分析发现有较大差异,推测位于质粒或转座子上的耐药基因可能插入到金黄色葡萄球菌基因组中,导致耐药基因在不同菌株间传播.根据ST97中有MSSA和MRSA以及牛源MRSA与人源MRSA的MLST比较,确认我国牛源MRSA是在抗生素的选择压力下由来源于不同克隆复合群的MSSA获得SCCmec Ⅳ而产生,推测同一克隆株MRSA的扩散并不是MRSA大范围出现的主要原因. 相似文献
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抗菌肽NZ2114对奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌细胞膜、基因组和耐药性的影响 总被引：3，自引：3，他引：0
本试验以真菌防御素Plectasin衍生肽NZ2114和奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌为研究对象,旨在阐明抗菌肽NZ2114对金黄色葡萄球菌的体外抗菌机制及其阻遏金黄色葡萄球菌耐药性的效果。通过16S rRNA基因鉴定对55份乳房炎奶样中的病原菌进行分离鉴定,采用纸片扩散法检测其耐药性,通过微量稀释法测定抗菌肽NZ2114对金黄色葡萄球菌的抑菌活性,借助流式细胞术和扫描电镜观察抗菌肽NZ2114对金黄色葡萄球菌细胞膜完整性及细胞形态的影响,通过凝胶阻滞和圆二色谱分析抗菌肽NZ2114对金黄色葡萄球菌基因组DNA的影响,将抗菌肽NZ2114与金黄色葡萄球菌共同孵育以研究抗菌肽NZ2114对金黄色葡萄球菌耐药性的影响,通过PCR进一步分析抗菌肽NZ2114对金黄色葡萄球菌携带的耐药基因的影响。结果表明,共获得10株金黄色葡萄球菌,分离菌对青霉素等9种抗菌药具有耐药性,且50%为多重耐药。抗菌肽NZ2114对10株金黄色葡萄球菌具有强抑菌活性,最小抑菌浓度(MIC)为0.5～1.0μg/mL。抗菌肽NZ2114可导致金黄色葡萄球菌S7细胞皱缩、细胞内容物泄漏,甚至细胞裂解,碘化丙啶(PI)细胞膜穿透率达5%,且抗菌肽NZ2114可与金黄色葡萄球菌S7基因组DNA结合并改变其DNA结构。金黄色葡萄球菌与1/4×MIC抗菌肽NZ2114孵育12 h后发现,除对阿莫西林和磺胺异噁唑的耐药率没有降低外,对其他抗菌药的耐药率均有不同程度的降低(10%～40%),且抗菌肽NZ2114对β-内酰胺类耐药基因(blaZ)及杆菌肽类耐药基因(braRS)的消除率分别达28.57%(2/7)和22.22%(2/9)。上述结果证明,抗菌肽NZ2114对耐药金黄色葡萄球菌具有体外强抑菌活性,其干扰耐药金黄色葡萄球菌细胞膜并结合胞内DNA的作用机制为其低耐药杀菌机制奠定了细胞学基础。同时抗菌肽NZ2114对耐药菌株的耐药性及相关耐药基因均有一定消除作用。由此可见,抗菌肽NZ2114是一种极具前景的治疗金黄色葡萄球菌引起的奶牛乳房炎的抗生素替代品。 相似文献
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旨在揭示金黄色葡萄球菌针对β-内酰胺类抗生素可能存在细胞壁增厚的耐药机制。2016-2018年间，采集宁夏地区部分奶牛养殖场临床及亚临床型乳腺炎的乳样，通过显色培养基鉴别、镜检及PCR方法，分离鉴定牛乳源金黄色葡萄球菌；利用微量肉汤稀释法测定细菌对14种抗菌药物的耐药性，了解本地区金黄色葡萄球菌的耐药率及多重耐药情况；通过qRT-PCR方法检测细胞壁增厚相关的pbpB、murG、glmU、atlR基因转录丰度，并结合透射电镜进行形态观察，以确定增厚及发生原因。结果显示，分离鉴定出261株牛乳源金黄色葡萄球菌，其中包括9株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA）。药敏试验结果显示，金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类抗生素具有较高的耐药率，其中氨苄西林为79.69%，青霉素为78.54%。多重耐药情况是以3、7和8重耐药的菌株居多；其中1株耐药种数达14种之多。qRT-PCR结果表明，4种相关基因的转录丰度均极显著上调（P<0.001或P<0.01）。透射电镜观察发现，甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌（methicillin sensitive Staphylococcus aureus，MSSA）JY21菌株的细胞壁在64和128 μg·mL-1的青霉素浓度下，较对照组均极显著增厚（P<0.001），并可见细胞壁表面粗糙，有结节状凸起；但药物浓度从64 μg·mL-1升高至128 μg·mL-1细胞壁不再显著增厚（P>0.05）。MRSA WLD10菌株细胞壁未出现明显增厚（P>0.05）。综上所述，本地区牛乳源金黄色葡萄球菌针对β-内酰胺类抗生素，存在细胞壁增厚的耐药机制；增厚的原因主要是肽聚糖的过度合成及细胞自溶的减少。与MSSA JY21菌株相比，细胞壁增厚并非MRSA WLD10重要的耐药机制。 相似文献
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了解胶东地区猪源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的临床感染现状及耐药性,为临床合理使用抗生素类药物提供数据依据。利用多重PCR方法,扩增葡萄球菌属16SrRNA基因,金黄色葡萄球菌属nuc基因以及耐药基因mecA;血浆凝固酶试验对MRSA进行鉴定;微量肉汤稀释法对MRSA的耐药表型进行检测;运用SPSS20.0软件对试验数据进行统计分析。结果显示:共分离出508株金黄色葡萄球菌,其中MRSA 122株,占24.02%;甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)386株,占75.98%。所有样品均来自健康猪只的鼻腔拭子和体表拭子。MRSA对AM和P的耐药率为100%;对CLI、CEF、TIL、CZ、EM、A/C和SXT的耐药率均在80%以上;对OFL、ENR和SF的耐药率较低,分别为13.11%,5.74%和4.10%。MSSA对EM、AM和P的耐药率均在90%以上;对CLI、CEF、TIL、CZ和SXT的耐药率均在50%以上;对ENR、OFL和A/C的耐药率分别为25.65%,47.15%,41.71%;对SF的耐药率最低为2.33%。MRSA与MSSA未检出耐VAN的菌株。MRSA的多重耐药率为100%,多集中在7耐及以上;MSSA多重耐药率为99.22%,多集中在3~11耐。结果表明,MRSA的检出率较高,MRSA的耐药率及多重耐药率高于MSSA,且均处于较高水平,应给予重视,临床应依据药敏试验结果合理选择抗菌类药物。 相似文献