共查询到20条相似文献，搜索用时 171 毫秒
1.
2.
用PCR技术鉴定犬细小病毒弱毒疫苗株 总被引：3，自引：0，他引：3
通过分析比较犬细小病毒(CPV)弱毒疫苗株和强毒株的基因序列，设计了3条引物并组成2对引物，对弱毒疫苗株和强毒株进行了半嵌套式PCR扩增。第1轮PCR扩增的结果为CPV弱毒疫苗株和强毒株有相同的目的片段(585bp)；第2轮PCR扩增的结果为CPV强毒株有375bp目的片段，而CPV弱毒疫苗株没有375bp目的片段。对PCR产物进行电泳和酶切分析，结果证明PCR产物片段大小和酶切位点与设计的产物完全一致。特异性和敏感性测定结果表明，该方法是高度特异和敏感的，可用于弱毒疫苗毒株与强毒株的鉴定。 相似文献
3.
4.
聚合酶链反应检测鉴别鸡毒霉形体强毒株和弱毒疫苗株的研究 总被引：3，自引：0，他引：3
根据鸡毒霉形体(MG)强毒株和弱毒疫苗株基因组结构特点，分别设计合成2对引物XZ1、XZ2和XZ45、XZ16，建立了可检测MG强、弱毒株的PCR方法。以引物XZ1、XZ2对MG强毒株和弱毒株进行的PCR，均可扩增出732bp的特异性片段；而以另1对引物XZ45、XZ46对MG弱毒株进行PCR，可扩增出524bp的特异性片段，但对鸡毒霉形体标准强毒株和野毒株的PCR，则扩增不出任何条带。特异性试验表明，这2对引物对其他种类鸡毒霉形体及其他对照禽病病原核酸模板的扩增均为阴性。敏感性试验结果显示，2对引物PCR均能检出100fg的MGDNA。研究结果表明，通过上述2对引物的2次PCR扩增，在数小时内即可鉴别出MG毒株是强毒株还是弱毒疫苗株。 相似文献
5.
禽新城疫快速鉴别诊断方法的建立 总被引：14，自引：0，他引：14
依据新城疫病毒（NDV）融合蛋白（F）基因裂解位点的核苷酸序列与其毒力的相关规律，分别设计合成了四条寡核苷酸引物，建立了一个可迅速检测不同禽源新城疫毒株并可鉴定强、弱毒株的逆转录酶－－聚合酶链式反应（RT－PCR）技术，对强毒株可扩增出362bp的通用片段和254bp的强毒株特异性片段；弱毒株则可扩增出362bp的通用片段和123bp的弱毒株特异性片段。本方法只需一个RT－PCR反应，整个过程在8小时内完成，既可检测感染鸡胚尿囊液，也可从病料直接检测，应用该方法对源于各种禽类的36份ND可疑病粒样品进行检测试验，结果阳性检出率为73.5%，与常规方法检测的结果相一致。 相似文献
6.
多重聚合酶链反应快速检测鉴别鸡毒支原体强毒株和弱毒疫苗株的研究 总被引：8，自引：0，他引：8
根据鸡毒支原体强毒株和弱毒疫苗株基因组的结构特点，设计合成了二对引物XZ1，XZ2和XZ45、XZ46，建立了一种同时检测鉴别MG野毒株和弱毒疫苗株的多重PCR技术。试验结果表明，用这两对引物对MG强毒株和弱毒疫苗侏进行多重PCR，强毒株只扩增出732bp一条带，而弱毒疫苗株则可同时扩增出732bp、524bp二条带，而对其他种类鸡支原体和其它禽病病原的扩增不出现任何条带，结果均为阴性；敏感性测定结果表明，该多重PCR最低能检出1Pg的MG强毒株和弱毒疫苗株的DNA模板。 相似文献
7.
《畜牧与兽医》2017,(2):83-88
为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)野毒株及弱毒疫苗株快速鉴别检测方法,根据Gen Bank中公布的PEDV野毒株及弱毒疫苗株的ORF3基因序列,在缺失区的两端设计合成1对特异性扩增引物,用以特异性的扩增PEDV ORF3基因片段,根据目的片段大小判断PEDV的毒株类型;通过退火温度等反应条件优化,建立了区分PEDV野毒株和弱毒疫苗株的RT-PCR鉴别检测方法。结果显示:所建立的RT-PCR鉴别检测方法能特异性区分PEDV野毒株和弱毒疫苗株;PEDV野毒株扩增出234 bp目的片段,PEDV弱毒疫苗株扩增出185 bp目的片段;与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、A群猪轮状病毒(PRo VA)、猪嵴病毒(PKV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪乙型脑炎病毒(JEV)及猪细小病毒(PPV)均无交叉反应;敏感性试验显示,该方法能检测到病毒滴度为1.3×10~3TCID_(50)/mL。利用该方法对采集自广西部分地区93份临床腹泻样品进行检测,临床腹泻样品中PEDV野毒株阳性率为61.29%(57/93),弱毒株阳性率为5.38%(5/93)。结果表明:该RT-PCR鉴别检测方法特异性强、灵敏度高、操作简便,能快速、准确地区分PEDV自然感染野毒株和弱毒疫苗毒株,为猪流行性腹泻的快速诊断及病原分子鉴别检测研究提供了可供借鉴的技术手段。 相似文献
8.
新型反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)鉴别猪瘟强毒和弱毒疫苗方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
对GenBank中登录的25株猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株基因组全序列进行比较分析,在其高度保守区设计1对通用引物,扩增片段为609bp,并在该对引物扩增区域内设计针对疫苗弱毒的特异引物,扩增片段为237bp,建立一种能够区分猪瘟病毒强毒和疫苗弱毒的敏感、特异、重复性好的反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)鉴别诊断方法。该方法能将我国大陆地区流行的不同基因亚群的猪瘟病毒强毒与疫苗弱毒完全区分开来,且不与牛病毒性腹泻病毒及其他猪源病毒发生非特异反应。应用本试验建立的反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)方法可以及早对猪瘟作出准确诊断,并可将强毒感染猪迅速从弱毒疫苗免疫猪群中筛选出来,减少了未感染免疫猪被误杀的可能性。 相似文献
9.
新城疫病毒（青岛株）F蛋白基因的克隆和序列分析 总被引：7，自引：1，他引：6
参考新城疫病毒（NDV）长春株的F基因序列设计了1以特异性引物，应用RT－PCR对NDV青岛株（野毒）的F基因进行了扩增，扩增产物克隆后测序，扩出的F基因核苷酸长度为792bp，编码261个氨基酸，包括完整的F2片段和部分F1片段，裂解位点区（112－117aa）氨基酸序列为Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Phe，与国外发表的强毒株序列相符，正明青岛株为强毒株，根据该基因推导的所基酸序列，与国内外发表的NDVF蛋白氨基酸序列相比，同源性为88．1％－94．3％。 相似文献
10.
《中国动物传染病学报》2017,(5)
根据GenBank上公开的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基因序列,针对M基因差异位点设计了3对引物,通过优化反应体系与条件,建立了能够区分NDV中强毒株与弱毒株的RT-nPCR检测方法。特异性试验显示,NDV中强毒株扩增出543、375 bp两个条带,弱毒株仅出现375 bp一个条带,其他常见禽病毒为阴性。灵敏度试验结果表明,该方法检测c DNA含量极限为6.15×10~(-4)ng/μL。临床样品检测发现鸡群NDV弱毒带毒率高,中强毒株带毒率较低。结果表明,本研究成功建立了一种基于M基因的快速鉴别诊断NDV中强毒株与弱毒株的RT-nPCR方法。 相似文献
11.
禽出败即禽霍乱(fowl cholera,FC),又称禽巴氏杆菌病、禽出血性败血症,是由多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)引起的家禽和野禽的急性败血性传染病。通常呈急性败血性经过和剧烈下痢,死亡率高。近年来在清新县的高田、清城区的东城、源潭、石角等地养鸡场陆续发生禽出败,用药治疗可以控制鸡的死亡,停药2～3 d后鸡 相似文献
12.
13.
李希林 《国外畜牧学(猪与禽)》2004,24(2):38-39
猪繁殖和呼吸综合征(PRRS)病毒不断地危害着全世界的养猪业。该病毒因其自身的生物学特点,具有发生广泛遗传变异(突变和重组)而产生新毒株的能力。另一个问题是,尽管广泛采取了将该病毒抵挡在猪场之外的措施,但该病毒天生具有突破当前生物安全措施而感染猪场的能力。 相似文献
14.
15.
16.
17.
Necrotic enteritis-producing strains of Clostridium perfringens displace non-necrotic enteritis strains from the gut of chicks 总被引：1，自引：0，他引：1
We inoculated broiler chicks with mixtures of Clostridium perfringens strains to investigate the single strain dominance observed in natural cases of necrotic enteritis (NE) [Nauerby, B., Pedersen, K., Madsen, M., 2003. Analysis by pulsed-field gel electrophoresis of the genetic diversity among Clostridium perfringens isolates from chickens. Vet. Microbiol. 94, 257-266]. Pre-inoculation bacteriologic culture of chick intestines yielded up to six pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) types of C. perfringens. Birds developed typical NE lesions in response to administration (2x per day for 4 days) of a combined inoculum comprising one NE strain (JGS4143, PFGE pattern 8) and four non-NE strains (from piglet necrotizing enteritis, chicken normal flora, human gas gangrene, and bovine neonatal enteritis). After inoculation commenced, only the NE strain was recovered through the first post-inoculation day, in spite of intense efforts to recover pre-challenge flora strains and the other challenge strains. Thereafter, pre-inoculation and previously undetected PFGE types were found, and JGS4143 became undetectable. Birds inoculated simultaneously with five NE strains (from disease in chickens or turkeys, and including JGS4143) also developed lesions, but again only JGS4143 was recovered through the 1st day post-challenge. At that time, birds began to be repopulated with pre-challenge PFGE types. Two NE strains (JGS4143 and JGS4064) produced bacteriocins, which inhibited each other and normal flora strains (n=17), while normal flora strains inhibited neither NE strains nor each other. Thus, it appears that naturally occurring dominance of the gut by NE strains can be reproduced experimentally. Bacteriocins directed against normal flora could possibly provide the necessary advantage, although inhibition of one NE strain by another suggests that other factors may be partially or completely responsible for the dominance. 相似文献
18.
《中国兽医学报》2019,(9):1710-1714
分析比对了GenBank中已公布的23株犬瘟热病毒全基因组序列,针对保守区设计了11对特异性通用引物,用于扩增犬瘟热病毒野毒株和疫苗株全基因组。通过优化11对引物的工作浓度及退火温度等条件,对保存的3株疫苗毒CDV3株、OR12株、CDV/R-20/8株和2株野毒HBF-1株和SD(14)07株进行了全基因组扩增。取5μL扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳,结果显示11对通用引物对以上5株犬瘟热病毒扩增后,均获得11个特异性目的片段,条带大小与预期相符。选取疫苗毒OR12株和野毒HBF-1株的进行全基因组序列测定,与GenBank中已公布的序列进行比对,同源性均大于99.0%,证实这11对特异性通用引物能够实现对犬瘟热病毒野毒和弱毒全基因组的准确扩增,并获得准确的全基因组序列。 相似文献
19.
20.
为建立一种能鉴别鸡毒支原体(MG)强、弱毒株的快速检测方法,本研究根据GenBank中MG强毒株和弱毒株的基因组序列,选取特异性保守区序列设计了2对引物和2奈探针,分别用于强弱毒株和弱毒株的检测,优化反应条件,建立了能区分MG强、弱毒株的荧光定量PCR检测方法.该法特异性强,对鸡常见呼吸道病原体的反应均为阴性;灵敏度高,可检测到100拷贝/μL的模板;稳定性好,批内和批间试验Ct值的变异系数小.本研究建立的MG强、弱毒鉴别检测方法简便、快捷,为该病的防控与净化提供新方法、新思路. 相似文献