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1.
皖南黄肉种鸡种蛋中禽白血病病毒的感染状态检测 总被引：2，自引：0，他引：2
本研究首次通过检测种蛋中禽白血病病毒(ALV)评价了皖南黄父母代肉种鸡的ALV感染状态.收集该鸡群的120枚鸡蛋,取40枚鸡蛋孵化至9～11 d后分别制备CEF,培养10 d,取细胞上清用ELISA试剂盒检测ALV p27抗原.另取80枚鸡蛋卵白直接检测p27抗原,同时分别将80枚鸡蛋卵白接种CEF(DF1),培养10 d后取细胞上清检测p27抗原.比较p27阳性检出率的结果表明,受精蛋孵化9～11 d后制备CEF,再培养10 d的细胞上清检出率(10/36)高于直接检测卵白(17/80)与卵白接种CEF(DF1)的细胞上清(7/80).将经DF1培养后p27抗原阳性样品,用针对ALV-J的单抗JE9做IFA,ALV-J的阳性率为6/7.检测该80枚鸡蛋的卵黄抗体,ALV-J、ALV-AB的抗体阳性率分别为18/80、1/80.结果表明,该皖南黄父母代肉种鸡群存在的外源性ALV感染主要为ALV-J.该研究为ALV的净化提供了可行性检测方法. 相似文献
2.
利用鸡胚成纤维细胞培养禽脑脊髓炎病毒的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
利用鸡胚成纤维细胞 (CEF)培养禽脑脊髓炎病毒 (AEV) ,经过六次盲传发现 :AEV在 CEF上无细胞病变 (CPE) ,但利用 CEF细胞上清接种 SPF鸡胚 ,可产生不同程度的 AE鸡胚病变。分别取不同时间的感染细胞上清 ,测定 AEV浓度 ,结合培养条件 ,进而确定 AEV培养的最佳时机。结果表明 :以 AEV在 CEF上培养 7天最好 ,病毒滴度可达 10 2 .8EID50 / 0 .2 ml。将经 CEF培养的 AEV差速离心 (浓缩约 5 0 0倍 ) ,接种 SPF鸡胚 ,可产生典型的鸡胚病变 ,其滴度为 8× 10 5.0 EID50 / 0 .2 m l。通过 Cs Cl密度梯度离心提纯病毒 ,在电镜下观察到了大小基本一致的病毒粒子 ,病毒直径约为 2 5 nm。利用 AEV感染的 CEF或通过“细胞飞片”制备荧光片 ,建立了间接免疫荧光快速检验 CEF是否感染 AEV的方法。 相似文献
3.
将鸡传染性法氏囊病病毒的鸡胚组织毒或法氏囊组织毒直接在鸡胚成纤维细胞(CEF)上盲传3～13代后。能产生特征性细胞病变效应(CPE)。病毒在含65℃灭能30分钟的犊牛血清的细胞生长液制备的CEF上传代,比在含有56℃灭能的犊牛血清的生长液制备的CEF上传代能早3～5代出现CPE,而得到适应;鸡胚高代毒比鸡胚低代毒更易适应CEF;法氏囊组织毒和鸡胚低代毒对适应CEF的进程没有显著差异。 相似文献
4.
《中国兽医杂志》2015,(9)
为比较不同方法在测定J亚群禽白血病病毒(ALV-J)组织细胞半数感染量(TCID50)上的差异,将ALV-J传染性克隆r NX0101株同一病毒保存液以10倍梯度稀释后按照常规方法分别接种已长满DF-1细胞和鸡胚成纤维细胞(CEF)的96孔板,维持7 d后取所有细胞培养上清以ALV-p27抗原检测试剂盒检测p27抗原,细胞固定后以ALV-J特异性单克隆抗体JE9进行间接免疫荧光(IFA)检测,确定病毒感染孔后按照Reed-Muench法分别计算两种方法在两种细胞上的TCID50。结果显示,ELISA法测定该病毒在DF-1细胞和CEF细胞上的TCID50分别为10-5.4TCID50/0.1 m L和10-4.666TCID50/0.1 m L,而IFA法测定该病毒在DF-1和CEF细胞上的TCID50分别为10-6.333TCID50/0.1 m L和10-5.2TCID50/0.1 m L。结果表明,IFA比ELISA具有更高的灵敏度,并且ALV-J在DF-1细胞上复制能力比CEF更强,在DF-1细胞上测定ALV-J的TCID50更为科学。 相似文献
5.
为评估蛋清样品在禽白血病病毒(ALV)分离中的作用,从广东某地方鸡种群采集种蛋1673个,经ALV p27抗原ELISA检测,将阳性蛋清分为5个不同S/P值区间(A≥2.0,1.5≤B2.0,1.0≤C1.5,0.5≤D1.0,0.2≤E0.5)并设立对照区间(F0.2),分别同时接种DF-1细胞和CEF细胞进行病毒分离,通过PCR方法对其中20份DF-1细胞培养物p27抗原阳性样品进行亚群鉴定。从送检种蛋蛋清共检出ALVp27阳性样品107份,阳性率为6.4%(107/1673);不同S/P值区间蛋清病毒分离情况分别为:A区间CEF和DF-1细胞病毒分离率均为100%(27/27);B区间为80%(16/20,CEF)和75%(15/20,DF-1细胞);C区间为55.6%(10/18,CEF)和33.3%(6/18,DF-1细胞);D区间为36.4%(8/22,CEF)和9.1%(2/22,DF-1细胞);E区间为5%(1/20,CEF)和0%(0/20,DF-1细胞);对照组F区间为8.3%(1/12,CEF)和0%(0/12,DF-1细胞)。PCR结果显示,20份样品中均有ALV-J感染,其中6份为ALV AJ共感染。结果表明从蛋清样品可以分离出外源性和内源性ALV;从ALVp27抗原ELISA高S/P值的蛋清易分离出外源性ALV;低S/P值的阳性蛋清样品很可能是由内源性ALV引起,这给临床上禽白血病的净化检测造成一定的"误诊";该地方鸡种群不仅存在至少两个亚群外源性ALV,也有内源性ALV。 相似文献
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鸡传染性支气管炎病毒血凝抑制试验抗原的研制 总被引：1，自引：0，他引：1
为应用血凝抑制(HI)试验检验鸡传染性支气管炎疫苗免疫效力(血清、卵黄抗体水平),建立了鸡传染性支气管炎病毒HI试验抗原的制备方法。该方法是通过选取抗原谱最广的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M41株,经SPF鸡胚增殖培养36h后无菌收取鸡胚尿囊液,4℃、12 000r/min离心10min,上清用聚乙二醇(PEG)20000浓缩100倍;兔源A型产气荚膜梭菌中国标准株(C57-1株)37℃增殖培养18h,4℃、12 000r/min离心10min取上清,经PEG 20000透析袋浓缩5倍后通过0.20μm滤膜过滤除菌,然后将IBV液和A型产气荚膜梭菌菌液(含α毒素)二者按一定比例混合后经37℃恒温振荡感作2h,4℃经48h后制成。经大量试验表明,制备的IBV HI试验抗原效价高、稳定性好,可替代进口抗原应用于鸡群IBV疫苗免疫后血清抗体及卵黄抗体的HI效价检测。 相似文献
8.
《中国家禽》2021,(4)
为了评估DF-1细胞悬浮培养增殖的IBDV BJQ902抗原液的病毒滴度和基于此抗原制备的鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊病三联灭活疫苗的物理性状和免疫效力,将IBDV BJQ902株病毒接种悬浮培养的DF-1细胞制备IBDV抗原液,测定抗原液病毒滴度,将此抗原液与常规方法制备的ND La Sota株和IB M41株抗原液,进行适当浓缩、灭活制备ND-IB-IBD三联灭活疫苗测定其物理性状,用ND-IB-IBD三联灭活疫苗以不同剂量免疫试验鸡,测定其免疫效果。结果显示:IBDV BJQ902株病毒接种微载体悬浮的DF-1细胞后,收获的抗原液毒滴度可达10~(7.7~8.5)TCID_(50)/0.1 m L;制备的ND-IB-IBD三联苗性状稳定;以0.1 m L/只的剂量免疫鸡只即可获得良好保护。研究结果为新型ND-IB-IBD三联疫苗的研制提供理论依据。 相似文献
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10.
天然复方药物在CEF上的安全浓度筛选及其抗IBDV感染的试验研究 总被引：3，自引：0，他引：3
采用体外组织培养方法 ,测试了由黄芪为主药组成的天然复方药物方 1、方 2、方 3在鸡胚成纤维细胞 (CEF)上的安全浓度 ,及其在以下三种不同加药方式中抗 IBDV感染 CEF单层的能力 ,即 :先加药物后加病毒、先加病毒后加药物、药物病毒同时加入。结果 :单味黄芪组成的方 2在 CEF单层上的安全浓度为 2 5 mg/ ml,对 CEF基本没有毒性 ;方 1、方 3二者的安全浓度一致 ,为781.2 5μg/ ml,约为方 2的 1/ 30 ,表明方 1、方 3对 CEF的毒性明显较方 2大。在三种不同的加药方式下 ,复方药物所表现出来的抗 IBDV感染 CEF单层的能力并不相同 :在先加药物后加病毒及药物病毒同时加入两种方式下 ,三个方剂均表现出一定的抗 IBDV感染 CEF单层的能力 ;而先加病毒后加药物时 ,无论哪个方剂均未表现出抗 IBDV感染的能力。提示它们有一定的抗 IBDV感染作用 ,但与其作用方式有关 相似文献
11.
本研究旨在探究用DF1细胞替代DF1细胞上清对外源性禽白血病病毒(ALV)进行快速检测.采集ALV p27抗原阳性的地方品种百日鸡的抗凝血22份,阴性鸡的抗凝血2份,离心取白细胞接种DF1细胞培养,重复9块24孔细胞培养板.每隔24 h取1块24孔板,分别收集细胞上清与DF1细胞于-20℃冻存,直至第9天,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测所有细胞上清与DF1细胞中的ALV p27抗原,并采用SPSS Statistics 17.0软件比较分析细胞上清与DF1细胞中ALV p27抗原S/P值的差异性与相关性.结果显示:培养8d的细胞上清中可检测到所有的15份阳性样品,而培养4d即可在DF1细胞中检出所有阳性样品(15份);15份外源性ALV样品在细胞上清中初始检出p27抗原阳性时,同一培养时间的DF1细胞中的S/P值均明显高于细胞上清中的S/P值,差异极显著(P＜0.01);培养4～5 d的DF1细胞与第9天收集的细胞上清中p27抗原S/P值相关性最高,分别为0.946、0.923.本研究显示,检测培养4～5 d的DF1细胞中的ALV p27抗原与经典方法所要求的检测培养9d的细胞上清中的ALV p27抗原可达到相同的效果. 相似文献
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本研究合成并鉴定了黄曲霉毒素M1人工抗原,通过动物免疫制备出敏感性高、特异性好的鼠源黄曲霉毒素M1多克隆抗血清。采用琥珀酸酐改造黄曲霉毒素M1,并将其改造物按两种方法(DCC和EDC)分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联,合成免疫抗原AFM1-BSA和检测抗原AFM1-OVA,经过薄层色谱、紫外扫描和凝胶电泳鉴定后,免疫BALB/c小鼠,共免疫3次,每次间隔3周,最后1次免疫10d后,断尾采血,制备多抗血清。经过测定,免疫的3只小鼠效价均达到了1:104以上,2号小鼠多抗血清的敏感性最好,半数抑制浓度IC50(50%inhibitive concentration,IC50)为37.61ng/m L,且具有良好的特异性。本研究成功合成了黄曲霉毒素M1人工抗原和多克隆抗体血清,为黄曲霉毒素M1单克隆抗体制备及其免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。 相似文献
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《中国奶牛》2015,(Z1)
本研究合成并鉴定了黄曲霉毒素M1人工抗原,通过动物免疫制备出敏感性高、特异性好的鼠源黄曲霉毒素M1多克隆抗血清。采用琥珀酸酐改造黄曲霉毒素M1,并将其改造物按两种方法(DCC和EDC)分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联,合成免疫抗原AFM1-BSA和检测抗原AFM1-OVA,经过薄层色谱、紫外扫描和凝胶电泳鉴定后,免疫BALB/c小鼠,共免疫3次,每次间隔3周,最后1次免疫10d后,断尾采血,制备多抗血清。经过测定,免疫的3只小鼠效价均达到了1:104以上,2号小鼠多抗血清的敏感性最好,半数抑制浓度IC50(50%inhibitive concentration,IC50)为37.61ng/m L,且具有良好的特异性。本研究成功合成了黄曲霉毒素M1人工抗原和多克隆抗体血清,为黄曲霉毒素M1单克隆抗体制备及其免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。 相似文献
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致病性鹅源新城疫病毒对鸡胚成纤维细胞的致病变特性 总被引：3，自引：0，他引：3
选择4株鹅源新城疫病毒(NDV)接种鸡胚成纤维细胞(CEF)培养物,研究鹅源NDV对CEF的致病变特性,并与鸡源及鸽源NDV进行比较。结果显示,鹅源NDV接种次代CEF后24h开始有病变产生,表现为少数细胞变圆、皱缩,折光性增强,随后病变缓慢进展,感染细胞形成大量合胞体,到84～144h时,CEF单层彻底破坏;鸡源和鸽源MDV接种CEF后也在24h左右开始有病变产生,最初病变与鹅源毒株导致的病变相似,但病变进展迅速,细胞显著裂解并导致单层的严重破坏,60～84h时细胞单层即彻底破坏。对病毒接种后不同时间段培养物上清血凝(HA)效价的测定结果表明,鹅源NDV接种后84～120h培养物上清HA效价达到高峰,为5～8 log2,鸡源和鸽源NDV接种后60～84h HA效价即可达到高峰,但其最高效价只有4 log2。 相似文献
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《中国兽医杂志》2017,(7)
以新城疫病毒(NDV)感染鸡胚和鸡胚成纤维细胞,探索玉屏风多糖(Yupingfeng polysaccharides YPF-P)及其含药血清的抗病毒效果。SPF兔采用500 mg/kg体重YPF-P灌服给药,于第1、3、5、7天采集全血,制备不同浓度含药血清;培养SPF鸡成纤维细胞(CEF),分别加入不同浓度的YPF-P及其含药血清,进行细胞毒性试验;采用先加多糖后加病毒、先加病毒后加多糖、多糖和病毒感作后同时加入的3种给药方式,观察YPF-P及其含药血清对病毒的阻断、抑制和直接杀灭作用。结果与正常对照组相比,不同浓度YPF-P(0.625、1.25、2.5、5、10 mg/m L)和7 d的YPF-P含药血清的CEF细胞活性均显著增强(P<0.05或P<0.01)。CEF培养24 h后,YPF-P抑制病毒作用明显,与NDV对照组相比差异极显著(P<0.01);3种给药方式与NDV对照组相比,含药血清组细胞活性均极显著升高(P<0.01)。表明YPF-P及其含药血清均对CEF无毒副作用,且可显著增强细胞活性;YPF-P及其含药血清有较好的抑制病毒毒性的作用。 相似文献
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《中国家禽》2020,(5)
为研究新城疫病毒(NDV)La Sota株和鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M41株在低免疫鸡胚中进行同胚接种培养的可行性,通过将不同稀释倍数的La Sota株和M41株接种同一低免疫鸡胚,分别测定收获尿囊液La Sota株和M41株含量,确定最佳的稀释倍数以及适宜的培养温度和培养时间。结果显示:La Sota株和M41株以10 000∶5 000的比例稀释,培养96 h病毒含量和收获量最佳,La Sota株含量可达到109.17EID50/0.1 m L,HA效价为1∶1 024,M41株含量可达到106.50EID50/0.1 m L。接种后孵育温度为36.5℃时,每胚收获量比37℃培养增加了1.0～1.2 m L。按照此工艺生产病毒制备疫苗免疫SPF鸡,NDV和IBV抗体均符合国家标准要求。试验探索并优化了La Sota株和M41株在低免疫鸡胚中同胚接种的培养条件,为大规模抗原生产提供数据支持。 相似文献
18.
《中国兽医杂志》2015,(3)
为了解麻黄肉种鸡蛋清中内源性禽白血病病毒(内源性ALV)的分布情况,从广东某麻黄肉种鸡场采集1 038份蛋清,经ALV p27抗原ELISA检测出30份阳性蛋清;将阳性蛋清同时接种DF1和CEF细胞,培养7 d后,p27抗原ELI-SA检测到13份样品为DF1-CEF+;以这13份CEF+细胞培养物的基因组DNA为模板,经PCR扩增克隆测序最终得到了1株内源性ALV前病毒序列。将经ELISA、PCR和IFA等方法鉴定的该内源性ALV命名为HN1301株。基于遗传分析表明,HN1301株的前病毒基因序列与已知的E亚群毒株ev1、SD0501的相似性均为99.4%。表明该麻黄肉种鸡品系中存在有复制能力的内源性ALV,因而易干扰基于p27抗原的ELISA检测;本研究对于麻黄肉种鸡禽白血病的防控与净化有参考价值。 相似文献
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《中国预防兽医学报》2017,(3)
为了解贵州省9个地方品种鸡群中禽白血病病毒(ALV)流行株亚型与分子特征,本研究2016年从该省8个地区9个地方品种鸡群共采集380份鸡蛋样品。采集卵白用ELISA试剂盒检测ALV-P27抗原,阳性卵白接种CEF和DF1细胞分离病毒,培养7 d后检测细胞培养液中ALV-P27抗原,对感染细胞cDNA以4对ALV特异性引物进行PCR鉴定与分型。并选取9个鸡群的部分ALV分离株进行gp85基因的克隆测序与序列分析。结果表明,9个鸡群的卵白样品ALV-P27抗原阳性率为0~36%;阳性卵白的CEF和DF1细胞培养上清P27抗原检测结果相同,阳性率为26.8%(15/56),并鉴定出其亚型全部为J亚型(ALV-J)。已测序的21株ALV-J gp85基因序列与国内外ALV-J参考株同源性为86.6%~100%;进化树分析显示,21株ALV-J分离株在不同的分支,其进化关系和来源之间未发现明显规律。本研究表明,贵州省9个地方品种鸡群有6个存在ALV-J感染。其中,3个当地培育的品种鸡ALV感染率为0;而来自3个地区的绿壳蛋鸡ALV-P27抗原阳性率普遍较高(26.7%~36.0%)。本研究补充了我国禽白血病流行病学的数据并为该病的防制提供了调查依据。 相似文献