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1.
为了解副猪嗜血杆菌病在贵州对猪群的危害和流行规律、进一步开展副猪嗜血杆菌病的防治研究提供参考依据,特进行副猪嗜血杆菌PCR检测方法的建立与初步应用研究。根据副猪嗜血杆菌（HPS）16S rRNA基因序列设计1对引物,通过优化组合试验,对贵州省分离的HPS进行PCR扩增,扩增出长为650bp的目的基因片段,而大肠埃希氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、猪链球菌、葡萄球菌等扩增结果为阴性。采用该方法对贵州发病猪群中350头疑似病例进行PCR检测,检出率为8％～49％。该方法检测副猪嗜血杆菌敏感性高、特异性好,可用于副猪嗜血杆菌的快速诊断。 相似文献
2.
本试验应用PCR方法及PCR-RFLP技术对aroA基因在副猪嗜血杆菌病原检测及基因分型中的作用进行探讨。以针对aroA基因的PCR引物成功检测出18株来自广西各地区猪场的副猪嗜血杆菌,敏感性检测结果表明,该PCR方法可检测的最低菌数为102个。对该18株副猪嗜血杆菌进行aroA基因的序列测定,并进行aroA基因的酶切位点分析,筛选出Hind Ⅲ和FokⅠ两种限制性内切酶,利用PCR-RFLP技术对1株血清5型参考菌株与本研究中18株广西菌株aroA基因的完整编码序列进行Hind Ⅲ和FokⅠ限制酶谱分析,结果显示可分为与毒力相关的3种谱型。本研究结果表明,应用PCR方法及PCR-RFLP技术对副猪嗜血杆菌进行检测分析有助于更好地研究副猪嗜血杆菌的生物学特性及aroA基因的功能。 相似文献
3.
副猪嗜血杆菌PCR快速诊断方法的建立 总被引：7，自引：0，他引：7
副猪嗜血杆菌营养要求比较苛刻,常规生化试验检测方法比较烦琐,本研究针对副猪嗜血杆菌16SrRNA基因特异性PCR引物序列,合成一对PCR引物,建立相应的PCR检测方法,同时对该方法的灵敏性、特异性等实验。结果显示可检测出浓度为2．8×10^3CFU／mL的副猪嗜血杆菌表明该方法灵敏度高;对大肠杆菌、链球菌、巴氏杆菌、沙门氏杆菌、金黄色葡萄球菌进行PCR扩增均不获得任何条带,表明该方法特异性较强。所以该方法对于临床快速检测副猪嗜血杆菌具有重要意义。 相似文献
4.
中国东南部地区副猪嗜血杆菌分离株ERIC-PCR指纹图谱分析 总被引：2，自引：0，他引：2
采用肠杆菌基因间重复一致序列PCR方法,在对15种副猪嗜血杆菌血清型参考株鉴定获得15种不同ERIC-PCR指纹的基础上,对分离自中国东南部发生Glasser's病的不同猪场的111株副猪嗜血杆茵进行了指纹鉴定.结果显示:111株分离株显示出23种指纹图谱,前3种最流行的指纹图谱为ERIC-PCR X X(20/111),X X ⅢⅠ(9/111)和Ⅳ(8/111).且在111株分离株中,来自不同地区的分离株分别表现出不同种类的指纹图谱.该试验表明,ERIC-PCR方法可适用于对某一地区的副猪嗜血杆菌进行分子流行病学的研究和基因型的鉴定;试验结果还揭示了副猪嗜血杆茵在中国东南部地区已广泛存在并具有多样的基因型. 相似文献
5.
副猪嗜血杆菌PCR检测方法的建立及应用 总被引：1，自引：0，他引：1
为建立一种快速鉴别诊断副猪嗜血杆菌的方法,本试验针对副猪嗜血杆菌infB基因序列,利用Premier5.0软件设计并合成了1对特异性引物,建立了针对副猪嗜血杆菌的PCR鉴别诊断方法,优化了退火温度,检测了该方法的敏感性和特异性,结果表明,本试验建立的PCR检测方法的最佳退火温度为49℃。敏感性试验表明,该PCR检测方法最低能检测到的DNA浓度为18.1×10-6μg/mL。通过特异性试验表明,本方法仅可由副猪嗜血杆菌中扩增出特异性条带,在金黄色葡萄球菌、沙门氏菌等病原菌中扩增不出相应的条带,表明该方法具有较高的特异性。同时,通过对本方法检测出的阳性样品infB序列分析发现,与GenBenk中公布的副猪嗜血杆菌infB序列同源性均在98.2%~99%。表明建立的方法灵敏度高、特异性强,可以应用于副猪嗜血杆菌的实验室诊断。 相似文献
6.
用PCR技术对华南地区分离的17株不同血清型副猪嗜血杆菌菌株ompP2基因进行克隆鉴定,并以CLUSTALS1和PHYLIP-3.68软件将ompP2基因序列进行比对和遗传进化分析.17株副猪嗜血杆菌茵株中均能扩出ompP2基因,克隆测序结果发现ompP2基因大小有所不同,与参考序列ABKM01000007的同源性在92％～99％之间.序列比较结果显示,ompP2基因与GenBank公布的副猪嗜血杆茵全基因组测序中的ompP2基因序列具有较高的同源性,不同菌株ompP2基因序列大小存在差异,为进一步验证ompP2蛋白的功能及相关研究奠定了基础. 相似文献
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副鸡嗜血杆菌PCR检测方法的建立 总被引：2，自引：0，他引：2
参照GenBank中已发表的副鸡嗜血杆菌血凝素（HA）基因设计合成了一对引物，预计扩增片段大小约为412bp。利用这对引物，通过对PCR反应体系和反应条件的优化，建立了针对副鸡嗜血杆菌的PCR检测方法。结果表明，该方法敏感性较高，最低可检出1．7×10^4CFU／mL的副鸡嗜血杆菌，对副猪嗜血杆菌、巴氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌在相同反应条件下未扩增出任何片段，说明该方法具有较好的特异性。 相似文献
9.
猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌复合PCR检测方法的建立 总被引：2，自引：0，他引：2
目的建立可以同时检测猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的快速而可靠的PCR检测方法。方法和结果根据胸膜肺炎放线杆菌的Apx-VIA基因序列、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的16SrRNA基因序列设计5条引物。猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌模板的PCR扩增产物大小分别为342bp,485bp和1258bp。复合PCR对1～12型猪胸膜肺炎放线杆菌标准株,6株多杀性巴氏杆菌标准株,1～15型副猪嗜血杆菌以及25株经生化鉴定确认为上述三种细菌的分离株的基因组DNA作为模板进行检测,均获得预期大小的扩增产物。以猪放线杆菌、吲哚放线杆菌等14种常见细菌作为阴性对照进行PCR检测,结果仅有支气管败血波氏杆菌产生了可以和上述三个特异性条带明显区分的PCR产物。复合PCR针对胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的敏感性分别为14pg、34pg和37pg。结论本研究建立的复合PCR特异性好,敏感性高,可以用于猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的快速检测。 相似文献
10.
《动物医学进展》2021,42(4)
为了分析安阳地区副猪嗜血杆菌分离株耐药性及耐药基因携带情况,采集患病猪的肺脏、脾脏、肝脏、关节渗出液等病料组织157份,分离得到了102株副猪嗜血杆菌。采用KB药敏纸片法和PCR法分别检测副猪嗜血杆菌分离株的耐药性和耐药基因。结果显示,分离的102株副猪嗜血杆菌对青霉素、阿莫西林、庆大霉素等10种的耐药率在44.1%以上,其他药物的耐药率为9.8%～26.5%,耐11、10、9种药物菌株最多,分别占分离菌株的17.6%、21.6%、20.6%;分离的102株副猪嗜血杆菌耐药基因TetA、TetB、floR、ermA、lnu(C)检出率为41.2%～85.3%,其他耐药基因检出率11.8%～13.7%。说明从安阳地区分离的102株副猪嗜血杆菌耐药性严重,携带多种耐药基因。 相似文献
11.
Palzer A Ritzmann M Hafner-Marx A Wolf G Heinritzi K 《DTW. Deutsche tier?rztliche Wochenschrift》2006,113(6):227-230
In routine diagnostic it is difficult to detect a Haemophilus parasuis infection causing a polyserositis. In the presented study, a detection method by means of PCR, from collective swabs of the serosal surfaces from animals, with and without fibrinous serositis, was investigated. A significant association was detected between post mortal findings of fibrinous serositis and molecular biological detection of Haemophilus parasuis and Mycoplasma hyorhinis. However, no significant association existed between cultural detection of Haemophilus parasuis in bronchoalveolar lavage fluid and pathological-anatomical ascertainable fibrinous serositis. A significant association between Haemophilus parasuis and Mycoplasma hyorhinis could be determined in the animals that were included in this study. 相似文献
12.
副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药敏试验 总被引：6，自引：3，他引：3
对广东15个送检的疑似猪传染性副猪嗜血杆菌病的病猪样品,用TSA培养基进行细菌的分离,并对分离菌株进行细菌的形态观察、培养特性和生化试验鉴定,以及用副猪嗜血杆菌16S rRNA基因的特异性引物进行PCR鉴定。试验结果表明,有7株分离菌株扩增出了821 bp的特异性目的条带,结合形态观察、培养特性和生化试验鉴定,结果表明成功分离到了7株副猪嗜血杆菌;药敏试验结果显示,分离菌株对氨苄西林、多粘菌素、庆大霉素等药物较敏感。 相似文献
13.
Jung K Ha Y Kim SH Chae C 《The Journal of veterinary medical science / the Japanese Society of Veterinary Science》2004,66(7):841-845
DNA extraction and nested polymerase chain reaction (PCR) were developed for the detection of Haemophilus parasuis from formalin-fixed, paraffin-embedded tissues. The results for nested PCR were compared with those determined by in situ hybridization. The optimal results obtained show that use of xylene deparaffinization, digestion with proteinase K followed by nested PCR is a reliable detection method. A distinct positive signal was detected in 20 pigs naturally infected with H. parasuis by in situ hybridization. The rate of agreement between nested PCR and in situ hybridization for the detection of H. parasuis in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues was 100%. The nested PCR could be applied successfully to formalin-fixed, paraffin-embedded tissues for the detection of H. parasuis with bacterial isolation. 相似文献
14.
副猪嗜血杆菌分离鉴定及药敏试验 总被引：1，自引：0，他引：1
副猪嗜血杆菌能够引起猪的多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎等,是影响猪的最重要细菌之一,目前在所有的主要养猪国家均有存在。为了弄清河南省副猪嗜血杆菌病流行情况,2012年-2015年,从河南不同地区猪场送检的疑似病料,进行副猪嗜血杆菌分离和鉴定,共分离到5株细菌,通过细菌形态观察、培养特征鉴定、生化试验、PCR检测,鉴定为副猪嗜血杆菌,分别命名为A6-fei、C3-xin、C12-xin、D2-fei和E1-fei。采用纸片扩散法,对分离5株副猪嗜血杆菌进行药敏试验,其结果表明所分离的5株副猪嗜血杆菌的药物敏感性不尽相同,各分离菌株对头孢噻肟、氟苯尼考星最敏感,对复方新诺明敏感性最差,其中菌株C3-xin对复方新诺明、庆大霉素、卡那霉素、青霉素完全耐药。表明副猪嗜血杆菌病在河南省依然存在,并且不同地区菌株对常用药物的敏感性各不相同,应当引起养猪场重视。 相似文献
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乳胶凝集试验快速检测副猪嗜血杆菌 总被引：1，自引：0，他引：1
利用原核表达并经过纯化的副猪嗜血杆菌TbpB N端蛋白及人工合成的特异性多肽制备单克隆抗体,经碳化二亚胺(EDC)将纯化后的单克隆抗体IgG与羧化乳胶共价偶联,并对偶联乳胶的IgG含量及偶联时间等条件进行合理选择,建立了快速检测副猪嗜血杆菌的乳胶凝集试验方法.利用LAT方法检测148株副猪嗜血杆菌疑似菌株,参考16 S rRNA-PCR方法的结果,符合率为83.1%,且致敏乳胶不与临床常见菌株发生凝集反应.结果表明,此检测方法具有操作简便、快速、特异性高的特点,便于在基层推广使用,为副猪嗜血杆菌的诊断和有效防治提供了参考和依据. 相似文献
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