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【目的】 筛选猪链球菌血清3型疫苗候选菌株,制备猪链球菌3＋9型二价灭活疫苗并评估其在BALB/c小鼠上的免疫保护效果。【方法】 从发病猪病料中分离猪链球菌血清3型菌株,通过蜡螟幼虫和BALB/c小鼠模型筛选出强毒株作为疫苗候选菌株,并对候选菌株进行生物学特性研究。将筛选得到的3型疫苗候选菌株和前期筛选的9型疫苗候选菌株灭活浓缩,使其抗原浓度为2×1010 CFU/mL,无菌检测后将浓缩抗原液按1：1配比混合,再混合抗原与Summit Poly Solution佐剂按4：1比例混合,制备猪链球菌3＋9型二价灭活疫苗,疫苗中猪链球菌血清3和9型含菌量均为2×109 CFU/mL。将制备的疫苗免疫6周龄BALB/c小鼠,首免后第14天进行二免,二免后第14天进行攻毒。同时设立商品化疫苗免疫组和阴性对照组,评估疫苗的安全性和免疫保护效果。【结果】 PCR鉴定结果显示,23株临床分离株均为血清3型猪链球菌,依次命名为KQ3-1~KQ3-23。分别通过蜡螟和小鼠进行初筛和复筛,筛选到强毒株KQ3-1。毒力基因检测显示,该菌株基因型为gapdh＋/sly＋/fbps-/orf2-/mrp-/89K-/gdh＋/epf-;生长曲线显示,该菌株在37 ℃培养8~10 h时生长达到对数生长后期;BALB/c小鼠致病性结果显示,腹腔接种12 h内可引起小鼠精神萎靡、扎堆、毛发耸立、运动迟缓、死亡等临床症状,该菌株的LD50为5.2×107 CFU/只。制备的疫苗免疫小鼠后,小鼠精神状况、采食等均正常,疫苗注射部位无肿胀、硬块等不良反应,无死亡发生,表明该疫苗具有良好的安全性。免疫后进行猪链球菌血清2型菌株ZYS、猪链球菌血清3型菌株KQ3-1和猪链球菌血清9型菌株YT攻毒,对照组死亡率分别为90%、100%和100%,猪链球菌3＋9型二价灭活疫苗免疫组保护率分别为30%、80%和70%,商品化疫苗组的保护效果分别为70%、0和10%。【结论】 本研究研制的疫苗能对猪链球菌血清3和9型强毒株提供良好的免疫保护,该疫苗具备疫苗市场开发的潜在价值。 相似文献
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猪链球菌病病原分离及多价灭活苗的研制 总被引：2，自引：0，他引：2
近几年来我们发现,有些猪场各类猪群接种链球菌疫苗后,仍然发生大批链球菌病。经过分析发现免疫用的疫苗抗原菌群与当时流行的菌群不符。综合近年国内报到,目前该病的链球菌存在C群、D群、L群、及E群等,其中主要是C群和D群。因此,仅采用目前生产的C群疫苗解决不了本病的预防问题。本文以近年来分离的常见血清型猪链球菌强毒株,进行猪链球菌病多价灭活疫苗的研究。现报告如下:1材料与方法1.1病原分离、鉴定1.1.1病例:选取本地兽医站门诊防治的典型猪链球菌病病例,按其临床症状及特征可分为以下四种类型。败血症型———患猪体温可升高到40… 相似文献
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猪链球菌-副猪嗜血杆菌二联亚单位疫苗在小鼠的免疫效力分析 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究旨在开发一种用于防制猪链球菌病和副猪嗜血杆菌病的新型二联基因工程疫苗,并对其免疫效应进行评价.选择猪链球菌2型蛋白溶血素SLY、HP0197和副猪嗜血杆菌外膜蛋白D15和HPS06257 4种蛋白,重组表达并纯化,添加一定比例的佐剂制成含有不同组分的亚单位疫苗.研究表明该二联亚单位疫苗及各单苗能够引起小鼠良好的体液免疫,并能保护机体分别抵抗致死剂量猪链球菌2型(SS2)和副猪嗜血杆菌(HPS)强毒株的攻击.此外,调理吞噬试验表明疫苗高免血清能够有效杀死细菌,并赋予机体被动抵抗SS2和HPS感染的能力.研究证实制备的猪链球菌-副猪嗜血杆菌二联亚单位疫苗在小鼠具备良好的免疫保护效力. 相似文献
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将150只BALB/c小鼠随机分成5组。用猪链球菌2型pET32a-Sly、pET32a-38ku和pET32a-Sly-38ku表达的重组蛋白制备的疫苗,以及猪链球菌2型全菌灭活疫苗分别免疫A、B、C、D组小鼠,E组为生理盐水对照。首免后第2周加强免疫1次,二免后第2周,用致死量强毒猪链球菌2型四川分离株和江苏分离株以及马链球菌兽疫亚种安徽分离株攻毒,观察攻毒后对小鼠的免疫保护率。结果,A组与C、D组对猪链球菌2型感染的保护率差异显著（P〈0.05）,而C组与D组之间保护率无显著差异;A、B、C、D组之间对马链球菌兽疫亚种安徽分离株感染的保护率差异不显著;各免疫组的保护率极显著高于对照组。结果表明,3种重组疫苗具有良好的免疫原性,能对强毒株猪链球菌2型的攻击感染起到保护作用。 相似文献
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对来自广西边境地区部分发病猪场及屠宰场的370份猪组织进行细菌分离鉴定,共分离到16株链球菌,对这16株链球菌进行了形态学观察、PCR鉴定及小鼠致病性试验。结果表明,其形态、染色、生化特性均符合猪链球菌的特点,通过GDH鉴定与测序,证实这16株菌株均为猪链球菌,分别命名为GX1~GX16。通过特异性引物PCR分型（35个血清型）,其中有1株为1型,1株为2型,1株为5型,1株为29型,5株为8型,7株未分出型。用这16株猪链球菌对昆明小鼠和BALB/c小鼠进行动物致病性试验,结果发现,菌株GX10对昆明小鼠和BALB/c小鼠致死率均为100%;菌株GX11对BALB/c小鼠致死率为80%;其他菌株对昆明小鼠和BALB/c小鼠均无致病性。菌株GX10、GX11对BALB/c小鼠的LD50分别为4.5×105和3.6×109 CFU。本试验结果表明,广西边境地区存在致病性猪链球菌8型。BALB/c小鼠对猪链球菌的敏感性高于昆明小鼠,更适合作为猪链球菌致病性研究的动物模型。 相似文献
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采用链球菌C群、猪链球菌2型、巴氏杆菌荚膜A群、巴氏杆菌荚膜B群等强毒株,经培养后灭活,加氢氧化铝胶制成猪链球菌、巴氏杆菌二联四价灭活疫苗,将制备的疫苗进行安全性及效力试验。结果显示,制备的疫苗对猪、兔安全,对小鼠8/10或以上保护,对猪4/5或以上保护。表明制备的疫苗安全有效,能够抵抗猪链球菌、巴氏杆菌强毒的攻击。 相似文献
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致病性猪链球菌2型的病原分离鉴定及毒力因子的PCR检测 总被引：6，自引：3，他引：3
通过对广西某猪场急性死亡的猪进行病原分离,分离到革兰氏阳性球菌,用链球菌快速鉴定试剂条Rapid ID 32 Strep鉴定为猪链球菌2型;并对分离菌进行猪链球菌2型荚膜多糖抗原（cps2J）及其重要毒力因子溶菌酶释放蛋白（MRP）、细胞外蛋白因子（EF）和溶血素（SLY）的多重PCR检测,同时对cps2J基因进行序列测定,与GenBank发表的猪链球菌2型相比,同源性为98.8%,毒力因子MRP、EF和SLY检测均为阳性,证实广西某猪场急性死亡的猪为高毒力猪链球菌2型感染所致。动物试验中,该菌可引起小白鼠部分死亡,家兔体温最高升至40.3℃,最后败血而死。 相似文献
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通过采用实验室研制的猪链球菌病灭活疫苗(2型,HA9801株)对猪的免疫攻毒试验,以及对免疫后不同时间血清抗体的检测等研究试验,制定了最佳免疫程序,证明了该疫苗对猪有较好的免疫保护力;检验用猪品系的筛选,结果显示广东两种土种猪敏感可靠;攻毒用强毒株的筛选,试验结果表明,使用SC-6株为攻毒菌株,结果呈现规律性。 相似文献
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非洲猪瘟病毒基因缺失疫苗株的构建和免疫保护特性 总被引：1，自引：0，他引：1
《中国兽医学报》2019,(8):1421-1427
以我国首例非洲猪瘟疫情中分离的流行毒株(SY18)为亲本株构建了多基因家族(MGF)基因和CD2v基因缺失的非洲猪瘟病毒基因缺失疫苗候选株,针对基因缺失株的安全性和免疫保护效果进行了特性研究。结果显示,MGF和CD2v双基因缺失株(ASFV SY18ΔMGF/ΔCD2v)对猪安全,接种猪能够100%抵抗亲本强毒株SY18株的攻击,对照猪全部死亡;说明该毒株可作为非洲猪瘟疫苗候选株。 相似文献
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为筛选满足猪圆环病毒2型灭活疫苗制苗要求的毒株,选择河南省8个地区的8株猪圆环病毒2型分离株进行抗原性分析,将各分离株培养后用不同滴度的病毒原液和其分别稀释至同一滴度(4.233×104拷贝/μL)的病毒液分别制成油佐剂灭活疫苗,免疫小鼠后采血测定其抗体动态水平,以进行免疫效力评价。结果显示,8株圆环病毒2型分离株中8#和12#分离株原液制备的疫苗免疫后诱导产生的抗体水平较高,二免后1周抗体水平即高于1∶800,达到猪圆环病毒2型灭活疫苗的国家质量标准要求,3周时达到高峰,比对照商品疫苗诱导产生的抗体水平更高;其分别稀释130倍和463倍后制备的疫苗诱导产生的抗体水平在二免后3周也能达到1∶800。提示,猪圆环病毒2型8#和12#分离株毒价高,免疫效力良好,是理想的疫苗候选株。本研究丰富了猪圆环病毒2型灭活疫苗毒株的种毒资源,为研制高质量的猪圆环病毒2型疫苗奠定了基础。 相似文献
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为了探索中越边境地区防控人感染猪链球菌的有效模式，试验选取3个猪场作为猪链球菌病免疫场和非免疫场，运用PCR和ELISA方法评估猪场免疫防控猪链球菌2型的效果，即选择边境地区东兴市、大新县和那坡县作为猪链球菌2型免疫示范区，对猪群接种猪链球菌2型疫苗后监测屠宰场和免疫场的猪链球菌2型抗体水平，以及通过培训等方式对普通群众和密切接触的相关人员普及猪链球菌病防控知识，并调查了免疫示范区人感染猪链球菌的情况。结果表明：免疫场猪群在免疫猪链球菌2型疫苗2次后产生较高的抗体水平，能极显著降低猪链球菌的感染率(P<0.01)。2016—2020年免疫示范区东兴市、大新县和那坡县猪链球菌2型疫苗免疫平均密度达到73.24%,免疫场猪链球菌2型抗体水平合格率为93.37%。3个县(市)实行免疫后，连续5年人感染猪链球菌数为0。说明在猪场进行猪链球菌2型疫苗免疫，能有效阻止猪群感染猪链球菌；在中越边境建设猪链球菌免疫示范区，通过加强疫苗免疫、抗体监测及防控培训切断了猪链球菌传人的途径，实现了人员零感染猪链球菌。 相似文献
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猪瘟病毒广西地方流行株GX-3/98的致病性及其与兔化弱毒株的免疫相关性 总被引：1，自引：0，他引：1
从广西南宁某猪场分离1株病毒（GX-3/98）,通过RT-PCR扩增出猪瘟病毒约250 bp的E2基因主要抗原编码区,与猪瘟石门系强毒株及兔化弱毒株核苷酸序列同源性分别为80.6%和81.1%,属于基因Ⅱ群,subgroup 2.1亚型。该毒株经本动物传3代,均不表现典型的猪瘟临床症状。用猪瘟兔化弱毒疫苗免疫后,以此分离病毒攻毒,进行免疫保护相关试验,结果免疫组100%（2/2）获得保护,且在攻毒前、后扁桃体HCFA检测均为阴性。对照组（非免疫猪）攻毒后50%（1/2）死亡,另1头猪耐过。扁桃体HCFA检测,于攻毒后1周开始出现阳性结果,且一直持续到猪死亡的第79天。本试验结果初步表明,我国现行使用的猪瘟兔化弱毒苗对目前猪瘟病毒流行毒株仍具有良好的保护力。GX-3/98流行株为1株毒力较低的猪瘟病毒,能够长时间散毒。 相似文献
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新城疫病毒广西分离株F基因的克隆和序列分析 总被引：4，自引：1，他引：4
根据GenBank中登录的新城疫病毒(NDV)F基因序列设计了2对引物，对从广西分离的10株NDV毒株的F基因进行了分段扩增和序列测定，其基因序列全长均为1662bp，编码553个氨基酸，均有6个潜在的糖基化位点。将其F基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列与已发表的10株NDV参考株的F基因序列进行了比较。结果表明，核苷酸序列的同源性为82．6％～98．1％，氨基酸的同源性为87．7％～98．7％。这10株NDV广西分离株在裂解位点的氨基酸序列(^112R—R—Q—K／R—R—F^117)与NDV强毒株特征相符合。系统发育树、酶切位点分析和基因分型结果表明，10株NDV广西分离株中GX1／00、GX2／00、GX4／00、GX6／02、GX7／02、GX9／03、GX10／03和GX11／03为基因Ⅶd亚型，GX3／00和GX5／00为基因Ⅲ型。 相似文献
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为了解猪2型链球菌的致病性强弱、生长繁殖特性及耐药性变化,试验通过细菌分离鉴定、生化试验、生长曲线、OD_(600)值与其活菌数相关性曲线、药敏试验、小鼠致病性试验、病理组织学观察等方法对分离得到的猪2型链球菌进行研究。结果表明:病猪体内分离得到的链球菌经鉴定为猪2型链球菌,将其命名为TA01株;TA01株在6～8 h繁殖达到最高峰,8 h后活菌数逐渐下降;活菌数和OD_(600)值的相关性方程为y=24.659x-1.076 1,R~2=0.996 7;TA01株对青霉素、红霉素、氟苯尼考、苯唑西林敏感,对环丙沙星、多黏菌素B、克林霉素耐药;小鼠致病性试验显示,3.6×10~9cfu/只组的10只小鼠在48 h内全部死亡,且死亡小鼠呈急性脓毒败血症病变,通过Reed-Muench公式计算TA01株的LD_(50)为1.137×10~8cfu/只;病理组织学检查可观察到明显的蓝染菌团,且伴有明显的中性粒细胞浸润。说明TA01株为猪2型链球菌强毒株,与我国已分离报道的链球菌菌株相比,TA01株具有毒力强、增殖快的特性。 相似文献
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重庆地区表观健康猪中猪链球菌的检测 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究旨在调查重庆地区表观健康猪的猪链球菌带菌情况,并揭示健康猪群携带猪链球菌的公共卫生学意义。随机采集重庆市17个区县(市)定点屠宰场表观健康猪的腭扁桃体1 360份,进行猪链球菌的分离鉴定,并对致病性较强的1、2、7、9、14型及1/2型进行分型与毒力因子分析。结果共分离到225株猪链球菌,分离率为16.54%;检出猪链球菌2型4株,猪链球菌7型3株,猪链球菌9型3株,猪链球菌1/2型1株;毒力因子谱分析发现多数(10/11)分离株缺失部分毒力因子,但也存在具有全部已知毒力因子的强毒株,且在国内首次检出小片段mrp型猪链球菌1/2型1株和7型2株。结果提示,重庆地区健康猪群带菌现象普遍,且流行菌株具有与国外不同的特点,对屠宰场工作人员健康造成威胁。 相似文献