鹅细小病毒NS1基因的克隆及原核表达   总被引：4，自引：0，他引：4  

王君伟  李勐  马波  布日额  刘宝全  Ulrich Neumann 《中国兽医杂志》2004,40(1):10-13

本研究根据GenBank发表的GPVB株全基因核苷酸序列，设计了1对用以扩增GPV主要非结构蛋白NS1基因的引物。通过PCR技术，扩增出NS1完整基因片段1．9kb。将PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行序列测定及分析，结果表明：GPV H1株NS1基因全长1884bp，编码627个氨基酸，与国外已发表的B株核苷酸序列同源性为98．15％。同时将该目的基因正向插入到GST融合蛋白原核表达载体PGEX-6P-1的BamH1多克隆位点，构建了GPV NS1的原核表达载体，成功的表达了约97KD的NS1融合蛋白。  相似文献   

鹅细小病毒VP1基因的克隆及序列分析   总被引：5，自引：0，他引：5  

马波王君伟  李洪涛刘宝全 《中国兽医科技》2003,33(12):7-10

参照GenBank中收录的鹅细小病毒(GPV)B株基因序列设计并合成了扩增GPV H1株VP1的1对引物，利用PCR技术扩增出长约2．2kb的目的片段，将其克隆到pMD 18-T载体上，进行了序列测定及分析。测序结果表明，GPV H1株VP1基因由2199个核苷酸组成，编码732个氨基酸。经与B株、YG株进行同源性比较，核苷酸的同源性分别为98．50％和93．18％；推导的氨基酸同源性分别为98．09%和95．77％。  相似文献   

鹅细小病毒主要结构蛋白VP3基因的克隆与序列分析   总被引：6，自引：1，他引：5  

田丽红  贾永清  王君伟  李一经 《中国预防兽医学报》2002,24(6):418-420,415

将GPV H2分离株接种于13日龄非免疫鸭胚，收集接毒后3－7日死亡鸭胚的尿囊液。纯化病毒，通过PCR技术，从病毒基因组DNA中扩增出病毒衣壳蛋白VP3完整基因片段，经酶切鉴定后直接与pMD 18-T质粒载体连接，转化感受态大肠杆菌TG1。提取重组质粒经PCR鉴定和酶切鉴定后，对插入片段进行序列测定及分析。结果表明；鹅细小病毒H1分离株VP3基因全长1605bp,编码534个氨基酸，与国外已发表的鹅细小病毒B株核苷酸序列同源性为98．5％，氨基酸序列同源性为98．3％，表明这二个毒株亲缘关系相近。  相似文献   

猪细小病毒Z株NS部分基因的扩增及序列分析   总被引：5，自引：1，他引：4  

崔尚金  符芳宋波李媛  韩孝成 《中国兽医科技》2003,33(9):19-22

从猪细小病毒Z株提取基因组DNA，利用PCR扩增部分基因，并对该扩增片段进行测序与分析。结果表明，扩增的NS基因长330bp，编码109个氨基酸。氨基酸序列中含有猪细小病毒的重要保守序列。并有1个潜在的糖基化位点NFSN。Z株NS基因与其他猪细小病毒Kresse、NADL2-2、NADL2-1株的核苷酸同源性分别为99％、98％、98％，氨基酸同源性均为99％。  相似文献   

鸡传染性支气管炎病毒中国地方分离株S1基因5''端的变异   总被引：3，自引：0，他引：3  

任涛  廖明  罗开健  曹伟胜  辛朝安 《中国兽医学报》2002,22(1):7-9

对自海南海省、广西省发生鸡传染性支气管炎（IB）鸡群分离的4株IBV分离株（HaN-1/95、HaN-2/95、GX-1/98、GX－2／98）的主要免疫原纤突蛋白S1基因经RT－PCR扩增其5'端的1．2kb的目的片段，将其插入载体pMD 18-Tk ,在大肠杆菌中实现目的的基因的克隆。对克隆的目的基因经限制性酶切分析及PCR鉴定后，以双脱氧链终止法测定其核苷酸序列，并与GenBank中的参考毒株（H120、SD－1／97和Holte）相应序列作比较，分析其同源性。结果表明，HaN-1/95、HaN-2/95、GX-1/98及SD－1／97与疫苗株H120的核苷酸序列同源性分别为99．5％、99．2％、97．9％和99．5％，其推导氨基酸序列同源性分别为99．1％、98．9％、96．9％和99．2％。GX－2／98与Holte株的核苷酸序列同源率为99．0％，其推导的氨基酸序列同源性为98．6％，而与其他中国分离株的核苷酸序列的同源性仅为70％左右，氨基酸序列的同源性仅为68％左右。  相似文献   

野鸭源H6N2亚型禽流感NS基因的克隆及序列分析     

张智明  李晓冰  华育平 《野生动物》2007,28(3):39-41,10

根据GenBank上已发表的H6N2亚型的非结构蛋白基因（NS）序列,设计一对特异性引物,成功从本实验室分离、保存的H6N2禽流感病毒分离株A／Mallard／SanJiang/151／06（H6N2）中克隆到NS基因序列。该克隆基因全长860bp,编码NS1和NS2两种非结构蛋白,与其他H6N2亚型的NS基因进行同源性比较,同源性为71．1％～97．2％,推导的氨基酸序列同源性为62．0％～94．6％。  相似文献   

番鸭细小病毒NS2基因的克隆和序列分析     

阮二垒  杨丽云  陈芳艳  陈瑞爱  王林川  季艳菊 《中国畜牧兽医》2010,37(2):62-66

本研究参考GenBank发表的MDPVFM株全基因序列,设计并合成一对引物,通过PCR技术扩增出MDPVS1株NS2基因,目的片段长约1.3 kb,将目的片段克隆到pMD18-T载体后进行序列测定和分析,结果表明,MDPVS1株NS2基因全长1357 bp,编码451个氨基酸,与国外已发表的MDPVFM株相比核苷酸序列同源性为99.26%,推导氨基酸序列同源性为98.23%。  相似文献   

鹅细小病毒H1株VP2基因的克隆和序列分析     

贺云霞  王君伟  王立群  贾永清 《中国预防兽医学报》2003,25(5):330-333

参考GenBank发表的鹅细小病毒(GPV)B株全基因序列，设计并合成一对引物，采用PCR方法对国内鹅细小病毒分离株H1(GPV-H1)株的结构蛋白VP2基因进行扩增，将扩增产物与pMD18-T载体连接并测序。结果表明：H1株VP2的核苷酸序列全长1764bp，编码587个氨基酸，与GenBarrk发表的GPV-B株、GPV-SHM株、GPV-YG株、番鸭细小病毒(MDPV)FRANCE株、FM株的VP2相比，核苷酸同源率分别为98．6％、96．2％、93．2％、80．3％、80．0％，推导氨基酸序列同源率分别为98．3％、97．5％、96．1％、88．2％、87．4％。  相似文献   

鹅细小病毒NS2基因的克隆和序列分析     

阮二垒  陈芳艳  陈瑞爱  王林川  杨丽云 《中国动物检疫》2009,26(10):32-33

参照GenBank发表的GPVB株全基因序列,设计并合成一对引物,通过PCR技术扩增出GPVS1株NS2基因,目的片段长约1.4kb,将目的片段克隆到pMD18-T载体后进行序列测定和分析,结果表明:GPVS1株NS2基因全长1356bp,编码451个氨基酸,与国外已发表的GPVB株相比核苷酸序列同源性为98.89%,推导氨基酸序列同源性为98.89%。  相似文献   

鹅细小病毒国内分离株主要结构蛋白（VP2—VP3）基因的克隆和序列分析   总被引：5，自引：0，他引：5  

李雪梅  章金刚等 《动物科学与动物医学》2001,18(3):31-34

根据国外已发表的鹅细小病毒（GPV）A株基因组核苷酸序列设计了一对引物，对国内两株鹅细小病毒毒株（GPV CC株）和（GPV FS株）主要结构蛋白（VP2－VP3）基因进行PCR扩增，并克隆到pCR3.1T载体,分别获得正向，反向连接重组持粒PVPC1，PVPC2和PVPF1，PVPF2，经酶切鉴定选出阳性克隆质粒并进行核苷酸序列分析比较，序列分析结果表明：GPV CC株和GPV FS株VP2－VP3的核苷酸大小分别为1764bp和1763bp，其中GPV CC株与A株同源性达到98．9％，GPV FS株缺失一个碱基，与A株同源性为93．5％，与GPV CC株同源性为93％。  相似文献   

鹅细小病毒QY分离株NS2基因的克隆及序列分析     

李福伟  李惠敏  张桂红  曹顶国 《水禽世界》2007,(8):6-8

参照GenBank中收录的鹅细小病毒(GPV)B株基因序列设计并合成了扩增广东清远分离株(QY株)NS2基因的一对引物,利用PCR技术扩增出来长约1.5kb的目的片断,将其克隆到PMD18-T载体上,筛选重组质粒并进行了序列测定及分析,测序结果表明,GPV分离株NS2基因由1356个核苷酸组成,编码451个氨基酸。经与B株、DN株、FS株进行同源性比较,核苷酸的同源性分别为99.1%、99%和99%;推导的氨基酸同源性分别为98.7%、98.7%和987%。  相似文献   

猫泛白细胞减少症病毒北京株NS1基因克隆与生物信息学分析     

刘琪  史利军  袁维峰  梁瑞英  李金祥  崔尚金 《中国畜牧兽医》2018,45(12):3327-3336

为分析猫泛白细胞减少症病毒（FPV）北京株（FPV-BJ 05株）NS1基因的分子特征及其编码蛋白的生物学功能,本研究对FPV-BJ 05株NS1基因进行PCR扩增、克隆及序列测定。应用生物信息学软件分析FPV-BJ 05株与GenBank上登录的11株FPV参考株NS1基因的同源性,并预测NS1蛋白理化性质、信号肽、跨膜结构、B细胞抗原表位、磷酸化位点、亚细胞定位及蛋白结构与功能、高级结构等。结果显示,NS1基因全长2 007 bp,编码668个氨基酸,且与其他FPV分离株NS1基因核苷酸序列同源性为98.8%~99.3%,氨基酸序列同源性为97.9%~98.8%。系统进化树分析结果显示,FPV-BJ 05株NS1蛋白与GenBank上登录的3株FPV参考株处于同一大分支,但由于氨基酸的突变导致其属于独立的一小分支。NS1蛋白既无信号肽也无跨膜结构域,属于非分泌型的疏水性蛋白。B细胞抗原表位预测结果显示,NS1蛋白柔韧性较好,抗原性及表面可及性较高,预测该蛋白含有13个优势抗原位点。修饰结构预测表明,NS1蛋白含有62个潜在磷酸化位点,27个O-糖基化位点和2个N-糖基化位点。亚细胞定位结果显示,NS1蛋白在细胞质和细胞核的概率较高,分别为69.6%和17.4%。NS1蛋白二级结构中α-螺旋、延伸链、无规则卷曲和β-转角分别占39.37%、15.42%、39.37%和5.84%。应用在线软件SWISS-Modle对NS1蛋白进行建模,预测其三级结构,结果发现NS1蛋白主要以α-螺旋为主。本试验结果将为北京地区FPV免疫诊断及核酸疫苗研究提供理论依据。  相似文献   

阿留申病毒强致病性毒株非结构蛋白基因的克隆及序列分析     

张瑞  李艳伍  许兰菊  贾贇  蒋大伟  张秀云  李炜  宋海霞 《中国动物检疫》2010,27(2):27-31

根据Genbank公布的全基因序列设计两对引物,利用PCR扩增技术,得到阿留申病毒非结构蛋白基因ADV-LN1、ADV-LN2,将其克隆至pMD18-T载体中进行序列测定,并与其它国内外毒株的非结构蛋白进行序列比较和分析。序列分析表明,同国外毒株相比核苷酸序列同源率NS1为87.8%～99.1%,NS2为87.7%～98.5%,NS3为85.4%～99.2%;氨基酸序列同源率NS1为82.5%～98.0%,NS2为81.6%～96.5%,NS3为78.2%～98.9%;与国内毒株相比核苷酸序列同源率NS1为91.5%～93.8%,NS2为93.0%～94.7%,NS3为93.5%～96.6%;氨基酸序列同源率NS1为87.4%～89.9%,NS2为87.7%～90.4%,NS3为88.5%～94.3%。系统进化树分析表明:国内流行毒株之间与欧美毒株之间,差异逐渐缩小,遗传变异趋势更加复杂。  相似文献   

Cytopathogenicity markers in the genome of Hungarian cytopathic isolates of bovine viral diarrhoea virus     

Bálint A  Baule C  Kecskeméti S  Kiss I  Belák S 《Acta veterinaria Hungarica》2005,53(1):125-136

Since genetic recombination is a major factor in the evolution of the cytopathogenic (cp) bovine viral diarrhoea virus (BVDV) biotypes, in this study the cytopathogenicity markers were investigated in the genomes of two cp BVDV strains recently isolated from mucosal disease (MD) cases in Hungary. In the genome of strain H4956, a Jiv-like insertion was found similar to those described in reference strain NADL and in other BVDV 1, BVDV 2 and border disease virus (BDV) strains. The 133 amino acid Jiv-like sequence is inserted at nucleotide position 4984 (amino acid position 1533), 9 nucleotides upstream of that of strain NADL. The insertion showed 96% amino acid sequence identity with the cellular Jiv protein. In the genome of cp BVDV strain H115/PCR, an ubiquitin-containing duplication was found. The duplicated sequence started at nucleotide position 7978 (amino acid 2531) in the NS4B gene. The duplication contained a complete ubiquitin monomer of 76 amino acids and the complete NS3 gene starting at nucleotide position 5153 (amino acid 1589), which corresponds to the first N-terminal amino acid of NS3. The duplication was located further downstream of the known ubiquitin-containing genomic regions of cp BVDV strains, and it consisted of the shortest inserted nucleotide sequence. The insertions and duplication of strains H4956 and H115/PCR further confirmed that recombinations occurring at positions A and B are the most common mechanisms leading to the development of BVDV cytopathogenicity.  相似文献   

三株广西狂犬病病毒NS基因和M基因的克隆与序列分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

韦友传  王卫华  黎铭  罗廷荣 《中国预防兽医学报》2005,27(5):365-368

本研究设计了一对特异性引物NSM1/NSM2,对三株广西狂犬病病毒NS和M基因同时进行了RT_PCR扩增、克隆和测序。同源性分析表明,三株广西野毒NS基因核苷酸同源性为87.2%~98.4%,M基因核苷酸同源性为90.1%~99.7%;与固定毒和狂犬病相关病毒比较,NS基因分别为79.9%~82.8%和69.7%~71.0%;M基因的分别为82.8%~87.8%和75.0%~77.8%。三株野毒NS基因氨基酸同源性为93.3%~98.7%,M基因氨基酸同源性分别为97.5%~100%。表明广西各地毒株之间亲缘关系不同,但最为相近;与狂犬病固定毒株亲缘关系较远;与狂犬病相关病毒亲缘关系最远。  相似文献   

鹅细小病毒河北流行株HBZF07 NS1基因的克隆与序列分析     

左玉柱  范京惠  张小波 《中国家禽》2007,29(19):22-24

鹅细小病毒HBZF07株经13日龄鹅胚增殖后收集尿囊液,提取病毒基因组总DNA,采用PCR方法,一次性扩增出与预期大小相符的特异性条带.将扩增产物提纯回收后克隆入pMD18-T载体,经转化、筛选及酶切鉴定后,对阳性克隆进行了序列测定和序列分析.测序后拼接的基因长1 892 bp,包含完整的NS1开放阅读框(1 884 bp),编码623个氨基酸.与GenBank中其它毒株的NS1基因核苷酸序列相比,同源性分别为DY(EF515837)98.4%,与B(GPU25749)为99.2%,与HG5/82(AY506546)为93.9%,与YG(AF416726)为93.9%,与SHM319(GPU34761)为97.0%.  相似文献   

Preliminary Study on a Novel Atypical Congenital Tremor of Piglets and Its Etiology     

ZHANG Wen-bo  WU Song-song  DENG Shun-zhou  ZHOU He-tian  ZHANG Zhi-qing  YANG Dan-feng  CAO Liang-liang 《中国畜牧兽医》2017,44(7):2147-2154

To investigate the infection of atypical porcine pestivirus (APPV) in China, autopsywas carried out for clinical suspected piglet of congenital tremor, viscera pathologic changes were observed. Two pairs of primersfor detection of the NS2-3 and NS5B genes by RT-PCR were designed according to the genome of APPV. The positive product was sequenced using DNAStar and Mega 7.0 softwares,and drawing the molecular evolution trees. The results showed that the lesions were similar to classical swine fever, but without infarction of the spleen and peripheral hemorrhage of the mandibular lymph node.Epidemic materials amplified products were consistent with the expected size, the sequences were APPV fragments by BLAST. APPV and other pestivirus belonged to two branch with the homologies about 70%. The homologies of NS2-3 and NS5B genes among the isolates and the APPV reference strains were about 76.9% to 98.8%, and the homologies of NS2-3 gene of 7 isolates were 89.7% to 94.8%,the homologies of NS5B gene of 12 isolates were 82.2% to 100.0%. This was the first report for the infection of APPV in piglets in China.  相似文献